醫(yī)療機構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行第二版）要點解讀

1、的：規(guī)范員、流程保障檢測質(zhì)量提檢測效率滿檢測需求適范圍：開展新冠核酸檢測的醫(yī)療機構(gòu)的及適范圍一、技術(shù)人員基本要求 二、標本采集基本要求 三、標本管理基本要求 四、實驗室管理基本要求五、實驗室質(zhì)量控制與管理六、核酸檢測結(jié)果反饋基本要求 七、核酸檢測安全管理八、核酸檢測信息化管理九、標本混采 十、其他要求主要內(nèi)容采樣員基本要求物安全培訓(xùn)（培訓(xùn)合格）：物安全三級個防護要求及穿脫流程。采樣技能：熟悉標本種類和采集法，熟練掌握標本采 集操作流程及注意事項。做好標本信息的記錄，確保標本質(zhì)量符合要 求、標本及相關(guān)信息可追溯。一、技術(shù)人員檢測員基本要求資質(zhì)要求相關(guān)專業(yè)的專以上學(xué)歷或具有中級及以上 專業(yè)技術(shù)職務(wù)

2、任職資格。2年以上的實驗室作經(jīng)歷?；驒z測相關(guān)培訓(xùn)合格證書：PCR上崗證。數(shù)量要求員數(shù)量與項及標本量相適宜，保證時效 性和準確性。一、技術(shù)人員采樣基本原則采樣點設(shè)置人員配置及防護要求采樣流程采樣管選擇標本的類型標本的采集方法1234567二、標本采集（）基本原則檢測能與診療量匹配，與采樣量適應(yīng)，避免 標本積壓、標本失效、檢測結(jié)果反饋遲緩。不同采集對象設(shè)置不同采樣區(qū)域，避免交叉感 染。標本采集應(yīng)滿本醫(yī)療機構(gòu)基本需求，及其他 “應(yīng)檢盡檢”和“愿檢盡檢”的要求。二、標本采集（）采樣點設(shè)置設(shè)置原則：安全、科學(xué)、便民。設(shè)置要求獨空間，具備通條件，內(nèi)部劃分相應(yīng)的清 潔區(qū)和污染區(qū)，配備衛(wèi)設(shè)施或裝置。清晰的指

3、引標識，并明確采樣流程和注意事項。獨的等候區(qū)域，盡可能保證員單向流動， 落實“1線”間隔要求，嚴控員密度。二、標本采集（三）員配置及防護要求員配置：采樣員1-2名/采樣點，休息1次/2-4時。防護裝備：物安全三級實驗室個防護（N95 及以上、護 鏡、防護服、乳膠套、防靴套）。每采個應(yīng)當(dāng)進嚴格消毒或更換套。接觸患者液、體液、分泌物或排泄物，戴雙層乳 膠套；套被污染時，及時更換外層乳膠套。二、標本采集（四）采樣流程建采樣操作流程：預(yù)約、繳費、信息采集核對、采 樣、送檢、報告發(fā)放等。信息采集核對受檢者（患者）信息：姓名、份證號、居住地址、 聯(lián)系式等。采樣信息：采樣點名稱、標本編號，標本采集期、 時間

4、、采集部位、類型、數(shù)量等。應(yīng)當(dāng)利條碼掃描等信息化段采集受檢者信息。標本采集前，采樣員應(yīng)當(dāng)對信息進核對。報告發(fā)放：在公共區(qū)域以信息公告形式告知發(fā)放時 限和發(fā)放式。二、標本采集新增內(nèi)容（五）采樣管選擇群篩查應(yīng)選擇具有病毒滅活功能如含胍鹽（異 硫氰酸胍或鹽酸胍等）或表活性劑的采樣管。選含胍鹽的采樣管。發(fā)熱診或急診的快速檢測，則根據(jù)所的核酸 檢測試劑的要求確定采樣管。二、標本采集(六) 采集法應(yīng)采集呼吸道標本上呼吸道標本（選鼻咽拭等）2)下呼吸道標本（呼吸道吸取物、管灌洗液、 肺泡灌洗液、深咳痰液等）。重癥病例優(yōu)先采集下呼吸道標本。根據(jù)臨床需要可留取便標本。更新內(nèi)容二、標本采集取樣拭子Type of

5、Swab采集端（植絨）折斷處手持端選用聚酯、尼龍等非棉質(zhì)、非藻酸鈣材質(zhì) 的拭子，且柄部為非木質(zhì)材料。（七）采集法解剖位置采集時機 采集拭咽部解剖圖上呼吸道標本采集二、標本采集（六）采集法1. 鼻咽拭的采集采樣員輕扶被采集員的頭部，執(zhí)拭鼻孔垂直部向進， 沿下鼻道的底部向后緩緩深，待拭 頂端到達鼻咽腔后壁時，輕輕旋轉(zhuǎn)周（如遇反射性咳嗽，應(yīng)停留刻），然 后取出拭。將拭頭浸含23ml病毒保存液的管 中，尾部棄去，旋緊管蓋。由于鼻道呈弧形，不可過猛，以免 發(fā)外傷出。方向Direction部位Location二、標本采集（六）采集法2. 咽拭的采集被采集員頭部微仰，嘴張，并發(fā)“啊”，露出兩側(cè)咽 扁桃體，將

6、拭越過根，擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁并旋 轉(zhuǎn)3-5次，然后取出拭。將拭頭浸含23ml病毒保存液的管中，尾部棄去，旋緊 管蓋，避免泄露。部位Location力度Strength二、標本采集（六）采集法深咳痰液的采集患者深咳后，將咳出的痰液收集于含3ml采樣液的50ml螺塑料管中。如果痰液未收集于采樣液中，可在檢測前，加23ml采樣液，或加與痰液等體積的含1g/L蛋酶K的 磷酸鹽緩沖液將痰液化。鼻咽或呼吸道抽取物的采集與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插鼻腔或管，接通負壓， 旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并3ml采樣液沖洗收集器1次（亦可導(dǎo)尿管接在5

7、0ml注射器上來替代收集器）。二、標本采集（六）采集法管灌洗液的采集將收集器頭部從鼻孔或管插處插管（約30cm深 處），注5ml理鹽，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并采樣液沖洗收集器1次（亦 可導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集）。肺泡灌洗液的采集局部醉后將纖維管鏡通過或鼻經(jīng)過咽部插右 肺中葉或左肺段的管，將其頂端契管分開， 經(jīng)管活檢孔緩緩加滅菌理鹽，每次3050ml，總 量100250ml，不應(yīng)超過300ml。二、標本采集（一）標本包裝標本管應(yīng)大小適合、帶螺旋蓋、內(nèi)有墊圈、耐冷凍。標本管應(yīng)注明標本編號、種類、姓名及采樣日期。密閉后的標本管應(yīng)放入大小合適的塑料袋內(nèi)密封，

8、每 袋裝一份標本。（二）標本送檢標本采集后室溫放置不超過4小時，應(yīng)在2-4h內(nèi)送到 實驗室。如果需要長途運輸標本，應(yīng)采用干冰等制冷方式進行 保存，嚴格按照相關(guān)規(guī)定包裝運輸。三、標本管理（三）標本接收標本接收員的個防護按采樣員防護裝備執(zhí)。標本運送員和接收員對標本進雙簽收。（四）標本保存標本應(yīng)當(dāng)盡快進檢測，24時內(nèi)檢測的標本可置于4 保存；24時內(nèi)法檢測的標本則應(yīng)置于-70或以下保 存（如-70保存條件，則于-20冰箱暫存）應(yīng)設(shè)專庫或?qū)９駟为毐４鏄吮?。標本運送期間避免反復(fù)凍融。三、標本管理（四）標本保存4. 境外險區(qū)域群以及新冠肺炎患者的密接 者和密接者的密接者等集中隔離員的核酸檢 測標本，檢測后

9、，應(yīng)當(dāng)在-20保存7 天。新增內(nèi)容刪除了“混檢標本的采集和檢測”三、標本管理（）實驗室資質(zhì)要求符合病原微物實驗室物安全管理條例和醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法 有關(guān)規(guī)定。物安全級及以上實驗室備案和臨床基因擴增 檢驗實驗室備案。獨設(shè)置的醫(yī)學(xué)檢驗實驗室還應(yīng)當(dāng)符合醫(yī)學(xué)檢 驗實驗室基本標準（試）和醫(yī)學(xué)檢驗實驗 室管理規(guī)范（試）等要求。四、實驗室管理（）實驗室分區(qū)要求分區(qū)原則：試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)物理空間上完全相互獨，沒有空直接相通。各區(qū)功能：試劑儲存和準備區(qū)：試劑制備、分裝，擴增混合液制 備，離管、吸頭等消耗品的貯存和準備。標本制備區(qū)：轉(zhuǎn)運箱開啟、標本滅活，核酸提取并

10、加擴增反應(yīng)管。核酸擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)：如使全動核酸分析儀 可合并區(qū)域根據(jù)儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。四、實驗室管理（三）主要儀器設(shè)備核酸提取儀、醫(yī)PCR擴增儀、物安全柜、病毒 滅活設(shè)備（如浴鍋等）、冰箱和冰柜、離機、UPS。（四）實驗室檢測標本核收及前處理：在物安全柜內(nèi)對標本進清點 核對，并對標本進滅活處理。標準檢測流程：試劑準備、標本前處理、核酸提取、 核酸擴增、結(jié)果分析及報告。復(fù)檢流程：實驗室應(yīng)當(dāng)建可疑標本和陽性標本復(fù)檢 的流程。四、實驗室管理（四）實驗室檢測實驗室接收樣本后，在物安全柜內(nèi)對標本進清點 核對按標準操作流程進檢測試劑準備：選擇國家藥品監(jiān)督管理部批準的試劑， 使試劑盒配套或說明

11、書推薦的標本保存液和核酸 提取試劑。標本前處理：含胍鹽滅活型標本保存液可直接進 核酸提??；滅活型標本保存液則56孵育30分鐘 熱滅活、化學(xué)滅活處理。四、實驗室管理四、實驗室管理（四）實驗室檢測按標準操作流程進檢測核酸提?。涸谖锇踩駜?nèi)打開標本采集管加樣。 核酸提取完成后，即將提取物進封蓋處理。在物安全柜內(nèi)將提取核酸加PCR擴增反應(yīng)體系中。核酸擴增：將擴增體系放擴增儀，核對擴增程序 是否與試劑說明書相符，啟動擴增程序。擴增后反應(yīng)管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好 袋，按般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出實驗室處理。實驗室應(yīng)建可疑標本和陽性標本復(fù)檢的流程。更新內(nèi)容各醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)當(dāng)加強核酸檢測質(zhì)量控制。應(yīng)選擴 增檢測試

12、劑盒指定的核酸提取試劑和擴增儀。（）性能驗證在臨床標本檢測前，對檢測系統(tǒng)（提取試劑、提取儀、 擴增試劑、擴增儀等）進必要的性能驗證。性能指標：精密度（少要有重復(fù)性）和最低檢測限。建議選靈敏的試劑（檢測限500 拷/ml）。五、質(zhì)量控制與管理更新內(nèi)容（）室內(nèi)質(zhì)控依據(jù)：國家衛(wèi)健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機構(gòu)開展新 型冠狀病毒核酸檢測有關(guān)要求的通知每批檢測少有1 份弱陽性質(zhì)控品（第三質(zhì)控品，通 常為檢出限的1.5-3 倍）+ 3 份陰性質(zhì)控品（理鹽）。質(zhì)控品隨機放在臨床標本中，參與從提取到擴增的全 過程。在規(guī)模群篩查時的陽性結(jié)果，應(yīng)采另外1-2種更 為靈敏且擴增不同區(qū)域的核酸檢測試劑對原始標本進復(fù)核后可報告

13、。五、質(zhì)量控制與管理更新內(nèi)容五、質(zhì)量控制與管理更新內(nèi)容（三）室間質(zhì)評應(yīng)常態(tài)化參加國家級或省級臨床檢驗中室間質(zhì)評。檢測量以及承擔(dān)重點群篩查等任務(wù)的實驗室，要 適當(dāng)增加室間質(zhì)評頻率。不按照本地要求參加室間質(zhì)評的，或室間質(zhì)評結(jié)果不 合格的，或檢測結(jié)果質(zhì)量問題突出的，不得開展核酸 檢測。刪除了“質(zhì)量管理的內(nèi)容”（）報告時限發(fā)熱診、急診患者，6時內(nèi)報告核酸檢測結(jié)果。普通診、住院患者及陪護員等群，原則上12 時內(nèi)報告結(jié)果?！霸笝z盡檢”群，般在24時內(nèi)報告結(jié)果。醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)當(dāng)為受檢者出具檢測報告，并告知其查詢式，不得以任何理由不出具檢測報告。六、結(jié)果反饋（）檢測報告新型冠狀病毒核酸檢測報告 單參考模版。檢測結(jié)

14、果互認?？刹杉堎|(zhì)、快遞、絡(luò)或信 息化系統(tǒng)等多種形式發(fā)放核酸 檢測報告，并保護個隱私。陽性結(jié)果應(yīng)在2時內(nèi)報告。六、結(jié)果反饋七、安全管理（）標本安全管理標本轉(zhuǎn)運箱封閉前，須使75%酒精或0.2%含氯消毒劑噴灑消 毒外部標本運輸包裝：危險品航空安全運輸技術(shù)細則的PI602 分類包裝要求疑似或確診患者標本應(yīng)標有特殊標識，并進單獨轉(zhuǎn)運，按 照B類感染性物質(zhì)進三層包裝。檢測完成后達到保存時限的剩余標本處理滅活標本：需壓滅活，直接按醫(yī)療廢物起轉(zhuǎn)運出實驗 室進銷毀處理。滅活標本：裝專密封廢物轉(zhuǎn)運袋中進壓蒸汽滅菌 處理后再轉(zhuǎn)運。新增、修改內(nèi)容（）實驗室檢測安全管理1.基本要求七、安全管理更新內(nèi)容標本檢測應(yīng)當(dāng)在物

15、安全級實驗室進在物安全險評估的基礎(chǔ)上，采取適當(dāng)?shù)膫€體防護措 施，包括套、罩和隔離等。制定實驗室物安全相關(guān)程序件。制定實驗室物安全操作失誤或意外的處理操作程序。刪除了“采物安全三級實驗室的個防護”（）實驗室檢測安全管理2. 實驗前安全要求物表消毒劑：0.2%含氯消毒劑（配制不超過24時）或75%酒精消毒物表：實驗室桌、臺及地；樣本轉(zhuǎn)運桶內(nèi)壁和 標本采集密封袋；標本采集管外壁（此處不建議使75% 酒精）樣本滲漏的檢查：轉(zhuǎn)運實驗室的標本轉(zhuǎn)運桶應(yīng)在物安 全柜內(nèi)開啟，取出標本采集管后，應(yīng)先檢查標本管外壁 是否有破損、管是否泄露或是否有管壁殘留物。七、安全管理（）實驗室檢測安全管理2. 實驗前安全要求樣本

16、滲漏的處理：即吸紙覆蓋，并噴灑有效氯含量 為0.55%的含氯消毒劑進消毒處理，不得對標本繼續(xù)檢 測操作，做好標本不合格記錄后需即進密封打包，壓蒸汽滅菌處理后銷毀。滅活樣本溫浴熱滅活：需旋緊標本采集管管蓋，必要時 可封膜密閉管蓋；溫浴過程中可每隔10 分鐘將標本輕 柔搖勻1 次，以保證標本均勻滅活；溫浴后標本需靜置 室溫少10 分鐘使溶膠沉降，隨后再開蓋進后續(xù)核酸 提取。七、安全管理（）實驗室檢測安全管理核酸提取和檢測安全要求標本進核酸提取和檢測時應(yīng)盡可能在物安全 柜內(nèi)進操作。如為打開標本管蓋或其他有可能產(chǎn)溶膠的操 作，則必須在物安全柜內(nèi)進。七、安全管理更新內(nèi)容（）實驗室檢測安全管理4. 實驗結(jié)

17、束后清潔要求需對實驗室環(huán)境進清潔，消除可能的核酸污染。實驗室空清潔：每次檢測完畢后，固定和/或可移 動紫外燈進紫外照射 2 時以上。 必要時可采 核酸清除劑等核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留核 酸。作臺清潔：使0.2%含氯消毒劑或75%酒精進臺、地清潔。七、安全管理（）實驗室檢測安全管理實驗結(jié)束后清潔要求物安全柜消毒：0.2%含有效氯消毒液或75%酒 精噴灑消毒醫(yī)療廢物垃圾袋外表。消毒后將垃 圾袋帶出物安全柜放實驗室廢棄物轉(zhuǎn)運袋中。 試管架、實驗臺、移液器等使75%酒精進擦 拭。物安全柜關(guān)閉后，紫外燈消毒30分鐘。轉(zhuǎn)運容器消毒：使前后需0.2%含氯消毒劑或75%酒精進擦拭或噴灑消毒。塑料或有機玻

18、璃材質(zhì)物品清潔：使0.2%含氯消毒 劑或過氧酸或過氧化氫擦拭或噴灑。七、安全管理（三）實驗室醫(yī)療廢物管理基本要求制定醫(yī)療廢物處置程序及污物、污處理操作程序。所有的危險性醫(yī)療廢物必須按照統(tǒng)規(guī)格化的容器和 標式，完整且合規(guī)地標廢物內(nèi)容。由經(jīng)過適當(dāng)培訓(xùn)的員使適當(dāng)?shù)膫€防護裝備和設(shè) 備處理危險性醫(yī)療廢物。建醫(yī)療廢物處理記錄，定期對實驗室排HEPA過濾 器進撿漏和更換，定期對處理后的污進監(jiān)測， 采物指劑監(jiān)測壓滅菌效果。七、安全管理（三）實驗室醫(yī)療廢物管理2. 醫(yī)療廢物的處理措施廢液的處理普通污：產(chǎn)于洗池等設(shè)備，排實驗室處理系 統(tǒng)，經(jīng)統(tǒng)處理達標后進排放。感染性廢液：實驗操作過程中產(chǎn)的廢液，化學(xué)消毒（0.55

19、%含氯消毒劑處理）或物理消毒（紫外照射30 分鐘以上）式徹底消毒滅活后可排實驗室處理 系統(tǒng)，經(jīng)統(tǒng)處理達標后進排放。處理效果按GB18466醫(yī)療機構(gòu)污染物排放標準 相關(guān)規(guī)定進評價。七、安全管理（三）實驗室醫(yī)療廢物管理2. 醫(yī)療廢物的處理措施固體廢物的處理分類收集。收集容器應(yīng)當(dāng)具有不易破裂、防滲漏、耐濕耐熱、可密封 等特性潛在感染性廢物應(yīng)當(dāng)及時進壓蒸汽滅菌處理。廢物處置之前，應(yīng) 當(dāng)存放在實驗室內(nèi)指定的安全位置。型固體廢物如檢測耗材、個防護裝備等均需使雙層防滲漏專 包裝袋打包密封后經(jīng)過壓蒸汽滅菌處理，再轉(zhuǎn)運出實驗室。體積較的固體廢物如HEPA 過濾器，應(yīng)當(dāng)由專業(yè)進原位消毒 后，裝安全容器內(nèi)進消毒滅菌

20、。不能進壓蒸汽滅菌的物品如電設(shè)備可采環(huán)氧烷熏蒸消毒處 理。經(jīng)消毒滅菌處理后移出實驗室的固體廢物需集中交由醫(yī)療廢物處 理單位進處置。七、安全管理（四）實驗室污染的處理物安全柜操作臺局限污染：即吸紙覆蓋，并使0.55% 含氯消毒劑進噴灑消毒。標本傾覆造成實驗室污染保持實驗室空間密閉，避免污染物擴散。即使?jié)櫇裼?.55%含氯消毒劑的覆蓋污染區(qū)。必要時（如量溢撒時）可過氧酸加熱熏蒸實驗室過夜（ 2g/m ）；或20g/L 過氧酸消毒液噴灑（8ml/m），作1-2時；或錳酸鉀-甲醛熏蒸（8g/m），后加40%甲醛（10ml/m），4 時。清理污染物時嚴格遵循活病毒物安全操作要求，采壓蒸汽 滅菌處理，并進

21、實驗室換等。七、安全管理信息對接：在衛(wèi)健康政部統(tǒng)籌下，做好標本 采集、核酸檢測、檢測報告的信息對接。建統(tǒng)的信息采集掃碼程序：信息包括姓名、性 別、年齡、份證號、聯(lián)系電話。標本采集的個信息與醫(yī)療機構(gòu)信息系統(tǒng)順利對接。各醫(yī)療機構(gòu)間應(yīng)做到信息互通、互采、互認。四川省新冠核酸檢測信息系統(tǒng)八、信息化管理九、標本混采新增內(nèi)容在群篩查時可以考慮采混采的案進，以提升 核酸檢測效率?；旌蠘吮緮?shù)可以為10 個或者10 個以下（如5合1）。 以10 合1 或5 合1 混采為例，與單檢流程不同的主要 為采集、送檢和檢測結(jié)果的處理。（）采集和送檢流程1.標識及信息登記登記流程：采集前分配10 個或5 個受檢者為組，收集并 登記受檢者相關(guān)