生物安全培訓(xùn)

1、1一、實(shí)驗(yàn)室常見疾病病源一 病毒 HIV HBV SARS H1N1 腸道病毒 柯薩奇病毒二 細(xì)菌 痢疾志賀菌 傷寒沙門菌三 支原體、衣原體四 其他2二、消毒滅菌定義1.消毒：是指殺死病原微生物、但不一定能殺死細(xì)菌芽孢的方法。2.滅菌：是指把物體上所有的微生物（包括細(xì)菌芽孢在內(nèi)）全部殺死的方法。3.防腐：是指防止或抑制微生物生長繁殖的方法。4.無菌操作：指防止外界微生物進(jìn)入人體或污染物品和局部環(huán)境的操作技術(shù)。3三、消毒方法（一）物理消毒法1機(jī)械消毒 一般應(yīng)用肥皂刷洗，流水沖凈，可消除手上絕大部分甚至全部細(xì)菌，使用多層口罩可防止病原體自呼吸道排出或侵入。應(yīng)用通風(fēng)裝置過濾器可使手術(shù)室、實(shí)驗(yàn)室及隔離

2、病室的空氣，保持無菌狀態(tài)。 4三、消毒方法2熱力消毒 包括火燒、煮沸、流動蒸氣、高熱蒸氣、干熱滅菌等。能使病原體蛋白凝固變性，失去正常代謝機(jī)能。 （1）火燒 凡經(jīng)濟(jì)價值小的污染物，金屬器械和尸體等均可用此法。簡便經(jīng)濟(jì)、效果穩(wěn)定。 （2）煮沸 耐煮物品及一般金屬器械均用本法，10012分鐘即完成消毒，但芽胞則須較長時間。炭疽桿菌芽胞須煮沸30分鐘，破傷風(fēng)芽胞需3小時，肉毒桿菌芽胞需6小時。金屬器械消毒，加12%碳酸鈉或0.5%軟肥皂等堿性劑，可溶解脂肪，增強(qiáng)殺菌力。物品煮沸消毒時，不可超過容積3/4，應(yīng)浸于水面下。注意留空隙，以利對流。 5三、消毒方法（3）流動蒸氣消毒相對濕度80100%，溫度

3、近100，利用水蒸氣在物體等表面凝聚，放出熱能，殺滅病原體。并當(dāng)蒸氣凝聚收縮產(chǎn)生負(fù)壓時，促進(jìn)外層熱蒸氣進(jìn)入補(bǔ)充，穿至物品深處，加強(qiáng)熱量，促進(jìn)消毒。 （4）高壓蒸氣滅菌 通常壓力為103.4kPa，溫度121126，1520分鐘即能徹底殺滅細(xì)菌芽胞，適用于耐熱、潮物品。 （5）干熱滅菌 干熱空氣傳導(dǎo)差，熱容量小，穿透力弱，物體受熱較慢。需160170，12小時才能滅菌。適用于不能帶水份的玻璃容器，金屬器械等。 6三、消毒方法3輻射消毒 有非電離輻射與電離輻射二種。前者有紫外線，紅外線和微波，后者包括丙種射線的高能電子束（陰極射線）。紅外線和微波主要依靠產(chǎn)熱殺菌。電離輻射設(shè)備昂貴，對物品及人體有一

4、定傷害，故使用較少。目前應(yīng)用最多為紫外線，可引起細(xì)胞成份、特別是核酸、原漿蛋白和酸發(fā)生變化，導(dǎo)致微生物死亡。紫外線波長范圍21003280A，殺滅微生物的波長為20003000A，以25002650A作用最強(qiáng)。對紫外線耐受力以真菌孢子最強(qiáng)，細(xì)菌芽胞次之，細(xì)菌繁殖體最弱，僅少數(shù)例外。紫外線穿透力差，3000A以下者不能透過2mm厚的普通玻璃?？諝庵袎m埃及相對濕度可降低其殺菌效果。對水的穿透力隨深度和濁度而降低。但因使用方便，對藥品無損傷，故廣泛用于空氣及一般物品表面消毒。照射人體能發(fā)生皮膚紅斑，紫外線眼炎和臭氧中毒等。故使用時人應(yīng)避開或采用相應(yīng)的保護(hù)措施。 7三、消毒方法（二）化學(xué)消毒法根據(jù)對病

5、原體蛋白質(zhì)作用，分為以下幾類。 1凝固蛋白消毒劑 包括酚類、酸類和醇類。 （1）酚類 主要有酚、來蘇、六氯酚等。具有特殊氣味，殺菌力有限?？墒辜徔椘纷兩鹉z類物品變脆，對皮膚有一定的刺激，故除來蘇外應(yīng)用者較少。 苯酚（石炭酸）（carbolic acid）：無色結(jié)晶，有特殊臭味，受潮呈粉紅色，但消毒力不減。為細(xì)胞原漿毒，對細(xì)菌繁殖型1：801：110溶液，2030分鐘可殺死，但不能殺滅芽胞和抵抗力強(qiáng)的病毒。加肥皂可皂化脂肪，溶解蛋白質(zhì)，促進(jìn)其滲透，加強(qiáng)消毒效應(yīng)，但毒性較大，對皮膚有刺激性，具有惡臭，不能用于皮膚消毒。 來蘇（煤酚皂液）（lysol）：以47.5%甲酚和鉀皂配成。紅褐色，易溶于

6、水，有去污作用，殺菌力較石炭酚強(qiáng)25倍。常用為25%水溶液，可用于噴灑、擦試、浸泡容器及洗手等。細(xì)菌繁殖型1015分鐘可殺滅，對芽胞效果較差。 六氯酚（hexochlorophane）：為雙酚化合物，微溶于水，易溶于醇、酯、醚，加堿或肥皂可促進(jìn)溶解，毒性和刺激性較少，但殺菌力較強(qiáng)。主要用于皮膚消毒。以2.53%六氯酚肥皂洗手可減少皮膚細(xì)菌8090%，有報告可產(chǎn)生神經(jīng)損害，故不宜長期使用。 8三、消毒方法（2）酸類 對細(xì)菌繁殖體及芽胞均有殺滅作用。但易損傷物品，故一般不用于居室消毒。乳酸常用于空氣消毒，100m3空間用10g乳酸薰蒸30分鐘，即可殺死葡萄球菌及流感病毒。 （3）醇類 乙醇（酒精）

7、（ethyl alcohol）75%濃度可迅速殺滅細(xì)菌繁殖體，對一般病毒作用較慢，對肝炎病毒作用不肯定，對真菌孢子有一定殺滅作用，對芽胞無作用。用于皮膚消毒和體溫計(jì)浸泡消毒。因不能殺滅芽胞，故不能用于手術(shù)器械浸泡消毒。（4）異丙醇(isopropylalcohol) 對細(xì)菌殺滅能力大于乙醇，經(jīng)肺吸收可導(dǎo)致麻醉，但對皮膚無損害，可代替乙醇應(yīng)用。 9三、消毒方法2溶解蛋白消毒劑 主要為堿性藥物，常用有氫氧化鈉、石灰等。 （1）氫氧化鈉 白色結(jié)晶，易溶于水，殺菌力強(qiáng)，24%溶液能殺滅病毒及細(xì)菌繁殖型，10%溶液能殺滅結(jié)核桿菌，30%溶液能于10分鐘殺滅芽胞，因腐蝕性強(qiáng)，故極少使用，僅用于消滅炭疽菌芽

8、胞。 （2）石灰（CaO）遇水可產(chǎn)生高溫并溶解蛋白質(zhì)，殺滅病原體。常用1020%石灰乳消毒排泄物，用量須2倍于排泄物，攪拌后作用45小時。20%石灰乳用于消毒炭疽菌污染場所，每46小時噴灑一次，連續(xù)23次。刷墻2次可殺滅結(jié)核芽胞桿菌。因性質(zhì)不穩(wěn)定，故應(yīng)用時應(yīng)新鮮配制。 10三、消毒方法3氧化蛋白類消毒劑 包括含氯消毒劑和過氧化物類消毒劑。因消毒力強(qiáng)，故目前在醫(yī)療防疫工作中應(yīng)用最廣。 （1）漂白粉 應(yīng)用最廣。主要成分為次氯酸鈣Ca(ClO)2，含有效氯2530%，性質(zhì)不穩(wěn)定，可為光、熱、潮濕及CO2所分解。故應(yīng)密閉保存于陰暗干燥處，時間不超過1年。有效成份次氯酸可滲入細(xì)胞內(nèi)，氧化細(xì)胞酶的硫氫基因

9、，破壞胞漿代謝。酸性環(huán)境中殺菌力強(qiáng)而迅速，高濃度能殺死芽胞，粉劑中用于糞、痰、膿液等的消毒。每升加干粉200克，攪拌均勻，放置12小時，尿每升加干粉5克，放置10分鐘即可。1020%乳劑除消毒排泄物和分泌物外，可用以噴灑廁所，污染的車輛等。如存放日久，應(yīng)測實(shí)際有效氯含量，校正配制用量。漂白粉精的粉劑和片劑含有效氯可達(dá)6070%，使用時可按比例減量。11三、消毒方法（2）氯胺T（chloramine T） 為有機(jī)氯消毒劑，含有效氯2426%，性較穩(wěn)定，密閉保持1年，僅喪失有效氯0.1%。微溶于水（12%），刺激性和腐蝕性較小，作用較次氯酸緩慢。0.2%1小時可殺滅細(xì)菌繁殖體，5%2小時可殺滅結(jié)核

10、桿菌，殺滅芽胞需10小時以上。各種銨鹽可促進(jìn)其殺菌作用。12.5%溶液對肝炎病毒亦有作用。活性液體須用前12小時配制，時間過久，殺菌作用降低。 （3）二氯異氰尿酸鈉(soddichlorisocynurate)又名優(yōu)氯凈，為應(yīng)用較廣的有機(jī)氯消毒劑，含氯6064.5%。具有高效、廣譜、穩(wěn)定、溶解度高、毒性低等優(yōu)點(diǎn)。水溶液可用于噴灑、浸泡、擦沫，亦可用干粉直接消毒污染物，處理糞便等排泄物，用法同漂白粉。直接噴灑地面，劑量為1020g/m2。與多聚甲醛干粉混合點(diǎn)燃，氣體可用薰蒸消毒，并可與磺酸鈉配制成各種消毒洗滌液，如滌靜美，優(yōu)氯凈等。對肝炎病毒有殺滅作用。 此外有氯化磷酸三鈉、氯溴二氰尿酸等效用相

11、同。 12三、消毒方法（4）過氧乙酸(peroxyacetic acid)亦名過氧醋酸，為無色透明液體，易揮發(fā)有刺激性酸味，是一種速效消毒劑，易溶于水和乙醇等有機(jī)溶劑，有漂白和腐蝕作用，性質(zhì)不穩(wěn)定，遇熱、有機(jī)物，重金屬離子、強(qiáng)大堿等易分解。0.010.5%，0.510分鐘可殺滅細(xì)菌繁殖體，1%5分鐘可殺滅芽胞，常用濃度為0.52%，可通過浸泡、噴灑、擦抹等方法進(jìn)行消毒，在密閉條件下進(jìn)行氣霧（5%濃度， 2.5ml/m2）和熏蒸(0.751.0g/m3)消毒。 （5）過氧化氫 36%溶液，10分鐘可以消毒。1025%60分鐘，可以滅菌，用于不耐熱的塑料制品，餐具、服裝等消毒。10%過氧化氫氣深膠

12、噴霧消毒室內(nèi)污染表面；180200ml/m3，30分鐘能殺滅細(xì)菌繁殖體；400ml/m3，60分鐘可殺滅芽胞。 （6）高錳酸鉀 15%濃度浸泡15分鐘，能殺死細(xì)菌繁殖體，常用于食具、瓜果消毒。 13三、消毒方法4陽離子表面活性劑（ Cationic surfactants）主要有季銨鹽類，高濃度凝固蛋白，低濃度抑制細(xì)菌代謝。有殺菌作用，毒性和刺激性小，無漂白及腐蝕作用，無臭、穩(wěn)定、水溶性好等優(yōu)點(diǎn)。但殺菌力不強(qiáng)，尤其對芽胞效果不佳，受有機(jī)物影響較大，配伍禁忌較多，為其缺點(diǎn)。國內(nèi)生產(chǎn)有新潔爾滅，消毒寧（度米蒼）和消毒凈，以消毒寧殺菌力較強(qiáng)，常用濃度0.51.0，可用于皮膚，金屬器械，餐具等消毒。不

13、宜作排泄物及分泌物消毒用。 14三、消毒方法5烷基化消毒劑 （1）福爾馬林為3440%甲醛溶液，有較強(qiáng)大殺菌作用。13%溶液可殺死細(xì)菌繁殖體，5%溶液90分鐘殺死芽胞，室內(nèi)熏蒸消毒一般用20ml/m3加等量水，持續(xù)10小時，消除芽胞污染，則需80ml/m324小時，適用于皮毛、人造纖維、絲織品等不耐熱物品。因其穿透力差，刺激性大，故消毒物品應(yīng)攤開，房屋須密閉。 （2）戊二醛（glutaraldehyde）作用似甲醛。在酸性溶液中較穩(wěn)定，但殺菌效果差，在堿性液中能保持2周，且可提高殺菌效果，故通常2%戊醛內(nèi)加0.3%碳酸氫鈉，校正pH值為化合物(殺菌效果增強(qiáng)，可保持穩(wěn)定性18個月。無腐蝕性，有廣

14、譜、速效、高熱、低毒等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛用于殺細(xì)菌，芽胞和病毒消毒。不宜用作皮膚、粘膜消毒。 （3）環(huán)氧乙烷(epoxyethane) 低溫時為無色液體，沸點(diǎn)10.8，故常溫下為氣體滅菌劑。其作用為通過烷基化，破壞微生物的蛋白質(zhì)化謝。一般應(yīng)用是在15時0.40.7kg/m2，持續(xù)1248小時。溫度升高10，殺菌力可增強(qiáng)1倍以上，相對濕度30%滅菌效果最佳。具有活性高，穿透力強(qiáng)，不損傷物品，不留殘毒等優(yōu)點(diǎn)，可用于紙張、書籍、布、皮毛、塑料，人造纖維、金屬品消毒。因穿透力強(qiáng)，故需在密閉容器中進(jìn)行消毒。須避開明火以防爆。消毒后通風(fēng)防止吸入。 15三、消毒方法6其他 （1）碘通過鹵化作用，干擾蛋白質(zhì)代謝。作

15、用迅速而持久，無毒性，受有機(jī)物影響小。常有碘酒、碘伏（碘與表面活性劑為不定型結(jié)合物）。常用于皮膚粘膜消毒，醫(yī)療器械應(yīng)急處理。 （2）洗必泰(hibitane) 為雙胍類化合物。對細(xì)菌有較強(qiáng)的消毒作用?？捎糜谑帧⑵つw、醫(yī)療器械、衣物等消毒，常用濃度為0.21。 7. 二氧化氯 二氧化氯因?yàn)槠渚哂袣⒕芰?qiáng)，對人體及動物沒有危害以及對環(huán)境不造成二次污染等特點(diǎn)而備受人們的青睞。二氧化氯不僅是一種不產(chǎn)生致癌物的廣譜環(huán)保型殺菌消毒劑，而且還在殺菌、食品保鮮、除臭等方面表現(xiàn)出顯著的效果。 二氧化氯還可以用于漂白，如紡織與造紙?jiān)捎寐葰馄椎亩伎梢杂枚趸忍娲?6四、消毒效果監(jiān)測空氣消毒效果監(jiān)測 1、采

16、樣時間：消毒后、操作前進(jìn)行采樣。 2、采樣方法： （1）布點(diǎn)： 室內(nèi)面積30 m2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點(diǎn)，內(nèi)外點(diǎn)距墻1m；室內(nèi)面積 30 m2，設(shè)四角及中央5點(diǎn)，四角點(diǎn)距墻1m。 （2）平板暴露法 平板直徑9cm、采樣高度1.5m，暴露5min。 3、檢驗(yàn)方法 平板37培養(yǎng)48h。計(jì)數(shù)菌落數(shù)并分離致病菌。17四、消毒效果監(jiān)測4、平板暴露法結(jié)果計(jì)算:細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）= 50000N /（ AT） A為平板面積（cm2）； T 為暴露時間（min）；N 為平均菌落數(shù)（cfu） 5、結(jié)果判定 :（1）I類區(qū)域:細(xì)菌總數(shù)10cfu/cm3，并未檢出致病菌為消毒合格。 （2）類區(qū)域:細(xì)菌總數(shù)2

17、00cfu/cm3，并未檢出致病菌為消毒合格。 （3） III類區(qū)域:細(xì)菌總數(shù)500cfu/cm3，并未檢出致病菌為消毒合格。 6、注意事項(xiàng)：采樣前關(guān)好門窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進(jìn)行采樣。 18五、紫外線燈監(jiān)測紫外線燈管強(qiáng)度的檢測： 1、紫外線是不可見光，紫光殺菌。 2、紫外線直射、折射。 3、紫外線穿透力弱。 4、殺菌紫外線為C波段，中心波長2537AO 5、紫外線殺菌劑量：強(qiáng)度 X 時間 6、檢測紫外線燈管強(qiáng)度的方法：紫外線強(qiáng)度儀；紫外線強(qiáng)度指示卡 7、紫外線燈管的質(zhì)量：玻璃無氣泡、氣線；啟動快；不閃動；壽命長；19五、紫外線燈監(jiān)測8、紫外線強(qiáng)度測試距燈光垂直100cm照射

18、直接讀強(qiáng)度值。 9 、照射強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)：30W燈管 新燈90W/cm2； 舊燈70W/cm2 注意：作好防護(hù)：戴眼鏡、手套，必要時戴防護(hù)面罩。 紫外燈管開啟后穩(wěn)定5分鐘后，讀測試數(shù)值。 紫外線強(qiáng)度變化與燈管質(zhì)量電壓，反光罩光潔度等有關(guān)。 20六、感染性物質(zhì)溢灑處置程序溢出事件發(fā)生后，應(yīng)立即采取應(yīng)急措施：1.應(yīng)通知同實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有人員2.經(jīng)過事件發(fā)生現(xiàn)場的每一個人都被要求提供幫助。3.保持冷靜，遵照生物安全級實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急行為應(yīng)急消毒及清潔（a。應(yīng)急消毒前開啟機(jī)械通風(fēng)，用布或紙巾覆蓋吸收溢出物；b。向紙巾上傾倒適當(dāng)消毒劑，如75%酒精或0.5%次氯酸鈉溶液，消毒劑宜從溢出區(qū)域外周圍逐漸順時針向中心噴灑，立即覆蓋所有污染區(qū)域。）4.引發(fā)溢出事件人員應(yīng)由同事或工作主管給予幫助（如果同時發(fā)生了針刺或扎傷，可以用消毒劑和水清洗受傷區(qū)域，