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1、微生物細(xì)胞形態(tài)及菌落特征觀察實驗報告馬子午生命科學(xué)學(xué)院食品科學(xué)與工程專業(yè)14101班02號1.引言1.1實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)細(xì)菌的一般接種方法;了解放線菌、藍(lán)細(xì)菌、酵母菌、霉菌的菌落特征;學(xué)習(xí)并掌握如何觀察細(xì)菌的形態(tài)特征,掌握常用霉菌制片方法。實驗原理放線菌的菌落會產(chǎn)生大量的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲,并進一步分化產(chǎn)生孢子絲和孢子,表面呈粉狀、顆粒狀或絮狀;部分藍(lán)細(xì)菌可以形成孢子,由成串細(xì)胞連成絲狀的藍(lán)細(xì)菌,在細(xì)胞斷裂時形成片段,這個片段由異形胞、營養(yǎng)細(xì)胞以及極節(jié)組成;酵母菌無性繁殖有芽殖、裂殖和產(chǎn)生擲孢子,有性繁殖可以形成子囊和子囊孢子,當(dāng)酵母菌繁殖旺盛時,母細(xì)胞出芽產(chǎn)生的子細(xì)胞沒有脫離母細(xì)胞的時候,子細(xì)胞
2、又開始繁殖,這樣許多細(xì)胞連在一起,形成藕節(jié)狀的假菌絲;霉菌有青霉和曲霉,青霉的菌落形態(tài)特征呈掃帚狀,曲霉的形態(tài)特征為菊花狀的頭和足細(xì)胞。霉菌的有些結(jié)構(gòu)在制片過程中容易被破壞,影響觀察,采用載玻片培養(yǎng)法。簡單易行,并且還可以在同一標(biāo)本上觀察到微生物發(fā)育的不同階段的形態(tài)。12.材料與方法材料與試劑曲霉(Aspergillusspp.),青霉(Penicilliumspp.),放線菌,藍(lán)細(xì)菌,啤酒酵母菌(Sac.cerevisiae),復(fù)紅染液,美藍(lán)染液,棉藍(lán)染液,酸性酒精。儀器與設(shè)備顯微鏡,酒精燈,蓋玻片,載玻片,鑷子,接種環(huán)。方法與步驟放線菌的形態(tài)觀察(插片法)準(zhǔn)備玻片:取一塊干凈的載玻片烘干,
3、放于桌面。接種與觀察:用鑷子從含放線菌菌種的培養(yǎng)基中取一塊蓋玻片,再用鑷子在蓋玻片上取菌種置于載玻片中央位置,直接鏡檢。藍(lán)細(xì)菌形態(tài)觀察準(zhǔn)備玻片:取一塊干凈的載玻片烘干,放于桌面。接種:在載玻片中央滴一滴無菌水,取少量含有藍(lán)細(xì)菌寄生的藻類于無菌水中,用鑷子的頭端慢慢敲碎至無菌水開始呈至綠色,蓋上蓋玻片。鏡檢:直接鏡檢。啤酒酵母子囊孢子形態(tài)觀察準(zhǔn)備玻片:取一塊干凈的載玻片烘干,放于桌面。取菌涂片:在載玻片中央滴一滴無菌水,用接種環(huán)從含有啤酒酵母菌的試管中取菌種涂于無菌水中。干燥固定:將已接種的載玻片放于酒精燈上方用文火干燥,待干燥后將載玻片穿于火焰中間固定。染色:向載玻片滴加復(fù)紅染液,與酒精燈上方
4、加熱,5-10分鐘即可。脫色:用酸性酒精脫色30-60S,水洗。再染色:用美藍(lán)染色5-10s,水洗,干燥。鏡檢霉菌形態(tài)觀察準(zhǔn)備玻片:取兩塊干凈的載玻片烘干,放于桌面,往兩塊載玻片中央分別滴加一滴無菌水和棉藍(lán)染液。取菌涂片:在滴無菌水的載玻片上取曲霉菌涂于載玻片中央,在滴棉藍(lán)染液的載玻片上取青霉菌涂于載玻片中央。鏡檢:分別蓋上蓋玻片,直接鏡檢。微生物菌落特征觀察觀察培養(yǎng)基中不同菌落的特征3結(jié)果與分析放線菌形態(tài)觀察基內(nèi)菌絲氣生菌絲40X顯微鏡觀察藍(lán)細(xì)菌形態(tài)觀察異形細(xì)胞營養(yǎng)細(xì)胞40X顯微鏡觀察啤酒酵母形態(tài)觀察40X顯微鏡觀察霉菌形態(tài)觀察40X顯微鏡觀察曲霉40X顯微鏡觀察青霉微生物菌落特征比較菌種觀
5、察特征多數(shù)放線菌有基內(nèi)菌絲和氣生菌絲的分化,氣生菌絲成熟時分化成抱子放線菌絲并產(chǎn)生成串的干粉狀孢子,使菌落干燥,不透明、表面呈致密的絨絲狀,正反面顏色不一致,并常有輻射狀褶狀等細(xì)菌多數(shù)細(xì)菌的菌落一般呈現(xiàn)濕潤、光滑、透明、較粘稠、質(zhì)地均勻及顏色較一致等酵母菌酵母菌的細(xì)胞形態(tài)一般呈乳白色或紅色,表面濕潤粘稠,出芽形成的子細(xì)胞尚未和母細(xì)胞分開,又長出新芽,形成成串的細(xì)胞,呈假絲狀等菌落質(zhì)地比較疏松,外觀干燥,不透明,呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛霉菌狀或棉絮狀,與培養(yǎng)基的連接緊密,不易挑取,菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色不一致等4.討論與結(jié)論注意事項實驗過程中要嚴(yán)格控制無菌操作,取菌過程中試管塞不能放在實驗臺上,整個過程要在酒精燈的火焰旁完成,接種環(huán)取菌前后都應(yīng)該在火焰上灼燒滅菌。復(fù)紅加熱染色的時候不要讓染料蒸干,邊加熱邊滴加染料,脫色的時候用的是酸性酒精,不是平常用的酒精。結(jié)論不同菌有不同的形態(tài),比如
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