醫(yī)學(xué)專題試驗-腦脊液檢驗

1、腦脊液檢驗12021/7/19 星期一實驗一 腦脊液理學(xué)檢查（目的） 掌握腦脊液理學(xué)檢查的內(nèi)容，方法。（標本） 新鮮腦脊液。（操作）1觀察顏色 肉眼觀察腦脊液顏色變化，分別以無色，乳白色，紅色，棕色，或黑色，綠色等文字如實描述報告。22021/7/19 星期一2觀察透明度 肉眼觀察腦脊液透明度變化。正常腦脊液清晰透明，病理情況下可出現(xiàn)不同程度渾濁，可分別以“清晰透明”。“微渾”，“渾濁”等如實報告。3觀察凝塊或薄膜 輕輕傾斜試管，肉眼仔細觀察有無凝塊或薄膜。正常腦脊液無凝塊或薄膜，腦膜炎時可形成凝塊或薄膜，分別以“無凝塊”，“有凝塊”，“有薄膜”等如實報告。32021/7/19 星期一（注意事

2、項） 當標本顏色或透明度改變不明顯時，應(yīng)在燈光下以白色或黑色為背景仔細觀察，同時觀察有無凝塊。 懷疑為結(jié)核性腦膜炎時，標本應(yīng)在24環(huán)境中靜置1224h再觀察腦脊液表面有無薄膜形成。參考值 ：無色，清晰透明，放置后無凝塊或薄膜形成。42021/7/19 星期一實驗二 腦脊液顯微鏡檢查（目的）掌握腦脊液顯微鏡檢查的內(nèi)容，方法。（器材） 顯微鏡，改良牛鮑計數(shù)板，微量吸管?？潭任?，小試管。（試劑） 生理鹽水或紅細胞稀釋液，冰乙酸，白細胞稀釋液，瑞氏染液或瑞吉染液。（標本）新鮮腦脊液。52021/7/19 星期一（操作） 細胞總數(shù)計數(shù)直接計數(shù)法（適用于清晰透明或微渾腦脊液）充池：微量吸管吸取混勻的腦脊

3、液，充入血細胞計數(shù)板的上下2個計數(shù)池。計數(shù)：靜置23min，低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個大方格內(nèi)的細胞數(shù)。計算：10個大方格內(nèi)的細胞總數(shù)即為每微升腦脊液細胞總數(shù)，再換算62021/7/19 星期一稀釋計數(shù)法（適用于渾濁的腦脊液）稀釋：如標本細胞過多，可根據(jù)標本內(nèi)細胞多少，用生理鹽水或紅細胞稀釋液對標本進行一定倍數(shù)稀釋。充池：用微量吸管吸取混勻后的稀釋腦脊液充入1個計數(shù)池。計數(shù)：靜置23后，低倍鏡計數(shù)1個計數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共5個大方格內(nèi)的細胞數(shù)。計算：根據(jù)5個大方格內(nèi)細胞總數(shù)及稀釋倍數(shù)，計算每升腦脊液的細胞總數(shù)。72021/7/19 星期一白細胞計數(shù)直接計數(shù)法（非血性清

4、晰透明或微渾腦脊液）除去紅細胞：在小試管內(nèi)加入冰乙酸12滴，轉(zhuǎn)動試管，使內(nèi)壁粘附少許冰乙酸后傾去，滴加混勻的腦脊液34滴，混勻，放置數(shù)分鐘，使紅細胞破壞。充池：計數(shù)：計算：82021/7/19 星期一稀釋計數(shù)法（渾濁腦脊液）稀釋破壞紅細胞：根據(jù)標本內(nèi)白細胞多少情況，用白細胞稀釋液對標本進行一定倍數(shù)的稀釋，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細胞。充池：用微量吸管吸取混勻稀釋后的腦脊液充入1個計數(shù)池。計數(shù)：靜置23min后，低倍鏡計數(shù)1個計數(shù)池內(nèi)的四角和中央大方格內(nèi)的白細胞數(shù)。計算：根據(jù)5個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)和稀釋倍數(shù)，計算每升腦脊液的白細胞總數(shù) 92021/7/19 星期一白細胞分類計數(shù)直接分類法 白細

5、胞計數(shù)后，轉(zhuǎn)換高倍鏡，根據(jù)細胞的形態(tài)和細胞核形態(tài)進行直接分類，共計數(shù)100個白細胞（包括內(nèi)皮細胞），分別計數(shù)單（個）核細胞（包括淋巴細胞，單核細胞，內(nèi)皮細胞）和多（個）核細胞（粒細胞系）的數(shù)量，結(jié)果以單核細胞百分比和多核細胞百分比報告。如白細胞不足100個，可直接寫出單核細胞和多核細胞具體數(shù)，若白細胞數(shù)不足30個，可不做直接計數(shù)而改用涂片染色分類計數(shù)102021/7/19 星期一涂片染色分類法 若直接分類不易區(qū)別細胞時，可將腦脊液以1000r/min離心5min，取沉淀物，制成均勻薄片，置于室溫或37恒溫箱內(nèi)盡快干燥，瑞氏或瑞吉染色后，油鏡下進行分類計數(shù)，結(jié)果報告與血液白細胞分類計數(shù)報告方式相

6、同。若見激活型單核細胞（比普通單核細胞大，胞質(zhì)邊緣趁、呈花邊狀，胞質(zhì)內(nèi)有空泡），轉(zhuǎn)化型淋巴細胞（形態(tài)似異型淋巴細胞）及室管膜細胞（形態(tài)似大淋巴細胞）應(yīng)計入分類的百分比中 112021/7/19 星期一（注意事項）直接白細胞計數(shù)時，也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出，僅使吸管內(nèi)壁粘附少許冰乙酸，再吸取少量混勻的腦脊液于吸管中，數(shù)分鐘后吸管內(nèi)紅細胞溶解，然后再充池計數(shù)。細胞計數(shù)時，如發(fā)現(xiàn)較多紅細胞有皺縮或腫脹等異?，F(xiàn)象，應(yīng)如實報告，以協(xié)助臨床醫(yī)生鑒別是陳舊性出血或新鮮出血。血性腦脊液中的白細胞必須校正后才有價值白細胞校正數(shù)=腦脊液白細胞未校正數(shù)腦脊液紅細胞數(shù)血液白細胞數(shù)/血液內(nèi)紅細胞數(shù)122

7、021/7/19 星期一細胞涂片時，為了使細胞容易粘在玻片上，可取沉淀的細胞懸液2滴，加血清1滴，混勻后涂片。涂片染色分類時，如見內(nèi)皮細胞或異常細胞，則另行描述報告，必要時用巴氏或HE染色查找腫瘤細胞。實驗結(jié)束后，血細胞計數(shù)板用0.75（V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免損壞計數(shù)板。132021/7/19 星期一方法學(xué)評價腦脊液細胞計數(shù)和分類目前一般任用手工顯微鏡法。白細胞直接分類法簡單，快速，但屬粗略分類，其準確性差，且細胞較小，初學(xué)者難把握，尤其是陳舊性標本的細胞變形，分類更困難，誤差較大。涂片染色分類法分類詳細，結(jié)果準確可靠，尤其是可以發(fā)現(xiàn)異常細胞如腫瘤細胞。該法被推薦使用

8、，但其操作較復(fù)雜，費時。142021/7/19 星期一血液分析儀也可進行腦脊液細胞計數(shù)和白細胞分類，此法簡單，快速，但標本尤其是病理性，陳舊性標本中的組織，細胞的碎片以及細胞變形等都可以影響細胞分類和計數(shù)，故結(jié)果重復(fù)性，可靠性有待進一步探討。另外，蛋白質(zhì)含量高，尤其有凝塊的腦脊液標本容易使儀器堵孔，故不推薦使用152021/7/19 星期一質(zhì)量控制標本采集后應(yīng)在1h內(nèi)進行細胞計數(shù)，若放置太久，細胞可能凝集成團或破壞，影響計數(shù)結(jié)果。標本必須混勻方可充池，否則影響計數(shù)結(jié)果因穿刺損傷血管，引起血性腦脊液，白細胞計數(shù)結(jié)果必須校正，以剔除因出血而帶來的白細胞。細胞計數(shù)時應(yīng)注意新型隱球菌與白細胞，紅細胞區(qū)

9、別162021/7/19 星期一白細胞計數(shù)直接法的試管或吸管中的冰乙酸要盡量去盡，否則結(jié)果偏低。若標本陳舊，細胞變形時，白細胞直接分類法誤差大，推薦用涂片染色分類法分類計數(shù)。涂片染色分類計數(shù)時，離心速度不能太快，否則細胞形態(tài)受影響，有條件的單位可用玻片離心沉淀法，細胞室沉淀法等收集細胞。涂片固定時間不能太長，更不能高溫固定，以免細胞皺縮。172021/7/19 星期一參考值腦脊液細胞總數(shù)：成人（010）106/L,兒童（015）106/L.無紅細胞，僅有少數(shù)白細胞，以單個核細胞為主，幾乎完全為淋巴細胞，偶爾內(nèi)皮細胞。182021/7/19 星期一實驗三 腦脊液蛋白質(zhì)定性檢查目的） 掌握腦脊液蛋

10、白質(zhì)定性試驗（潘迪試驗）的方法。（原理）腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。（器材） 小試管，刻度吸管，尖滴管。（試劑） 飽和苯酚溶液：取苯酚10ml（有結(jié)晶時，先放入56水浴箱中加熱助溶），加蒸餾水至100ml，充分混勻，置入37溫箱中數(shù)小時，見底層有苯酚析出，取上層飽和苯酚溶液于棕色瓶中避光保存。（標本）新鮮腦脊液。192021/7/19 星期一（操作）1加試劑 取試劑2ml于小試管中。2加標本 用尖滴管垂直滴加腦脊液標本12滴。3觀察結(jié)果 在黑暗背景下立即用肉眼觀察結(jié)果。4判斷結(jié)果（1）清晰透明，不呈現(xiàn)云霧狀為（一）。（2）呈微白霧狀，對光不易看見，黑色背景下

11、才能見到為（+）202021/7/19 星期一（3）灰白色云霧狀為（+）。（4）白色渾濁或白色薄云狀沉淀為（+）。（5）白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為（+）。（6）立即形成白色凝塊為（+）。212021/7/19 星期一注意事項當室溫在10以下時，應(yīng)將試劑保存在37溫箱中，否則飽和度降低，可致假陰性。試管內(nèi)徑以小為佳，一般為（13+-1）mm，加入試劑后立即觀察結(jié)果。標本中如紅細胞過多，應(yīng)離心沉淀取上清液檢測222021/7/19 星期一質(zhì)量控制標本因穿刺出血，有血清蛋白混入可引起假陽性。實驗中所用試管和滴管必須潔凈，否則易出現(xiàn)假陽性。苯酚不純可引起假陽性。室溫低于10，苯酚飽和度降低可引起加陰性。人工配置