食品微生物學(xué)實驗

1、食品微生物學(xué)實驗食品微生物學(xué)實驗實驗一 微生物培養(yǎng) 基的配制和滅菌實驗二 放線菌和真 菌形態(tài)的觀察實 驗 一微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌實驗?zāi)康膶嶒灢牧吓c試劑實驗程序滅菌與思考培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基配置步驟不同配方的培養(yǎng)基一、實驗?zāi)康牧私馀囵B(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法、加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。 （二）實驗材料和試劑藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO47H2O、FeSO47H2O 等。儀器：高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細菌過濾器、紫外線殺菌燈。

2、其它物品：天平、牛角匙、電爐、1N HCl、1N NaOH、pH試紙、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培養(yǎng)皿、吸管、各種包裝紙、牛皮紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。（三）實驗程序培養(yǎng)基的配制三種培養(yǎng)基的配方及配制培養(yǎng)基和玻璃器材的 滅菌方法據(jù)組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制成。 2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。 3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固

3、體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。 3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的種類據(jù)組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制成。 2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。 3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。 3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的種類常用凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、

4、凍粉。常用凝固劑培養(yǎng)基配制的基本步驟稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。調(diào)pH值：用1N NaOH或1N HCl調(diào)pH，用pH試紙對照。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補水。過濾分裝：注意不要污染棉塞。包扎成捆，掛上標(biāo)簽（必須用鉛筆寫），注明何種培養(yǎng)基。滅菌擺斜面滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)24h，確定無菌生長，方可使用。按培養(yǎng)基配方稱量加水加熱熔化調(diào)節(jié)pH值過濾分裝包裝滅菌檢查滅菌徹底與否分裝擺斜面培養(yǎng)基配制的基本步驟分裝擺斜面分裝擺斜面包扎培養(yǎng)基配制的基本步驟牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細菌，是一

5、種天然培養(yǎng)基）配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 氯化鈉 3g 瓊脂 20g 自來水 1000mL pH 7.27.4 滅菌 0.1MPa，2530min 培養(yǎng)基的配方及配制-1吸取 30牛肉膏 2mL；50蛋白胨 2mL；30氯化鈉 2mL；加入有刻度的搪瓷燒杯中，然后用自來水補足到200mL。用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào) pH 至7.4加瓊脂4g，加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試帶有棉塞的無菌試管，裝置15的試管高度共12支，作斜面培裝管。用鋁殼試管帽各裝10ML，越試管高度的12以上，用作分離時倒平板用。以配制200mL培養(yǎng)基為例：（30牛肉膏、50

6、蛋白胨，30 氯化鈉）用于活化菌種，或培養(yǎng)菌種的斜面用于保存菌種的斜面擱置斜面 當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至50左右時，將試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上。擱置的長度要合適，使培養(yǎng)基形成的斜面的長度不超過試管總長的一半。注：試管加棉塞(最好) 培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時，應(yīng)使棉塞長度的2/3在試管口內(nèi)，如下圖所示。培養(yǎng)基的配方及配制-2馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基），其配方如下： 去皮馬鈴薯 200g 蔗糖（或葡萄糖） 20g 自來水 1000mL 瓊脂 20g pH 自然 滅菌： （含蔗糖）0

7、.1MPa 20rain （含葡萄糖）01kgcm 30min 馬鈴薯須煮沸30min之后，要用紗布過濾。培養(yǎng)基的配方及配制-3淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號Gause1），用于分離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。 可溶性淀粉 20.0g KNO3 1.0g K2HPO4 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 7H2O 0.01g 瓊脂 20g 自來水 1000mL 滅菌： 0.1Mpa, 30min淀粉先用冷水調(diào)成糊狀，倒入煮沸的水中。 無菌水的制備 100mL三角燒瓶（裝有玻璃珠），裝自來水45.0mL，試管中裝9.0mL自來水，塞上棉塞，包扎、滅菌備用。三角

8、燒瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。清洗一些玻璃儀器：如三角燒瓶、試管、培養(yǎng)皿、吸管等。棉塞的制作包扎培養(yǎng)皿、涂棒和吸管等。 培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器加壓蒸汽滅菌法 其步驟如下： 1.加水：滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將用防水紙包扎好的物品放入其中。 2.通電：接通電源，進行加熱。 3. 排氣：排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm2時再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到0時再關(guān)閉排氣閥。 4.恒溫滅菌：當(dāng)壓力達15bl/in2（即1.05kg/cm2）時，此時滅菌器內(nèi)的溫度為1210C，維持30min

9、。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時間。 5.結(jié)束：滅菌時間一到，切斷電源，待壓力降至零時，才能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法間歇滅菌法： 待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，連續(xù)3d重復(fù)進行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時殺滅。過濾除菌法： 不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用細菌過濾器進行除菌。紫外線滅菌法： 一般30W燈管，9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌?；瘜W(xué)藥劑消毒滅菌： 微生物實驗室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞