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1、第十章 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究方法 本章內(nèi)容第一節(jié) 化學(xué)分析法第二節(jié) 消化實(shí)驗(yàn)第三節(jié) 代謝試驗(yàn)第四節(jié) 平衡實(shí)驗(yàn)第五節(jié) 飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)第一節(jié) 化學(xué)分析法一、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分析 三、動(dòng)物組織和血液理化成分分析二、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析作用:為判定動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)狀況、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需要和飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 分類(lèi):營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分析、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析及動(dòng)物組織和血液理化成分分析。一、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分析概念:應(yīng)用物理、化學(xué)原理和方法對(duì)飼料、動(dòng)物組織及動(dòng)物排泄物的某些成分,進(jìn)行定性、定量分析。 (1)水分 (2)粗蛋白(CP)真蛋白(TP) (3)粗脂肪(EE) (4)粗纖維(CF) (5)粗灰分 (6)無(wú)氮浸出物(NFE)1、概略養(yǎng)分分析一、
2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分析(1)維生素 (2)礦物質(zhì) (3)微量元素 (4)氨基酸 (5)脂肪酸 (6)純蛋白質(zhì) (7)糖等2、純養(yǎng)分分析一、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分析(1)飼料 (2)排泄物(糞、尿、呼出氣、皮屑等) (3)動(dòng)物組織 (4)血液 (5)整體動(dòng)物3、分析對(duì)象一、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分析(1)稱(chēng)量法 (2)比色法 (3)滴定法 (4)原子吸收法 (5)色譜法 (6)熒光法 (7)電泳 (8)分子生物技術(shù)4、分析方法一、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分析二、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析 抗?fàn)I養(yǎng)因子是指飼料中本身所有或從外界進(jìn)入,影響飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和動(dòng)物生長(zhǎng)的物質(zhì)。 1、概念(1)影響蛋白質(zhì)消化 蛋白酶抑制劑、凝集素、皂苷、多酚化合物等 (2)影響礦物
3、元素利用 植酸、草酸、葡萄糖硫苷、棉酚 (3)影響維生素利用 雙香豆素、抗維生素B族因子等2、種類(lèi)二、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析(4)影響碳水化合物利用 (5)刺激免疫系統(tǒng)的抗?fàn)I養(yǎng)因子 如:抗原蛋白 (6)綜合性抗?fàn)I養(yǎng)因子 如:水溶性非淀粉多糖。二、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析 分析飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子的種類(lèi)和含量,可指導(dǎo)飼料的合理加工、利用、貯存,如通過(guò)加熱可提高豆類(lèi)籽實(shí)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。 3、意義二、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析 (1)酶法 (2)比色法 (3)滴定法 (4)原子吸收法 (5)色譜法 (6)熒光法4、分析方法二、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析三、動(dòng)物組織血液理化成分分析 (1)動(dòng)物組織和血液中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì); (2)動(dòng)物組織和血液中與營(yíng)養(yǎng)物
4、質(zhì)有關(guān)的功能酶或相關(guān)酶; (3)動(dòng)物動(dòng)物組織和血液中某些代謝中間產(chǎn)物或最終產(chǎn)物。 1、分析對(duì)象 (1)概略養(yǎng)分或純養(yǎng)分; (2)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝產(chǎn)物; (3)相關(guān)標(biāo)識(shí)功能酶,如硒血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、鋅血清堿性磷酸酶、銅血漿銅藍(lán)蛋白氧化酶和血漿尿素氮等。2、分析內(nèi)容三、動(dòng)物組織血液理化成分分析第二節(jié) 消化實(shí)驗(yàn)一、 消化試驗(yàn)概念與目的 四、尼龍袋法三、 體外消化試驗(yàn)二、 體內(nèi)消化試驗(yàn) 以測(cè)定動(dòng)物對(duì)飼料養(yǎng)分的消化能力或飼料養(yǎng)分的可消化性為目的的試驗(yàn)。 2、目的: 準(zhǔn)確地量化飼料中各種養(yǎng)分被動(dòng)物消化利用的程度 ,也是評(píng)定飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要方法。 3、種類(lèi)一、消化試驗(yàn)概念與目的1、概念:體內(nèi)(in vi
5、vo)消化實(shí)驗(yàn)離體(in vitro)消化實(shí)驗(yàn)?zāi)猃埓?nylon bags technique) 全收糞法指示劑法消化道消化液人工消化液肛門(mén)收糞內(nèi)源指示劑外源指示劑消化實(shí)驗(yàn)體內(nèi)(in vivo)消化實(shí)驗(yàn)離體(in vitro)消化實(shí)驗(yàn)?zāi)猃埓?nylon bags technique) 全收糞法指示劑法消化道消化液人工消化液肛門(mén)收糞回腸收糞內(nèi)源指示劑外源指示劑消化實(shí)驗(yàn)方法剖析糞中養(yǎng)分組成: 飼料中未消化的養(yǎng)分; 消化道分泌物; 消化道脫落細(xì)胞; 消化道微生物及其代謝產(chǎn)物。4. 消化率計(jì)算公式表觀消化率=(食入養(yǎng)分 - 糞中養(yǎng)分)食入養(yǎng)分X 100%一、消化試驗(yàn)概念與目的真消化率=食入養(yǎng)分 -
6、(糞中養(yǎng)分-內(nèi)源養(yǎng)分)食入養(yǎng)分 X100%一、消化試驗(yàn)概念與目的食入飼料總能 - 糞中總能食入飼料總量 (kg)表觀消化能(MJ/kg)食入總能 - (糞中總能-內(nèi)源能)食入飼料總量(kg)真消化能(MJ/kg)消化能一、消化試驗(yàn)概念與目的(一)種類(lèi)(二)不同飼料消化率的測(cè)定方法(三)基本步驟二、 體內(nèi)消化實(shí)驗(yàn)(一)體內(nèi)消化試驗(yàn)的種類(lèi) 1、根據(jù)其收糞方式可分為: (1)全收糞法; (2)部分收糞法(指示劑法) 2.全收糞法根據(jù)收糞的部位不同又分為: (1)肛門(mén)收糞法; (2)回腸末端收糞法 全收糞法 1)優(yōu)點(diǎn):試驗(yàn)操作方便、測(cè)定較準(zhǔn)確; 2)缺點(diǎn) 排泄物污染嚴(yán)重; 采食量、排糞量難以準(zhǔn)確記錄;
7、 糞中養(yǎng)分含量受環(huán)境影響大; 工作量大。 指示劑法1)對(duì)指示劑的要求 不能被動(dòng)物消化吸收 在飼料中、糞便中能均勻分布 有很高的回收率 對(duì)動(dòng)物沒(méi)有毒副作用 2)種類(lèi) 外源指示劑飼料本身不含,人為加入飼料中的指示物質(zhì),一般多用Cr2O3; 內(nèi)源指示劑飼料本身含有,不能被動(dòng)物消化吸收但可以測(cè)定的成分,多用酸性不容灰分(AIA acid insoluble ash)2mol 或4mol HCl 不溶 4)缺點(diǎn):指示劑回收率對(duì)消化率影響較大,并且很難找到回收率很理想的指示物質(zhì):分析困難,較難獲得重復(fù)性高的測(cè)定數(shù)據(jù);與全收糞法最后的缺點(diǎn)相同。3) 優(yōu)點(diǎn):在于減少收集全部糞便帶來(lái)的麻煩,省時(shí)省力,尤其是在收
8、集全部糞便較困難時(shí)。指示劑法 5)消化率的計(jì)算原理:食入指示劑量=排出指示劑量飼糧指示劑含量糞中養(yǎng)分含量糞中指示劑含量飼糧養(yǎng)分含量100-100養(yǎng)分消化率(%)=指示劑法回腸末端消化率測(cè)定 1)T型瘺管 優(yōu)點(diǎn):安瘺管后對(duì)荷術(shù)動(dòng)物生理影響??; 缺點(diǎn):必須用指示劑,因不可能收集全部糞尿,由此取樣缺乏代表性,而且較麻煩。 圖1、T型瘺管示意圖 優(yōu)點(diǎn):收糞簡(jiǎn)便,而且可收集全部糞樣; 缺點(diǎn):手術(shù)復(fù)雜、成功率低和護(hù)理相對(duì)麻煩。 2)回-直腸吻合術(shù)回直腸吻合術(shù) 圖33)盲腸切除法 (家禽)代謝籠中裝了瘺管的豬(二)消化率的測(cè)定1 直接測(cè)定法(適合配合飼料和某些原料)優(yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)單,直接以待測(cè)飼料為全部飼糧,無(wú)養(yǎng)
9、分互作的干擾; 缺點(diǎn):某些飼料適口性差,時(shí)間長(zhǎng)后可能導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)缺乏癥。 原理:被測(cè)料替代實(shí)際基礎(chǔ)飼料的一部分,分別測(cè)定基礎(chǔ)飼糧和替代后飼糧的養(yǎng)分。優(yōu)點(diǎn):克服養(yǎng)分不平衡的影響。缺點(diǎn):基礎(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)平衡,則代入被測(cè)飼料后可能出現(xiàn)不平衡。 2 間接測(cè)定法(飼料替代法,套算法或二次試驗(yàn)法)(二)消化率的測(cè)定 第一次:測(cè)定基礎(chǔ)飼糧養(yǎng)分消化率 第二次:測(cè)定新飼糧養(yǎng)分消化率 為減少動(dòng)物的影響,用二組動(dòng)物同時(shí)試驗(yàn) 新飼糧組成:70-85%基礎(chǔ)飼糧+15-30% 被測(cè)飼料 間接測(cè)定 二次消化試驗(yàn)(二)消化率的測(cè)定 第一組 第二組 第一次 消化試驗(yàn) 基礎(chǔ)日糧 預(yù)飼期 試驗(yàn)期 基礎(chǔ)日糧 + 被測(cè)飼料 57天過(guò)渡期 第二
10、次 消化試驗(yàn) 基礎(chǔ)日糧 + 被測(cè)飼料 試驗(yàn)期 基礎(chǔ)日糧 交叉試驗(yàn)步驟示意 套算法的試驗(yàn)步驟式中:D為被測(cè)飼料養(yǎng)分消化率 A為基礎(chǔ)飼糧養(yǎng)分消化率 B為混合飼糧養(yǎng)分消化率 F為被測(cè)飼料養(yǎng)分占混合飼糧該養(yǎng)分的比例。FX100 AD() (B-A)(二)消化率的測(cè)定假定基礎(chǔ)飼糧養(yǎng)分消化率不變; 養(yǎng)分間無(wú)互作效應(yīng)。 混合飼糧中被測(cè)飼料的比例很重要1、動(dòng)物選擇2、日糧配制 3、試驗(yàn)步驟 (三)消化試驗(yàn)的基本步驟與要求4、糞的收集和處理5、養(yǎng)分消化率和消化能測(cè)定(1)預(yù)試期:適應(yīng)環(huán)境、摸清采食量、排糞規(guī)律 (2)正試期:記錄采食量、收集排糞 時(shí) 間:?jiǎn)挝竸?dòng)物:5-10天; 反芻動(dòng)物:7-14天3、試驗(yàn)步驟
11、預(yù)備試驗(yàn)期 正式試驗(yàn)期 牛、羊 10-14天 10-14天 馬 7-10天 8-10天 豬 5-10天 6-10天 家禽* 3-5 天 4-5 天 表 不同種類(lèi)的動(dòng)物的試驗(yàn)期規(guī)定*一般是進(jìn)行代謝實(shí)驗(yàn),采用強(qiáng)飼法,試驗(yàn)期為1-2天。4、糞的收集和處理(1)收糞方法:專(zhuān)用消化柜或消化欄、動(dòng)物肛門(mén)上套收糞袋 (2)糞樣處理 1)全糞法:收集全部糞便 2)指示劑法:每天定時(shí)收糞 糞樣稱(chēng)重,混勻,按總重的1/10-1/50取 樣,加10鹽酸10mL/100g鮮糞樣和少量甲苯,固氮防腐。5、養(yǎng)分消化率和消化能測(cè)定例1 :測(cè)定仔豬飼糧CP消化率 日采食量:1000g, 飼糧CP含量:16% 日排糞量:250
12、g, 糞中CP含量:12% CP消化率=( 100016%-25012%)(100016%)100= 81.2%例 2: 某飼糧消化實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下,計(jì)算CF消化率 飼料CF含量:40% 糞中CF含量: 40% 飼料指示劑添加量:3% 糞中指示劑含量:6%CF消化率=100 364040100= 50 1)直接測(cè)定 :根據(jù)消化試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)合能 值測(cè)定進(jìn)行 DE = (GE - FE)/采食量(kg)(四)消化能值的測(cè)定 飼料消化能 = (33.47-8.34)/2 =12.57(MJ/Kg) 例如:體重50Kg的豬,每日食入日糧2Kg,含總 能33.47MJ,每日排糞中的總能為8.34MJ,計(jì)算其
13、采食飼料的的消化能。(四)消化能值的測(cè)定 根據(jù)每日食入的可消化粗蛋白質(zhì)(X1 )、可消化粗脂肪(X2)、可消化粗纖維(X3)、可消化無(wú)氮浸出物(X4)的量(克),用下列回歸公式計(jì)算每日食入飼料的消化能(Y千焦)。 2)間接推算:(四)消化能值的測(cè)定Y(綿羊)=23.93X1 +37.87X2+18.33X3 +16.99X43.77% Y(豬)=24.18X1 +39.41X2+18.41X3 +17.03X4 4.18%Y(牛)=24.23X1 +34.10X2+18.49X3 +16.99X4 4.18%(四)消化能值的測(cè)定 2、優(yōu)點(diǎn):操作方便,環(huán)境條件、處理方法和時(shí)間易控制,更容易標(biāo)準(zhǔn)化
14、。 3、缺點(diǎn):與動(dòng)物的生理系列化過(guò)程有一定的差異。 4、分類(lèi):消化道消化液法和人工消化液法。 1、概念: 是指摸擬消化道,在體外進(jìn)行飼料的消化。三 體外消化實(shí)驗(yàn)三 體外消化實(shí)驗(yàn) 人工消化液消化:采用人工制成的消化酶模擬消化液,主要用于反芻動(dòng)物瘤胃飼料消化率/降解率的測(cè)定 分兩步:先用纖維素分解酶制劑+HCl代替瘤胃液,再用胃蛋白酶+HCl處理 消化道消化液法:用安裝的瘺管收取豬小腸液(PIF)或牛的瘤胃液。一般用兩步法: 反芻動(dòng)物:瘤胃液消化胃蛋白酶+HCl消化洗凈殘?jiān)?單胃動(dòng)物:胃蛋白酶+HCl消化PH 7.0條件下用PIF(小腸液) 三 體外消化實(shí)驗(yàn)四、尼龍袋法1、主要用于反芻動(dòng)物,測(cè)定飼
15、料養(yǎng)分的降解率。 操作:將待測(cè)飼料裝入孔徑40-602(149cm)的尼龍袋中,通過(guò)瘤胃瘺管放入瘤胃,在一定的時(shí)間里4、8、16、24、48h(精料), 8、16、24、48、72h(粗飼料) 取出,沖洗,干燥,恒重。 認(rèn)為從尼龍袋中透過(guò)的飼料是已被消化吸收了的飼料,將尼龍袋當(dāng)作是腸道的細(xì)胞膜(起濾過(guò)作用)。 3、缺點(diǎn): 孔徑大小不好確定。 將飼料限制在尼龍袋內(nèi),無(wú)法充分混合,微生物也不能進(jìn)入。測(cè)試結(jié)果一般無(wú)法與飼料真消化率相匹配2、優(yōu)點(diǎn):工作量小,成本低,一次可以做大批量的飼料可以對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值進(jìn)行排隊(duì),取得飼料相對(duì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。 4、計(jì)算公式: 降解率(%)=(袋中初始N-孵化后N)100/袋
16、中初始N四、尼龍袋法第三節(jié) 代謝試驗(yàn) 一、概念與目的 二、操作過(guò)程一、概念與目的 目的:測(cè)定飼料代謝能及養(yǎng)分代謝率的試驗(yàn)。 測(cè)定ME需要進(jìn)行代謝試驗(yàn),在消化試驗(yàn)的基礎(chǔ)上增加尿液的收集,反芻動(dòng)物增加CH4收集。CH4的收集:E CH4= CH4產(chǎn)量燃燒值(55.8KJ/g)收集時(shí)需有特殊的裝置。如面罩或密封氣柜,操作復(fù)雜,結(jié)果也不太準(zhǔn)確,一般可根據(jù)日糧CH2O含量估計(jì):牛:Y CH4=17.68+4.012X(日糧CH2O的百g數(shù))綿羊:Y=9.80+2.41X 在消化試驗(yàn)基礎(chǔ)上準(zhǔn)確收集排尿量。設(shè)備:代謝籠雞:易于進(jìn)行代謝試驗(yàn) 家禽代謝能的測(cè)定法: 也叫快速法(sibbald,1979)、強(qiáng)飼法
17、(force feeding ) 試驗(yàn)動(dòng)物為成年公雞 二、操作過(guò)程3648h由二、操作過(guò)程優(yōu)點(diǎn):快速、重復(fù)性高、精確性高、單違背雞的正常消化生理,對(duì)難采食的飼料,此方法較好。第四節(jié) 平衡實(shí)驗(yàn)一、概念與目的 四、能量平衡三、碳平衡二、氮平衡 研究營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)食入量與排泄、沉積或產(chǎn)品間的數(shù)量平衡關(guān)系稱(chēng)平衡實(shí)驗(yàn)。 2、目的: 估計(jì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需要參數(shù)和飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。一、概念與目的1、概念:平衡試驗(yàn)物質(zhì)代謝能量平衡氮平衡碳平衡一、概念與目的 食入養(yǎng)分 = 各途徑排泄養(yǎng)分之和 方法: 采用適宜方法,收集各種排泄物 原理:一、概念與目的二 、氮平衡實(shí)驗(yàn) 氮平衡實(shí)驗(yàn)主要用于研究動(dòng)物蛋白質(zhì)的需要、飼料蛋白質(zhì)的
18、利用率以及飼料或飼糧蛋白質(zhì)質(zhì)量的比較。 2、方法 在消化試驗(yàn)的基礎(chǔ)上收集尿,測(cè)定尿中的含氮量,由氮的收支情況反映體內(nèi)蛋白質(zhì)的增減及蛋白質(zhì)的有效性。1、目的 食入氮= 糞氮 + 尿氮 + 沉積氮+皮屑 食入氮= 糞氮 + 尿氮: 等平衡,體蛋白質(zhì)不增不減 食入氮 糞氮 + 尿氮 :正平衡,體蛋白質(zhì)沉積 食入氮 糞氮 + 尿氮 :負(fù)平衡,體蛋白質(zhì)分解 3、氮在體內(nèi)的去向及有關(guān)計(jì)算公式二 、氮平衡試驗(yàn) 蛋白質(zhì)凈利用率(NPU)(%)= 沉積N/食入N100消化N = 食入N-糞N沉積N = 食入N-(糞 N+尿N)蛋白質(zhì)(N)消化率(%)=消化N/食入N100 蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值(BV)=沉積N/可消
19、化N100二 、氮平衡試驗(yàn) 三、碳平衡 沉積C=攝入C-(糞C+尿C+呼吸氣體CO2 +腸道氣體CH4+離體產(chǎn)品C)沉積C包括:合成蛋白質(zhì)、合成脂肪結(jié)合氮平衡試驗(yàn),可推算出體內(nèi)脂肪沉積量。四、能量平衡實(shí)驗(yàn)食入能 = 排泄物(糞、尿、脫落皮屑、毛含能+ 沉積能(生長(zhǎng)肥育) +離體產(chǎn)品(奶、蛋、毛)含能 +維持生命活動(dòng)的機(jī)體產(chǎn)熱 測(cè)定方法: 直接測(cè)熱法; 間接測(cè)熱法 碳氮平衡法; 比較屠宰實(shí)驗(yàn)閹牛每日的能量平衡 (KJ) 能量攝入 能量支出 6,988g梯牧草(貓尾草) 116,065 (timothy hay) 400g亞麻籽 7,58116,619g糞 59,621 4,357g尿 5,065
20、 37g皮屑脫落物 368 142g甲烷 7,937 畜體產(chǎn)熱 48,110 機(jī)體增重 2,545 合計(jì) 123,646 123,646 維持+生長(zhǎng)=48,110+2,545=50,655(KJ) 飼料能量利用率=50,655/123,646=0.41 1、直接測(cè)熱法四、能量平衡實(shí)驗(yàn)2、間接測(cè)熱法1) 呼吸熵(RQ) = CO2/O2 原理:機(jī)體產(chǎn)熱來(lái)自脂肪、糖、蛋白質(zhì)在體內(nèi)的氧化??偖a(chǎn)熱量機(jī)體三大養(yǎng)分氧化量與各自能值乘積之和蛋白質(zhì)的氧化量可以由尿氮估計(jì);脂肪、糖的氧化產(chǎn)熱量與它們共同的RQ有關(guān)只要知道其RQ,就可以得到它們氧化時(shí)每消耗1LO2或每產(chǎn)生1LCO2時(shí)的產(chǎn)熱量,從而得到總產(chǎn)熱量 四
21、、能量平衡實(shí)驗(yàn)O2消耗 CO2生成 尿 N 蛋白質(zhì)代謝數(shù)據(jù): 蛋白質(zhì)氧化量 (14.8g6.25)a產(chǎn) 熱(92.5g18KJ/g)a1O2消耗(92.5g0.96L/g)aCO2生成(92.5g0.77L/g)a碳水化合物和脂肪代謝數(shù)據(jù): O2消耗(392L-88.8L) CO2生成(310.7L-71.2L) 非蛋白R(shí)Q(239.5/303.2)bRQ為0.79時(shí)消耗303.2L氧產(chǎn)熱 總產(chǎn)熱(1665+6079) 392L 310.7L 14.8 g 92.5g 1665KJ 88.8L 71.2L 303.2L 239.5L 0.79 6079KJ 7744KJ 根據(jù)24小時(shí)的耗O2、
22、CO2生成量和尿N估計(jì)產(chǎn)熱 密閉回流式測(cè)熱裝置 開(kāi)放回流式測(cè)熱裝置四、能量平衡實(shí)驗(yàn)3、碳、氮平衡法 1)原理:假設(shè)體內(nèi)沉積是脂肪和蛋白質(zhì),糖元很少,根據(jù)每克脂肪和蛋白質(zhì)的C、N含量和產(chǎn)熱,可計(jì)算出沉積能,糞、尿、甲烷能可測(cè)得,從攝入飼料總能,就可計(jì)算出畜體產(chǎn)熱。 2)方法:測(cè)定C、N平衡值 3)基本參數(shù):蛋白質(zhì):含碳52%,含氮16%, 產(chǎn)熱23.8KJ/g; 脂 肪:含碳76.7% , 產(chǎn)熱39.7KJ /g第一階段 (基礎(chǔ)飼糧) 第二階段 (基礎(chǔ)飼糧+被測(cè)飼糧) C(g) N(g) C(g) N(g) 飼 料 糞 尿 CH4CO22500 600 100 130 1570 160 35 120 - - 3600 700
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