歷年開題報(bào)告

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞保護(hù)小鼠視神經(jīng)鉗夾損傷的機(jī)制研究報(bào)告人：胡宗莉?qū)煟宏悤悦鹘淌谀昙?jí)專業(yè)：2007級(jí) 臨床八年制開題報(bào)告2014年8月Contents國內(nèi)外相關(guān)研究現(xiàn)狀2 3 研究方案及主要內(nèi)容4 課題工作計(jì)劃6 可行性分析5 預(yù)期結(jié)果7 研究背景1研究目的研究背景青光眼作為全世界第二大致盲因素，RGC凋亡為其重要致盲因素，而凋亡機(jī)制中，神經(jīng)營養(yǎng)因子傳遞阻斷為重要機(jī)制。包括腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、神經(jīng)營養(yǎng)因子-3 （NT-3）、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）等。國內(nèi)外相關(guān)研究現(xiàn)狀國外近年研究：BMSC玻璃體腔內(nèi)移植，可分泌一定量的神經(jīng)保護(hù)蛋白，從而減少RGC凋亡。在體外培養(yǎng)腦細(xì)胞時(shí)

2、，GDNF可而上調(diào)腦細(xì)胞BDNF表達(dá)，從而對(duì)腦細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用，且GDNF直接作用于神經(jīng)元?jiǎng)t無此保護(hù)作用。國內(nèi)近年研究：視神經(jīng)損傷或青光眼模型中，玻璃體腔內(nèi)注入BDNF或植入BDNF基因修飾的細(xì)胞，均可顯著減少RGC凋亡。腦出血模型中腦內(nèi)移植GDNF基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC），可增加宿主BDNF及其受體表達(dá)，具有腦細(xì)胞保護(hù)作用。提出假設(shè)：視神經(jīng)鉗夾損傷 RGC凋亡 玻璃體腔 內(nèi)注射BMSC GDNF RGC BDNF RGC凋亡 研究目的BMSC玻璃體腔內(nèi)注射對(duì)RGC的保護(hù)及其機(jī)制：1、確定BMSC是否具有RGC保護(hù)作用。2、確定GDNF是否為BMSC保護(hù)作用的關(guān)鍵分子。3、確定G

3、DNF通過增加宿主BDNF表達(dá)發(fā)揮保護(hù)作用。前期研究資料在下列各種組織的基因芯片中，BMSC分泌GDNF相對(duì)最高視神經(jīng)損傷后，玻璃體腔內(nèi)注入BMSC可較穩(wěn)定上調(diào)RGC中BDNF基因表達(dá) 研究方案及主要內(nèi)容一、確定BMSC表達(dá)并分泌GDNF、BDNF 研究方案及主要內(nèi)容二、體外確定GDNF可刺激神經(jīng)元分泌BDNF，并具有保護(hù)作用研究方案及主要內(nèi)容三、確定終點(diǎn)指標(biāo)的基線水平，作為空白對(duì)照研究方案及主要內(nèi)容四、確定玻璃體腔內(nèi)注射BMSC可以通過分泌GDNF，刺激宿主RGC表達(dá)BDNF，以達(dá)到RGC保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)所涉及技術(shù)BMSC細(xì)胞分離純化及培養(yǎng)細(xì)胞RNA干擾技術(shù)小鼠視神經(jīng)鉗夾模型建立玻璃體腔內(nèi)微量注

4、射視網(wǎng)膜分離與提取，視網(wǎng)膜平鋪片，眼球冰凍切片免疫組化ELISA 視神經(jīng)鉗夾模型暴露外眥部分離并鉗夾視神經(jīng)15s立即注射各組實(shí)驗(yàn)液可行性分析1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基于可靠的理論2 相對(duì)成熟的技術(shù)手段視神經(jīng)鉗夾模型基因轉(zhuǎn)染BMSC分離純化及培養(yǎng)玻璃體腔內(nèi)微量注射、視網(wǎng)膜平鋪片、視網(wǎng)膜切片、ELISA、免疫組化染色細(xì)胞計(jì)數(shù)3 擁有完善的實(shí)驗(yàn)條件本課題組所在四川大學(xué)華西醫(yī)院神經(jīng)疾病研究室，在硬件設(shè)施上是可行的。課題工作計(jì)劃2014年10-12月2014年8-9月2014年7月數(shù)據(jù)整理及文章撰寫動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段細(xì)胞及動(dòng)物準(zhǔn)備階段實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2015年1-2月1.BMSC可表達(dá)并分泌GDNF、BDNF2.GDNF可促進(jìn)神

5、經(jīng)元表達(dá)BDNF保護(hù)其缺氧損傷3. BMSC可保護(hù)RGC，且主要通過分泌GDNF因子，而刺激RGC表達(dá)BDNF增加 預(yù)期結(jié)果參考文獻(xiàn)1Stone EM, Fingert JH, Alward WLM, et al. Identification of a gene that causes primary open angle a.Science. 1997;275:668670.2Iwabe S, Moreno-Mendoza NA, Trigo-Tavera F, et al. Retrograde axonal transport obstruction of brain-derived

6、neurotrophic factor (BDNF) and its TrkB receptor in the retina and optic nerve of American Cocker Spaniel dogs with spontaneous a.Vet Ophthalmol.2007;10:1219.3Johnson TV, Martin KR. Cell transplantation approaches to retinal ganglion cell neuroprotection in a. Curr Opin Pharmacol. 2013;13(1):78-82.4

7、Bull ND, Irvine KA, Franklin R, Martin K. Transplanted oligoden-drocyte precursor cells reduce neurodegeneration in a model of a. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2009;50:4244 4253.5Johnson TV1, Bull ND, Hunt DP, et al. Neuroprotective effects of intravitreal mesenchymal stem cell transplantation in exper

8、imental a. Invest Ophthalmol Vis Sci 51(4): 2051-2059.6Wang S, Lu B, Tian C, Girman S, et al. Syngeneic mesenchymal stem cells rescue vision and vascular pathology in a rodent model of retinal degenerationJ. Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 2009. 50.7Bull ND, Johnson TV, Martin KR, et al . Stem cells fo

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