【備戰(zhàn)2022年高考生物】 PCR技術(shù)

1、考點(diǎn)80PCR技術(shù)高考頻度：難易程度：闊考點(diǎn)解轡1.PCR原理(1)細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制條件條件組分作用模板DNA的兩條單鏈提供復(fù)制的模板原料四種脫氧核苷酸合成DNA子鏈的原料酶解旋酶DNA聚合酶打開(kāi)DNA雙螺旋催化合成DNA子鏈能量ATP為解螺旋和合成子鏈供能引物RNA為DNA聚合酶提供合成的3端起點(diǎn)(2)細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?，通常將DNA的羥基末端稱(chēng)為3端，而磷酸基團(tuán)的末端稱(chēng)為5端。DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA，而只能從3端延伸DNA鏈，因此，DNA復(fù)制需要引物。DNA的合成方向總是從子鏈的5端向3端延伸。在DNA的復(fù)制過(guò)程中，復(fù)制的前提是雙鏈解開(kāi)。在體外可通過(guò)

2、控制溫度來(lái)實(shí)現(xiàn)。在80100C的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開(kāi)，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為變性。PCR利用了DNA的熱變性原理，通過(guò)控制溫度來(lái)控制雙鏈的解聚與結(jié)合。由于PCR過(guò)程的溫度高，導(dǎo)致DNA聚合酶失活，后來(lái)耐高溫的DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，大大增加了PCR的效率。PCR反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中進(jìn)行，需提供:DNA模板，分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物，四種脫氧核苷酸，耐熱的DNA聚合酶，同時(shí)通過(guò)控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。2.PCR的反應(yīng)過(guò)程PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為變性、復(fù)性和延伸三步。從第二輪循環(huán)開(kāi)始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng)，并且由引物I

3、延伸而成的DNA單鏈會(huì)與引物II結(jié)合，進(jìn)行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列，使這段固定長(zhǎng)度的序列成指數(shù)擴(kuò)增。3.實(shí)驗(yàn)操作PCR反應(yīng)體系：緩沖液、DNA模板，四種脫氧核苷酸原料、熱穩(wěn)定的DNA聚合酶、兩種RNA引物、水。實(shí)驗(yàn)操作步驟按照PCR反應(yīng)體系配方配制反應(yīng)液；將PCR反應(yīng)體系50“L用微量移液器轉(zhuǎn)移到微量離心管(0.5mL)中；將微量離心管放到PCR儀中；設(shè)置PCR儀的工作參數(shù)；DNA在PCR儀中大量擴(kuò)增?？枷騊CR的反應(yīng)過(guò)程PCR是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，下列有關(guān)PCR過(guò)程的敘述，不正確的是變性過(guò)程中破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對(duì)之間的氫鍵

4、復(fù)性過(guò)程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成延伸過(guò)程中需要DNA聚合酶、ATP、四種核糖核苷酸PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相比所需要酶的最適溫度較高【參考答案】C【試題解析】PCR技術(shù)變性過(guò)程中是通過(guò)高溫破壞DNA分子內(nèi)堿基對(duì)之間的氫鍵，進(jìn)而使DNA分子解鏈，該過(guò)程在細(xì)胞內(nèi)是通過(guò)解旋酶實(shí)現(xiàn)的，A項(xiàng)正確；復(fù)性過(guò)程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成的，B項(xiàng)正確；PCR反應(yīng)的產(chǎn)物是DNA，所需原料應(yīng)為四種脫氧核苷酸，所以,延伸過(guò)程中需要DNA聚合酶、ATP、四種脫氧核苷酸，C項(xiàng)錯(cuò)誤；PCR過(guò)程所需的酶是耐高溫的DNA聚合酶，比細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程所需的DNA聚合酶的最適

5、溫度高，D項(xiàng)正確。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類(lèi)似（如下圖所示）。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。下列敘述錯(cuò)誤的是r:i:：I：H1TE1IIIHT：I：II：闇用汀川川iinnihiiiimiii11*11iiiihi用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列B.設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成堿基互補(bǔ)配對(duì)而造成引物自連退火溫度過(guò)高可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物第四輪循環(huán)產(chǎn)物中同時(shí)含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例為15/16【答案】D【解析】用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)，要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物（兩種

6、），但不必知道基因的全部序列，A正確；設(shè)計(jì)引物時(shí)，需要避免引物之間形成堿基互補(bǔ)配對(duì)而造成引物自連，B正確；退火的目的是使兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條DNA單鏈結(jié)合，因此退火溫度過(guò)高可能引起兩種引物不能與兩條DNA單鏈結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，C正確；DNA復(fù)制為半保留復(fù)制，第四輪循環(huán)即DNA復(fù)制4次，共形成24=16個(gè)DNA分子，其中含有最初模板鏈的2個(gè)DNA分子含有引物A或引物B，其余14個(gè)DNA分子均含有引物A和引物B，所以第四輪循環(huán)產(chǎn)物中同時(shí)含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例為14/16=7/8，D錯(cuò)誤。A.PCR是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技

7、術(shù)PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈轉(zhuǎn)錄利用PCR技術(shù)獲取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列PCR擴(kuò)增中不需要解旋酶解開(kāi)雙鏈DNA2下列有關(guān)PCR技術(shù)的說(shuō)法，不正確的是PCR是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技術(shù)PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制利用PCR技術(shù)獲取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列PCR擴(kuò)增中需要解旋酶解開(kāi)雙鏈DNA標(biāo)準(zhǔn)的PCR過(guò)程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，這三大步需要的溫度依次是94C、55C、72C72C、50C、92C50C、92C、72C80C、50C、72C4用PCR技術(shù)將DNA分子中的A1片段進(jìn)行擴(kuò)增，設(shè)計(jì)了引物I、II,其連接

8、部位如圖所示，x為某限制酶識(shí)別序列。擴(kuò)增后得到的絕大部分DNA片段是圖中的A片段1匚II:mmXC.IllUJIlllllKD.lllllllllllllllllRlIAi|B111Ai1A.下列有關(guān)PCR技術(shù)中引物的敘述，正確的是引物是一小段DNA分子或雙鏈RNA分子擴(kuò)增一個(gè)DNA分子至少需要的引物數(shù)目等于新合成的DNA子鏈數(shù)目?jī)煞N引物之間能夠發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)DNA聚合酶只能從引物的5端連接脫氧核苷酸用PCR技術(shù)將DNA分子中的A1片段進(jìn)行擴(kuò)增，設(shè)計(jì)了引物I、11,其連接部位如圖所示,x為某限制酶識(shí)別序列。擴(kuò)增后得到的絕大部分DNA片段是圖中的A.A；片應(yīng)TjXIjIIIIIB.MTTT1川

9、打C1農(nóng)D.|A|用PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株是否成功導(dǎo)入目的基因時(shí)，得到以下電泳圖譜。其中：1號(hào)為DNA標(biāo)準(zhǔn)樣（Marker）,10號(hào)為蒸餾水，PCR過(guò)程中加入的模板DNA如圖所示。據(jù)此作出的分析不合理的是bp120005C020001502號(hào)：U生屋梳杭D陽(yáng)號(hào)：7H號(hào)：轉(zhuǎn)墓囚ttttUNAPCR產(chǎn)物的分子大小在250500bp之間3號(hào)樣品為不含目的基因的載體DNA9號(hào)樣品對(duì)應(yīng)植株不是所需的轉(zhuǎn)基因植株10號(hào)可確定反應(yīng)體系等對(duì)結(jié)果沒(méi)有干擾根據(jù)某基因上游和下游的堿基序列，設(shè)計(jì)合成了用于該基因PCR的兩段引物（單鏈DNA）。引物與該基因變性DNA（單鏈DNA）結(jié)合為雙鏈DNA的過(guò)程稱(chēng)為復(fù)性。下圖是兩

10、引物的Tm（引物熔解溫度，即50%的引物與其互補(bǔ)序列形成雙鏈DNA分子時(shí)的溫度）測(cè)定結(jié)果，下列敘述錯(cuò)誤的是60弓通常引物1和引物2不能有堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系兩引物分別是子鏈延伸的起點(diǎn)，并可以反復(fù)利用若兩引物的脫氧核苷酸數(shù)相同，推測(cè)引物2的GC含量較高復(fù)性所需溫度與時(shí)間，取決于引物的長(zhǎng)度、堿基組成及其濃度等因素以下為形成cDNA過(guò)程和PCR擴(kuò)增過(guò)程示意圖。據(jù)圖分析，下列說(shuō)法正確的是RNASEDNASS-IIWBBRNA單鏈雜交雙鏈雙鏈DMA90-95r55-60T：J170-75乜過(guò)程發(fā)生的變化是引物與單鏈DNA結(jié)合催化過(guò)程的酶是DNA聚合酶催化過(guò)程的酶都必須能耐高溫過(guò)程需要解旋酶在遺傳病及刑偵破案

11、中常需要對(duì)樣品DNA進(jìn)行分析，PCR技術(shù)能快速擴(kuò)增DNA片段，在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的DNA拷貝，有效地解決了因?yàn)闃悠分蠨NA含量太低而難以對(duì)樣品進(jìn)行分析研究的問(wèn)題。據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題。込鏈S-GGIC3r5GGQtl(引物邛CG5引物衛(wèi)訊95DCp.一一TY中一血一G八55DCp5GGTC33fCCAG5f72DC1(1)在相應(yīng)的橫線上寫(xiě)出引物II,并在復(fù)性這一步驟中將引物II置于合適的位置。在相應(yīng)的橫線上寫(xiě)出循環(huán)一次后生成的DNA分子。若將作為原料的四種脫氧核苷酸用32P標(biāo)記，請(qǐng)分析循環(huán)一次后生成的DNA分子的特點(diǎn):循環(huán)n次后生成的DNA分子中不含放射性的單鏈占總單鏈的比例為。PCR反應(yīng)

12、過(guò)程的前提條件，PCR技術(shù)利用了DNA的原理解決了這個(gè)問(wèn)題。在對(duì)樣品DNA分析過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，DNA摻雜著一些組蛋白，要去除這些組蛋白可加入的物質(zhì)是誇真題過(guò)關(guān)TOC o 1-5 h z2/11.(2019全國(guó)卷138)基因工程中可以通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因?；卮鹣铝袉?wèn)題?；蚬こ讨兴玫哪康幕蚩梢匀斯ず铣桑部梢詮幕蛭膸?kù)中獲得。基因文庫(kù)包扌和_生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原

13、因是。(2018江蘇卷)為生產(chǎn)具有特定性能的a-淀粉酶，研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆了a-淀粉酶基因(1656個(gè)堿基對(duì))，利用基因工程大量制備琢a-淀粉酶，實(shí)驗(yàn)流程見(jiàn)下圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：4淀粉普牡國(guó)應(yīng)達(dá)投體二1構(gòu)軽抵組農(nóng)達(dá)戲體r論蛆糾駁這宦林逛入硏主細(xì)胞匸秤曲的箭邊勺噬宦|T稈晦的人盤(pán)焙莽皿箱幡產(chǎn)齡井新利用PCR技術(shù)擴(kuò)增a-淀粉酶基因前，需先獲得細(xì)菌的。為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接，需在引物的端加上限制性酶切位點(diǎn)，且常在兩條引物上設(shè)計(jì)加入不同的限制性酶切位點(diǎn)，主要目的是。進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)的溫度和時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定，下列選項(xiàng)中的設(shè)定與引物有關(guān)，的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度有關(guān)。(填

14、序號(hào))變性溫度退火溫度延伸溫度變性時(shí)間退火時(shí)間延伸時(shí)間下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼a-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列：S-：AUGC：CAUCAACAAAUAnMACACU：U3|?圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含個(gè)密碼子，如虛線框后的序列未知，預(yù)測(cè)虛線框后的第一個(gè)密碼子最多有種。獲得工程菌表達(dá)的a-淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測(cè)定酶活性，結(jié)果如下:緩沖液50mmol/LNa2HPO4-KH2PO450mmol/LTris-HCl50mmol/LGly-NaOHpH6.06.57.07.57.58.08.59.09.09.510.010.5酶相對(duì)活性25.44

15、0.249.863.270.195.599.585.368.163.741.520.8根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，初步判斷該a-淀粉酶活性最高的條件為。(2016天津卷)人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從人血漿中制備。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA(rHSA)的兩條途徑。USA基即他加IUtjft屮rHSA獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取合成總cDNA,然后以cDNA為模板,采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請(qǐng)用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要

16、選擇的啟動(dòng)子是(填寫(xiě)字母，單選)。A.人血細(xì)胞啟動(dòng)子B.水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子C.大腸桿菌啟動(dòng)子D.農(nóng)桿菌啟動(dòng)子利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過(guò)程中，需添加酚類(lèi)物質(zhì)，其目的。人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過(guò)膜系統(tǒng)加工形成正確空間結(jié)構(gòu)才能有活性。與途徑II相比,選擇途徑I獲取rHSA的優(yōu)勢(shì)是的生物學(xué)功能一致。(5)為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，須確認(rèn)rHSA與1.【答案】B【解析】AB項(xiàng)、PCR是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技術(shù)，其原理是DNA雙鏈復(fù)制，故A項(xiàng)正確，B項(xiàng)錯(cuò)誤；C、利用PCR技術(shù)獲取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物，C項(xiàng)正確；D、

17、PCR擴(kuò)增中首先要使目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，不需要解旋酶解開(kāi)雙鏈DNA，故D項(xiàng)正確。2【答案】D【解析】PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技術(shù)，A正確；PCR技術(shù)以解開(kāi)的雙鏈作為模版，利用的原理是DNA雙鏈復(fù)制，B正確；前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正確；雙鏈DNA模板在高溫作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA，可見(jiàn)該過(guò)程不需要解旋酶解開(kāi)雙鏈DNA，D錯(cuò)誤。3【答案】A【解析】標(biāo)準(zhǔn)的PCR過(guò)程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，其中變性需要高溫使DNA解螺旋，溫度為9096C;復(fù)性是在較低溫度下，兩種引物和DNA單鏈想結(jié)合，溫

18、度為50C左右；延伸為在DNA聚合酶的作用下，合成新的DNA鏈，溫度為7075C。綜上所述，A正確，B、C、D錯(cuò)誤。4【答案】D【解析】利用PCR技術(shù)將DNA分子中的A1片段進(jìn)行擴(kuò)增，當(dāng)引物與母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合后，子鏈延伸的方向總是從5端到3端，據(jù)此依題意和圖示分析可知，A、B、C均錯(cuò)誤，D正確。5【答案】B【解析】引物是一小段單鏈DNA或RNA，可與DNA母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行結(jié)合，A錯(cuò)誤；擴(kuò)增一個(gè)DNA分子至少需要的引物數(shù)目等于新合成的DNA子鏈數(shù)目，B正確；引物與DNA母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行結(jié)合，兩種引物之間不能發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，C錯(cuò)誤；DNA聚合酶只能從引物的3端連接脫氧核苷

19、酸，D錯(cuò)誤。6【答案】D【解析】利用PCR技術(shù)將DNA分子中的A1片段進(jìn)行擴(kuò)增，當(dāng)引物與母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合后，子鏈延伸的方向總是從5端到3端，據(jù)此依題意和圖示分析可知，A、B、C均錯(cuò)誤，D正確。7【答案】B【解析】PCR過(guò)程中，可以通過(guò)設(shè)計(jì)特定的引物來(lái)擴(kuò)增特定的DNA片段，49號(hào)是轉(zhuǎn)基因植株，理論上應(yīng)包含目的基因，結(jié)合2號(hào)野生型和10號(hào)蒸餾水組的結(jié)果，推測(cè)包含目的基因的片段大小應(yīng)為250500bp，A正確；3號(hào)PCR結(jié)果包含250500bp片段，應(yīng)包含目的基因，B錯(cuò)誤；9號(hào)PCR結(jié)果不包含250500bp片段，所以不是所需轉(zhuǎn)基因植株，C正確；10號(hào)放入蒸餾水，可排除反應(yīng)體系等對(duì)結(jié)果的干擾

20、，D正確。【答案】B【解析】通常引物1和引物2不能有堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系，以免二者結(jié)合，A項(xiàng)正確；兩引物參與構(gòu)成子鏈，不能反復(fù)利用，B項(xiàng)錯(cuò)誤；若兩引物的脫氧核苷酸數(shù)相同，引物2的熔解溫度較高，推測(cè)其GC含量較高，C項(xiàng)正確；結(jié)合以上分析可知，復(fù)性所需溫度與時(shí)間，取決于引物的長(zhǎng)度、堿基組成及其濃度等因素，D項(xiàng)正確?！敬鸢浮緼【解析】分析題圖：圖示為形成cDNA過(guò)程和PCR擴(kuò)增過(guò)程示意圖，其中是由RNA形成單鏈DNA的過(guò)程，為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程；是由單鏈DNA合成雙鏈DNA的過(guò)程，是DNA分子復(fù)制過(guò)程；是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段，其中是變性、是復(fù)性、是延伸階段。為復(fù)性過(guò)程，發(fā)生的變化是引物與互補(bǔ)DNA鏈結(jié)合

21、，A正確；為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，該過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，B錯(cuò)誤；圖中過(guò)程為DNA復(fù)制，這兩個(gè)過(guò)程都需要DNA聚合酶的催化，其中過(guò)程進(jìn)行的溫度是7075C，因此催化該過(guò)程的DNA聚合酶能耐高溫，但催化過(guò)程的酶不耐高溫，C錯(cuò)誤；過(guò)程為高溫解鏈，該過(guò)程不需要解旋酶，D錯(cuò)誤。HOA-G5FGG（2）循環(huán)一次后生成的DNA分子如下:55C3rCCAG5r-GGTC3(2)5rGGTC3r3f-CC.AG5F-(3)每個(gè)DNA分子各有一條鏈含32P1/2n(4)DNA解旋熱變性(5)蛋白酶10.【答案】(1)5fGAOH(或HOAG5)【解析】（1）由圖可知，引物II為5-G-A-OH51TC3rC(2-認(rèn)一5

22、W弋。（3）若將作為原料的四種脫氧核苷酸用32P標(biāo)記,5r-GOTY丁3h-C-C一ATI根據(jù)DNA半保留復(fù)制特點(diǎn)可知，循環(huán)一次后，每個(gè)DNA分子各有一條鏈含32P，循環(huán)n次后生成的DNA分子中不含放射性的單鏈占總單鏈的比例為2/2n+1=1/2n（4）PCR反應(yīng)過(guò)程的前提條件是DNA解旋，PCR技術(shù)利用DNA的熱變性原理解決了這個(gè)問(wèn)題。（5）在對(duì)樣品DNA進(jìn)行分析的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，DNA摻雜著一些組蛋白，根據(jù)酶的專(zhuān)一性原理，要去除這些組蛋白可加入蛋白酶。11【答案】（1）基因組文庫(kù)cDNA文庫(kù)（2）解旋酶加熱至9095C氫鍵（3）Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活【解析】【

23、分析】基因工程的操作步驟：目的基因的獲?。ɑ蛭膸?kù)獲取、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因表達(dá)載體（含目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)）；把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測(cè)和鑒定（分子水平一DNA分子雜交法、分子雜交法、抗原抗體雜交法和個(gè)體水平抗蟲(chóng)、抗病接種實(shí)驗(yàn)等）?！驹斀狻浚?）基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)（CDNA文庫(kù)），前者包括一種生物的全部基因，后者只包括一種生物的部分基因。（2）體內(nèi)進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)，需要解旋酶和DNA聚合酶，解旋酶可以打開(kāi)雙鏈之間的氫鍵，DNA聚合酶可以催化磷酸二酯鍵的形成。在體外進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，利用高溫變性即加熱至90-95C，破壞雙鏈之間的氫鍵，使DNA成為單鏈。解旋酶和高溫處理都破壞了DNA雙鏈中堿基對(duì)之間的氫鍵。（3）由于在PCR過(guò)程中，需要不斷的改變溫度，該過(guò)程中涉及較高溫度處理變性，大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶在高溫處理下會(huì)變性失活，因此PCR過(guò)程中需要用耐高溫的TaqDNA聚合酶催化。12.【答案】(1)基因組DNA(2)5使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連(3)(4)813(5)pH為8.5，緩沖液為50