細(xì)胞融合與單細(xì)胞克隆

1、關(guān)于細(xì)胞融合和單細(xì)胞克隆第一張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月教學(xué)目標(biāo)了解動物細(xì)胞融合的原理、過程和意義。理解單克隆抗體制備的過程和應(yīng)用第二張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月重點難點1.教學(xué)重點： 單克隆抗體的制備和應(yīng)用2.教學(xué)難點： 單克隆抗體的制備過程 第三張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月問題探討 “番茄馬鈴薯”（理想圖） 通過長期的實驗，科學(xué)家們采用體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了“番茄馬鈴薯”植株。第四張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？動物細(xì)胞也能融合嗎？第五張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于

2、2022年6月教學(xué)過程一.動物細(xì)胞融合1.動物融合的過程請同學(xué)們閱讀課本P52動物融合第六張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月 動物細(xì)胞融合過程示意圖不同DNA的兩個細(xì)胞 滅活的病毒有絲分裂兩個完整的雜交細(xì)胞第七張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。第八張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月思考題1.植物體細(xì)胞雜交時首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)

3、胞壁？ 酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細(xì)胞無細(xì)胞壁3.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法4.動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能 還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形 成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？不能第九張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月7.你推測一下動物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？思考題 利用動物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞8.在生產(chǎn)實際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？ 生產(chǎn)單克隆抗體6.你能歸

4、納出什么叫做動物細(xì)胞融合嗎？第十張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合 細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較第十一張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月2.動物細(xì)胞融合的概念 動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞。第

5、十二張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月二、動物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）2個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒離心振動電激聚乙二醇第十三張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月提問？1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？ 效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）。2.一個淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？ 每一個淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。3.一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？ 動物在免疫反應(yīng)過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上。4. 簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？ 抗原 動物體 抗體 抗原不純 抗體不純二、單克隆抗

6、體刺激漿細(xì)胞第十四張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月6.如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？ 體外培養(yǎng)單個淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體7.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無限增殖嗎?怎樣解決這個問題？5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？ 產(chǎn)量低，純度低，特異性差第十五張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月1.設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠無限增殖雜種細(xì)胞二、單克隆抗體2.制備過程：第十六張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性專一抗體檢驗陽性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜

7、交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細(xì)胞 單克隆抗體制備過程示意圖多種雜交細(xì)胞第十七張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月 單克隆抗體制備過程 注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體第十八張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月3.單克隆抗體的應(yīng)用： 在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義 在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有 生物導(dǎo)彈二、單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高 等優(yōu)越性。第十九張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在

8、妊娠第8天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準(zhǔn)確率在90以上。第二十張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十一張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月知識結(jié)構(gòu)兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活的病毒一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢第二十二張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月教學(xué)反饋1.動物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是 （ ）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體C.培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞B2.單克隆抗體是由

9、下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的（ ）A.B淋巴細(xì)胞 B.T淋巴細(xì)胞 C.骨髓瘤細(xì)胞 D.雜交瘤細(xì)胞 D3.（多選）1975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)的是（ ）A.效應(yīng)B細(xì)胞 BT淋巴細(xì)胞C.骨髓瘤細(xì)胞 D雜交瘤細(xì)胞 A B C D第二十三張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC 4.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實驗方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。(1).該實驗方案的目的是：_(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？(3)

10、.A是從小鼠的脾臟中取得_ 該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_ 。(4).圖中B為_過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。(5).C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段，其中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。B淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活的病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代50第二十四張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月課后習(xí)題1. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ）淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞A. B.C. D. C2.動物

11、細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于 ( )A.細(xì)胞膜的流動性 B細(xì)胞膜的選擇透過性C.細(xì)胞質(zhì)的流動性D細(xì)胞質(zhì)酶的活性 A一.選擇題第二十五張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月3.“生物導(dǎo)彈”是指 （ ）A.單克隆抗體 B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞 D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物 D4.只能使動物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是 （ ）APEG B滅活的病毒 C電刺激 D離心A二.簡答題1.淋巴細(xì)胞是由動物體-中的-細(xì)胞分化發(fā)育而來的。2.雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓造血干主動運(yùn)輸?shù)诙鶑?，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月三.思考與探究1.植物體細(xì)胞雜交技

12、術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？2.制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動物細(xì)胞融合是兩個體細(xì)胞直接融合。 提示：哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞 能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細(xì)胞大量增殖。B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗

13、體。因此，把一種B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會兼有兩個親本細(xì)胞的特性在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。 第二十七張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月教學(xué)參考1.已成功的動物細(xì)胞融合實例還有哪些？ 生物種類 細(xì)胞來源 成功年代 酵母菌雞 原生質(zhì)體血紅細(xì)胞 1975年人胡蘿卜 腹水癌細(xì)胞原生質(zhì)體 1976年人小鼠 纖維肉瘤細(xì)胞畸胎瘤細(xì)胞 1978年要知道更多的實例，需經(jīng)常查閱更多科研報道。第二十八張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月2.為什么不用兩個而要用多個細(xì)胞進(jìn)行動物細(xì)胞間的融合？ 就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動物細(xì)胞融合技術(shù)最有價值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制