化學發(fā)光介紹

1、 幻燈片1化學發(fā)光介紹幻燈片2二零零九年元月化學發(fā)光免疫分析方法簡介化學發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)是近十年來在世界范圍內發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高靈敏度、檢測范圍寬、操作簡便快速、標記物穩(wěn)定性好、無污染、儀器簡單經濟等優(yōu)點。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發(fā)展方向。CLIA發(fā)展迅猛，已占各種免疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析最佳的取代者?；脽羝?化學發(fā)光免疫測定是目前世界公認先進的標記免疫測定技術，化學發(fā)光免疫分析技術具有高度的準確性和特異性，成為檢驗方法中最為重要的技術之一。化學發(fā)

2、光免疫分析技術作為疾病診斷的主要手段已被廣泛用于機體免疫功能、傳染性疾病、內分泌功能、腫瘤標志物、性激素、甲狀腺功能等方面的體外診斷實驗中?；脽羝?化學發(fā)光是一種特異的化學反應，有機分子吸收化學能后發(fā)生能級躍遷，產生一種高能級的電子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定的中間體，當其返回到基態(tài)而發(fā)出光子，即為化學發(fā)光。將化學發(fā)光與抗原抗體相結合而形成的免疫分析技術，即為化學發(fā)光免疫分析?；瘜W發(fā)光的發(fā)光類型通常分為閃光型(flashtype)和輝光型(glowtype)兩種。閃光型發(fā)光時間很短，只有零點幾秒到幾秒。輝光型又稱持續(xù)型，發(fā)光時間從幾分鐘到幾十分鐘，或幾小時至更久。閃光型的樣品必須立即測量，必須配以全自動化的加

3、樣及測量儀。測量輝光型的樣品可以使用通用型儀器，也可以配全自動化儀器。北京泰格科信的化學發(fā)光免疫分析診斷試劑發(fā)光類型為輝光型。幻燈片5化學發(fā)光免疫分析的優(yōu)勢靈敏度高靈敏度高是化學發(fā)光免疫分析關鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達0-22mol/L(RIA為10-12mol/L)化學發(fā)光免疫分析能夠檢出放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質，對疾病的早期診斷具有十分重要的意義?；脽羝?寬的線性動力學范圍發(fā)光強度在46個量級之間與測定物質濃度間呈線性關系。這與顯色的酶免疫分析吸光度(0D值)為2.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然IA也有較寬的線性動力學范圍，但放射性限制了其應用。光信號持續(xù)時間長輝光型的C

4、LIA產生的光信號持續(xù)時間可達數(shù)小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量?；脽羝?分析方法簡便快速絕大多數(shù)分析測定均為僅需加入一種試劑（或復合試劑）的一步模式。結果穩(wěn)定、誤差小樣品系直接自己發(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響，使分析結果靈敏穩(wěn)定可靠。安全性好及使用期長免除了使用放射性物質。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)其危害性；試劑穩(wěn)定，保存期可達一年。幻燈片8目前化學發(fā)光開展的項目1、乙肝兩對半（表面抗原、表面抗體、E抗原、E抗體、核心抗體）6、肝纖維化檢測（HA,LN,PCIII,CIV,FN）2、腫瘤標志物(AFP,CEA,PSA,FPSA,

5、FER,CA199,CA125,CA153,B-2MG)7、不育不孕類（AOA,AEA,ASA,HCG）3、性激素系列(LH,FSH,TSH,E2,PR0,PRL,TES,HCG,B-HCG)8、優(yōu)生優(yōu)育類(TOX,CMV,HSVI,HSVII,RUB)4、甲狀腺功能(T3,T4,FT3,FT4,TSH,TM,TG,TP0)9、其他類（ALB,一些藥物測試等）5、糖尿病系列（C肽，INS,INS-AB,GAD,PINS,ICA）10、不斷發(fā)展中的其他臨床檢測項目?；脽羝?為什么要開展乙肝兩對半”定量檢測乙型病毒性肝炎是世界性的傳染病，嚴重地威脅著人類的健康。我國是乙型病毒性肝炎高發(fā)病國家。據(jù)統(tǒng)

6、計全世界無癥狀攜帶者（HBsAg攜帶者）超過2.8億，我國占1億以上,且多數(shù)無癥狀。所以乙肝的早期診斷對控制傳染源、降低發(fā)病率及疾病的治療均具有很重要的意義。酶標（ELISA）檢測始于20世紀80年代中期，它對乙肝“兩對半”定性測定在疾病的診斷，病情監(jiān)測，療效觀察起到了一定的作用，但酶標檢測HbsAg靈敏度較低，不能真正意義上定量測定血清中HbsAg含量。隨著臨床醫(yī)學的發(fā)展，定性檢測已經遠遠不能滿足臨床及患者的要求?；瘜W發(fā)光免疫分析定量測定乙肝“兩對半”大大彌補了酶標定性測定及靈敏度低的不足。幻燈片10一、化學發(fā)光極大地提高了檢測靈敏度HBsAg是HBV感染的特異標志，HBsAg的出現(xiàn)就可作為

7、乙肝的早期診斷，絕大多數(shù)HBV感染者外周血可出現(xiàn)HBsAg。化學發(fā)光免疫分析檢測HBsAg靈敏度可達0.2ng/ml,而酶標（EIASA）檢測的靈敏度為2ng/ml,放射免疫（RIA）靈敏度為lng/ml,化學發(fā)光免疫分析極大地提高檢測的靈敏度。因此，在急性乙肝早期化學發(fā)光免疫分析檢測能及早檢出HBsAg，縮短窗口期的時間，而酶標檢測在乙肝早期往往HBsAg呈陰性；其次，可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者；在部分慢性乙肝患者中，由于機體缺乏對HBV包膜蛋白的免疫應答，HBsAg表達較低，酶標檢測可出現(xiàn)HBsAg和表面抗體（HBsAb）均陰性的情況，化學發(fā)光免疫分析檢測的高靈敏度則可避免這些情況的發(fā)生

8、，為正確判斷病情提供依據(jù)。并且目前病毒性肝炎和其他病因所致的肝病甚多，而且臨床癥狀、體征及肝功能無特殊改變差異，故只有依靠高靈敏度的病原學鑒別診斷?；脽羝?11.縮短急性乙肝HBsAg測定“窗口期”2.如病毒發(fā)生變異后，表達量較低，常規(guī)ELISA測不出抗原，而化學發(fā)光免疫分析定量具有極高的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)并極有可能同時測定出HBsAg和HBsAbo3.可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者。特別是一些群體如醫(yī)護工作者、病人家屬等，由于長期密切接觸，但又非直接經血傳播感染成急性乙肝，而是長期少量感染，并刺激機體產生一定的免疫力，可能呈低濃度感染，特別應當引起人們的足夠重視，密切關注并采取措施防止發(fā)展成乙肝或

9、慢性攜帶者?；脽羝?2二、兩對半定量可動態(tài)觀察療效和病情監(jiān)測疾病的發(fā)生、發(fā)展、療效、預后是一個動態(tài)的變化過程，化學發(fā)光免疫分析定量檢測乙肝“兩對半”各項標志物的濃度變化可對乙肝的病程、治療、預后起動態(tài)監(jiān)測的作用，能夠讓醫(yī)生對病情療效作出合理的解釋提供依據(jù)，指導治療。1、定量檢測HBsAg,對肝炎病人動態(tài)療效觀察很有價值。HBsAg和HBsAb濃度的變化,可以預見急性乙肝是否處于恢復期。如HBsAg濃度降低，HBsAb的濃度逐漸升高，可說明病情正往恢復期發(fā)展。反之，HBsAg濃度處于較高水平或上升趨勢，而HBsAb一直處于較底水平，則容易發(fā)展為慢性乙肝或攜帶者。2、定量測定HBeAg和HBeAb

10、濃度的變化，可以反映病情變化和治療效果。明確測定HbeAg向抗-Hbe轉換的時期，即表現(xiàn)為HbeAg濃度下降和抗-Hbe濃度升高的過程。高濃度的HbeAg還可間接提示病毒處于高復制狀態(tài)，具有較高的傳染性。高濃度的抗-Hbe方面提示病情的好轉，而在某些時候（如肝功能指標很差）可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關。3、HBcAb濃度的高低可以反映病毒感染的狀態(tài)，高濃度的HBcAb提示乙肝急性感染；低濃度一般為恢復期或既往感染。有利于對慢性肝炎活動性和非活動性的判斷。慢性乙肝呈抗-Hbe持續(xù)高濃度，故可以用于慢性乙肝的分類。4.有利于對慢性肝炎活動性和非活動性的判斷。非活動性慢性乙肝各項指標相對穩(wěn)定，活動

11、性往往呈進行性變化。幻燈片13三、HBsAb的定量測定能夠對抗體是否真正具有中和”HBV的免疫力作出正確評價,對乙肝的預防起到監(jiān)督作用。HBsAb的含量在10mIU/mI以上病人在用ELISA測定就可呈HBsAb“陽性”結果，但并不提示機體都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10100mIU/mI之間的樣本，定性雖為“陽性”，但此時機體對HBV的免疫力較弱，甚至不能預防HBV感染，仍有感染HBV的危險。只有HBsAb的含量達到100mIU/mI以上時才可確定具有抵抗HBV入侵的作用。HBsAb的含量越高，機體抵抗HBV入侵的能力越強，持續(xù)保護時間越長。作定量測定，根據(jù)HBsAb的含量可判斷機

12、體對HBV的免疫狀態(tài)及乙肝疫苗的免疫效果,HBsAb的含量較低，應該加強注射一針乙肝疫苗，使HBsAb的濃度提高起到保護作用。同時，乙肝疫苗接種后機體產生免疫力因個體差異而不同，有的可產生高濃度的抗體并持續(xù)數(shù)十年。而有的人產生的抗體濃度不是很高，且持續(xù)時間也不長，數(shù)年后就逐漸消失，這部分人應及時關注HBsAb濃度變化，必要時也應加強注射一針乙肝疫苗（但也有人認為機體在受到病毒感染時，會產生記憶反應，迅速提高免疫力）。因此定量測定對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預防乙肝方面。幻燈片14四、降低科室成本大家都知道進口試劑因試劑價格昂貴,并且標準品等要單買，從而

13、使乙肝“兩對半”定量難以普及。乙肝“兩對半”進口化學發(fā)光試劑價格較高，國產化學發(fā)光試劑價格比進口試劑的低的多。國家已實行了同一種方法學統(tǒng)一收費標準，不分國產或進口試劑，上海、浙江等城市已執(zhí)行國產、進口化學發(fā)光試劑檢測項目同一個收費標準。用質量、性能與進口乙肝“兩對半”試劑相當?shù)膰a試劑，可以降低科室成本?；脽羝?5化學發(fā)光與常用免疫分析方法對比方法優(yōu)點缺點化學發(fā)光操作簡單，成本較低，靈敏度較咼，試劑較穩(wěn)定進口試劑成本較高，國產試劑合理放射免疫試劑成本低，靈敏度較咼操作復雜，放射性污染，有效期短酶聯(lián)免疫試劑成本低，操作簡單靈敏度低，適用于定性和半定量時間分辨靈敏度較咼，試劑較穩(wěn)定操作復雜，反應時

14、間長，試劑成本較咼電化學發(fā)光靈敏度較咼，試劑較穩(wěn)定試劑成本高，儀器維護費用較高，有本底干擾幻燈片16化學發(fā)光免疫分析法作為非放射性的免疫分析法，具有靈敏度高、所需時間短、無污染、檢測范圍寬等特點，隨著各種自動發(fā)光分析儀器面市，以及不同類型的化學發(fā)光免疫分析試劑盒的不斷推出，使得檢測項目更多，檢測速度提高，這些勢必推動化學發(fā)光免疫分析的迅速發(fā)展，成為時間分辨、放射免疫和酶聯(lián)免疫分析的取代者，已成為檢驗的主流，使實驗室更好、更快地為臨床服務?；脽羝?7顯著的經濟效益對醫(yī)院：增加了設備、患者多了一種選擇，增加了盈利的渠道對科室：改進了方法，科室收益上升，科室地位得到提高對醫(yī)生：擺脫了患者投訴的煩惱，

15、增加了臨床病情的判斷能力?；脽羝?8化學發(fā)光和酶法對比項目名稱收費標準（元）每月標本量每年毛收入（萬元）每年成本（萬元）年凈收入/萬元（保守估計）乙肝兩對半18015*22天71.282376每人份60元47.52化學發(fā)光免疫僅乙肝五項年凈收入總計47.52萬兀乙肝兩對半2515*22天9.90119每人份3元8.71酶法試劑乙肝五項年凈收入總計8.71萬兀其余化學發(fā)光項目：腫瘤5項，激素8項，糖尿病5項，肝纖維化5項等，都可以創(chuàng)造較大的效益。幻燈片19目前化學發(fā)光檢測產品介紹分類兩大類一、原裝進口主要以貝克曼、羅氏、雅培、日本東曹等等為主特點：1、儀器試劑為全部封閉配套試劑，自動化程度較高2

16、、檢測成本較高3、對每天的標本量有一定要求，主要面向中大型醫(yī)院二、國產產品主要以北京泰格科信、北京科美、廈門波生、鄭州安圖等為主特點：1、儀器試劑一般為配套，但是在廠家授權下半開放2、檢測成本較低3、面向中小型醫(yī)院4、缺點為自動化程度不高?；脽羝?0北京泰格科信化學發(fā)光介紹1、化學發(fā)光檢測儀一厶2、全自動洗板機一套3、電腦打印機一套幻燈片21北京泰格科信化學發(fā)光特點綜述方法學化學發(fā)光免疫測定是目前世界公認先進的標記免疫測定技術，半自動化學發(fā)光原理是采用辣根過氧化物酶（hrp）標記（抗原或抗體）化學發(fā)光底物是魯米諾，辣根過氧化物酶作用于底物發(fā)光，通過化學發(fā)光儀測定各孔的發(fā)光強度，發(fā)光強度與樣本濃度存在線性關系?；瘜W發(fā)光受自然光干擾遠小于熒光，因而在方法學上化學發(fā)光要好于熒光。檢測項目肝炎類、性激素類、甲狀腺功能類、肝纖維化類、腎功能類、腫瘤標志物類、糖尿病類、優(yōu)生優(yōu)育類、不孕不育類。操作步驟（以乙肝為例）1.試劑盒平衡至室溫。2.工作洗滌液:將10ml濃縮洗滌液和240ml蒸餾水或去離子水在干凈的瓶中混合均勻備用。3.按順序加入：加樣量（“1）孔別校準品孔待測樣本孔S1S550-待測樣本-50酶結合物505