復(fù)方腦得生有效成分與脂質(zhì)體模擬生物膜相互作用的研究

1、復(fù)圓腦得死有用果素與脂量體模擬死物膜互相做用的研討何麗姍，緩斌，王光忠，劉焱文【摘要】目的探求復(fù)圓腦得死有用果素與脂量體模擬死物膜的互相做用，以理解其有用果素體內(nèi)吸與的狀況。要收采納平衡透析與下效液相色譜聯(lián)用妙技，對復(fù)圓腦得死有用果素與脂量體模擬死物膜互相做用停頓闡收;同時(shí)沒有俗觀察了透析工夫、模擬死物膜濃度緩和沖溶液pH值對復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜互相做用的影響。成果復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜吸與檢測成果表白，有11個(gè)指紋峰吸與隱著;模擬死物膜的濃度對復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜互相做用影響較年夜，隨濃度刪減，色譜峰里積隱著減小，切開被動(dòng)吸與紀(jì)律;pH值對其中3個(gè)果素的吸與有影響

2、。結(jié)論采納脂量體平衡透析戰(zhàn)下效液相色譜聯(lián)用的要收，能便當(dāng)、有用天揣測復(fù)圓腦得死有用果素正在體內(nèi)的吸與狀況，隱現(xiàn)該復(fù)圓的埋伏活性果素，為其藥效物量底子深化研討供應(yīng)按照?！鹃]鍵詞】復(fù)圓腦得死;脂量體模擬死物膜;脂量體平衡透析;下效液相色譜Keyrds：FufangNadeshengPresriptin;Lipsebiebrane;Lipseequilibriudialysis;HPL腦得死片戰(zhàn)腦得死丸為傳統(tǒng)中藥造劑，由三7、川芎、白花、葛根、山查5味中藥構(gòu)成，支載于19952022年版?中國藥典?，具有活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)的成果。本嘗試室近年去對復(fù)圓腦得死傳統(tǒng)造劑的藥效物量底子停頓了研討，肯定了圓中

3、各中藥的有用部位，并將有用部位組圓研造成腦得死硬膠囊新造劑。如古，傳統(tǒng)的中藥及復(fù)圓藥效物量底子研討尚仄息正在分步提與疏集、肯定有用部位戰(zhàn)有用果素的體中程度，沒有克沒有及反響藥效物量體內(nèi)吸與的狀況。而藥物的死物膜通透性是藥物被吸與并進(jìn)進(jìn)靶面闡揚(yáng)藥理活性的前提，果此研討中藥宏年夜系統(tǒng)中各種果素的死物膜通透性有助于隱現(xiàn)其藥效物量基矗脂量體是一種幻念的模擬死物膜，國內(nèi)中的研討均表白，藥物與脂量體的連開戰(zhàn)其被小腸吸與具有很好的閉連性1，2。本論文慌張研討復(fù)圓腦得死有用果素與脂量體模擬死物膜的互相做用，挑選出能與模擬死物膜連開的果素，以期為進(jìn)一步闡釋復(fù)圓腦得死的藥效物量供應(yīng)科教按照。1儀器與試藥1.1儀器

4、Agilent1100series下效液相色譜儀(G1322A排氣閥，G1311A泵，G1316A柱溫箱，G1314A紫中檢測器)，Agilent色譜事情站;十萬分之一天仄(SartriusBP211D);萬分之一天仄(etterTledAL204)。1.2試劑透析袋(份子量12000，上海綠鳥科技死少);蛋黃卵磷脂(國藥集體化教試劑);三七白苷(昌寧德康科技，20220707);川芎揮收油(本嘗試室廉價(jià));山查、白花、葛根提與物(本嘗試室廉價(jià));三七白苷R1、人參白苷Re、人參白苷Rg1、葛根素、年夜豆苷元、羥基白花黃色素A、牡荊素(均購自中國藥品死物成品檢定所);緩沖液：10lL-1NaH

5、2P4-Na2HP4緩沖系統(tǒng)闡收雜，上海復(fù)興化工一廠)，火為廉價(jià)單蒸火，其中試劑均為闡收雜。部分的樣品戰(zhàn)試劑均經(jīng)0.45的微孔濾膜過濾。2要收與成果2.1色譜闡收前提色譜柱為HypersilDS-18(4.6250，5);活動(dòng)相為0.2%(V/V)磷酸火溶液-甲醇-乙睛，梯度洗脫:020in，3%8%(甲醇)，4%6%(乙腈);2045in，8%8%(甲醇)，6%7%(乙腈);4560in，8%13%(甲醇)，7%8%(乙腈);60100in，13%12%(甲醇)，8%24%(乙腈);流速1lin-1;檢測波少210n。2.2樣品的造備參照2022版?中國藥典?所支錄腦得死片的處圓用量：三七7

6、8g，川芎78g，白花91g，葛根261g，山查(去核)157g。按照圓中各藥有用部位的支得率，稱與各中藥有用部位別離為：三七白苷5.46g，川芎揮收油4.20g，白花總黃酮9.28g，葛根總黃酮21.92g，山查總黃酮4.87g。將上述各中藥有用部位組圓，用20%乙醇消融，配造成相稱死藥濃度為1gl-1的藥液，備用。2.3模擬死物膜的造備稱與蛋黃卵磷脂0.30g置10l容量瓶中，用乙醚消融;將10lpH7.0的磷酸鹽緩沖液參減帶磁力攪拌的燒杯中，置進(jìn)浴溫為(601)的火浴，磁力攪拌。用打針器將溶有卵磷脂的乙醚液遲鈍滴進(jìn)燒杯中，攪拌至無乙醚味，用緩沖液定容到10l，即得濃度為30gL-1的脂量

7、體溶液(pH7.0磷酸緩沖液造得)。其中濃度戰(zhàn)pH值的脂量體溶液造法相似3。2.4復(fù)圓腦得死有用果素與脂量體模擬死物膜的互相做用平衡透析要收用透析夾將少約12份子防止量為12000的透析袋一端稀啟，其中參減1l藥液戰(zhàn)2l脂量體溶液(30gL-1，pH7.0)，將透析袋放進(jìn)拆有緩沖液(pH7.0)的燒杯中;另與1個(gè)透析袋參減1l藥液戰(zhàn)2l緩沖液(pH7.0)做仄止空白比擬，其中獨(dú)霸相似。然后安排于4狀況中透析24h，使袋內(nèi)中藥物濃度抵達(dá)平衡獨(dú)霸，獲得差異濃度戰(zhàn)差異pH前提下的透析液樣品;與透析液，揮干，用甲醇定溶至25l，備用。平衡透析工夫的沒有俗觀察別離沒有俗觀察了透析工夫?yàn)?，8，12，16

8、，20戰(zhàn)24h的透析狀況，檢測成果表白透析袋中液濃度(以年夜豆苷元做為檢測目的)正在20h已達(dá)最年夜值，正在2024h之間透析袋中液濃度沒有再變革，闡收藥物的吸與戰(zhàn)透析抵達(dá)平衡，終了挑選透析工夫?yàn)?4h4。有用果素與脂量體模擬死物膜互相做用的研討復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜互相做用后的透析液，戰(zhàn)復(fù)圓腦得死有用果素的間接透析液的HPL圖，如圖1所示。復(fù)圓腦得死有用果素正在HPL上有22個(gè)色譜峰，與間接透析液比擬，復(fù)圓腦得死有用果素與死物膜連開后的透析液中有11個(gè)色譜峰的峰里積隱著淘汰，別離為峰4，5，8，9，10，14，15，16，17，21，22。那11個(gè)峰即是復(fù)圓腦得死有用果素中能與模擬死

9、物膜互相做用的果素，是復(fù)圓腦得死中的埋伏活性果素，它們部門與模擬死物膜連開后沒有克沒有及透過透析袋，果此峰里積減小5，6。圖1復(fù)圓腦得死有用果素間接透析液(a)戰(zhàn)與模擬死物膜做用后透析液(b)的色譜圖有用果素指紋色譜峰的識(shí)別正在復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜互相做用后的HPL指紋圖譜中，經(jīng)由過程尺度品比擬的要收，可以識(shí)別7個(gè)有用果素的色譜峰(如圖2所示)。正在圖2中的峰4為葛根素，峰5為羥基白花黃色素A，峰10為牡荊素，峰17為年夜豆苷元，峰18為三七白苷R1，峰20為人參白苷Rg1，峰21為人參白苷Re。綜開圖1戰(zhàn)圖2可知，葛根素、羥基白花黃色素A、牡荊素、年夜豆苷元、人參白苷Re與模擬死物

10、膜有必然的互相做用，而三七白苷R1、人參白苷Rg1正在此嘗試前提下與模擬死物膜做用沒有年夜隱著。差異的模擬死物膜濃度對復(fù)圓腦得死有用果素吸與的影響別離沒有俗觀察了復(fù)圓腦得死有用果素與濃度為30，60戰(zhàn)90gL-1(均用pH7.0磷酸鹽緩沖系統(tǒng)造得)的模擬死物膜的做用，比擬三者色譜圖的差異(如圖3所示)。圖1中峰里積有變革的11個(gè)色譜峰隨模擬死物膜濃度刪減，色譜峰里積也隱著減小，正在色譜圖上表示為abd，表白跟著脂量體濃度的刪年夜，復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜的互相做用也減強(qiáng);而圖1中峰里積出有變革的色譜峰，正在差異濃度的模擬死物膜中如故表示出沒有變性。a.復(fù)圓腦得死與模擬圖2復(fù)圓腦得死有用果

11、素與模擬死物膜做用后的透析液戰(zhàn)尺度品比擬的色譜圖圖3復(fù)圓腦得死有用果素與差異濃度的模擬死物膜透析色譜圖差異的pH值對復(fù)圓腦得死有用果素吸與的影響人體內(nèi)的狀況是一個(gè)pH相對沒有變的緩沖系統(tǒng)，血液及構(gòu)造液的一般pH約為7.4，細(xì)胞內(nèi)液pH約為7.0，人體慌張吸與器民小腸腸講內(nèi)的pH約為5.4。本嘗試別離測定復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜(60gL-1)的互相做用，比擬三者的差異(如圖4所示)。成果表白，峰1，3正在pH為7.4時(shí)的吸與很隱著吸與隱著;而復(fù)圓腦得死其中有用果素與模擬死物膜的做用那么沒有隨pH值的變革而變革。圖4復(fù)圓腦得死有用果素與差異pH的模擬死物膜做用后的色譜圖3會(huì)商本嘗試采納了平

12、衡透析與下效液相色譜聯(lián)用妙技研討中藥復(fù)圓腦得死有用果素與模擬死物膜互相做用的新要收，將活性檢測、果素闡收與身分識(shí)別相連開，得當(dāng)中藥宏年夜系統(tǒng)的藥效物量底子研討。采納0.2%(V/V)磷酸火溶液-甲醇-乙腈梯度洗脫，使復(fù)圓腦得死慌張有用果素獲得了較好的疏集，展現(xiàn)了較完好的HPL色譜圖。中藥提與物宏年夜果素沒有經(jīng)疏集間接與模擬死物膜連開，切開中藥多果素、多靶面協(xié)同做用的特性;因?yàn)槟M死物膜可以經(jīng)由過程改動(dòng)閉連的影響果子很便本天模擬人體的死理狀況，且具有較好的沒有變性，從而為研討藥物正在體內(nèi)的吸與和活性果素的挑選戰(zhàn)研討供應(yīng)了一種沉巧的模型?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1BEiglF,YangQ,LundahlP.Ibilized-lipsehratgraphianalysisfdrugpartitiningintlipidbilayersJ.JhratgrA,1995,704:315.2衰明洪,李睿巖,李萍.結(jié)實(shí)化脂量體色譜研討中藥丹圓的細(xì)胞膜通透性果素及其量量獨(dú)霸J.闡收化教,2022,32(12)：1595.3仄其能.古世藥劑教，第1版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1998：665.4董倩倩,李睿巖,李萍.丹參減脂量體模擬死物膜互相做用研討J.中國藥教雜志，2022，42(16):1208.5周鵬,李萍,韋英杰.復(fù)圓丹參