醫(yī)學微生物學：結(jié)核分枝桿菌

1、分枝桿菌屬2022/9/2結(jié)核分枝桿菌1分枝桿菌(Mycobacterium) 一般特性 一類直或微彎曲的桿菌，有分枝生長趨勢， 可呈絲狀或菌絲樣生長。 細胞壁含大量脂質(zhì)（分枝菌酸）。 耐酸，抗酸染色陽性。 無鞭毛、無芽胞，不產(chǎn)生毒素和侵襲酶類， 引起疾病呈慢性并伴有肉芽腫。 自然界分布廣且多為致病菌。 對氧和營養(yǎng)要求高，生長慢。2022/9/22結(jié)核分枝桿菌分枝桿菌(MYCOBACTERIUM) 放線菌目，分枝桿菌科，分枝桿菌屬有150多種，包括寄生菌、腐生菌、中間型。 國際分枝桿菌分類研究組（IWGMT)分三類： 緩慢生長菌、快速生長、不生長 Runyon按細菌產(chǎn)色素和生長速度： 、 、

2、群 2022/9/23結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌 一、分類 結(jié)核分枝桿菌，簡稱結(jié)核桿菌（TB，tubercle bacilli ）包括 人結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis） 牛分枝桿(M.bovis) 非洲分枝桿菌(M.africanum) 坎納分枝桿菌(M.canettii) 田鼠分枝桿菌(M.microti)2022/9/24結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌二、生物學特性 1、形態(tài)及染色: TB菌細長略彎曲，有時可見分枝，呈單、成堆或成束排列，無鞭毛、無芽胞，有莢膜。 可出現(xiàn)多性，在陳舊的病灶和培養(yǎng)物中，形態(tài)常不典型，可呈顆粒狀，串球狀，短棒狀，長絲形等。 TB菌革蘭染色陽性 萋尼氏抗酸性

3、染色法染色，菌體染成紅色 熒光染料金胺O染色，在熒光下菌體呈橘黃色。2022/9/2結(jié)核分枝桿菌52022/9/2結(jié)核分枝桿菌6抗酸性染色2022/9/27結(jié)核分枝桿菌熒光染料金胺O染色結(jié)核分枝桿菌二、生物學特性 2、培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求高，生長緩慢，酸性環(huán)境初次培養(yǎng)常用羅氏（Lowenstein-Jensen）培養(yǎng)基， 1030天可見菌落生長菌落呈顆粒、結(jié)節(jié)或菜花狀， 乳白色或米黃色，不透明液體培養(yǎng)基中細菌浮于液面 有毒株可呈索狀生長（吐溫干擾）2022/9/2結(jié)核分枝桿菌83、生化反應 ：本菌生化不活潑 糖類發(fā)酵試驗（） 觸酶試驗（+） 熱觸酶試驗（） 煙酸和硝酸鹽試驗（+） 耐噻吩2羧酸酰肼

4、（牛型則相反） 中性紅試驗（+）：有毒株。2022/9/29結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌與非結(jié)核分枝桿菌鑒別試驗結(jié)核分枝桿菌變異性 TB菌易發(fā)生形態(tài)、菌落、最適生長溫度、毒力和耐藥性的變異。毒力變異： 牛型結(jié)核桿菌經(jīng)13年230代培養(yǎng)，制成卡介苗（減毒活菌苗），廣泛用于預防接種。L型變異： 結(jié)核桿菌經(jīng)青霉素、環(huán)絲氨酸、溶菌酶、異煙肼作用變成L型結(jié)核菌。耐藥性變異： MDRTB2022/9/210結(jié)核分枝桿菌生物學特性 抵抗力耐干燥：粘附在塵埃上保持傳染性810天， 在干燥的痰液中可存活68個月。耐酸堿：3鹽酸、6硫酸、4氫氧化鈉作 用30分鐘不受影響（酸堿中和處理嚴重污染的標本 材，殺死雜菌和消化

5、粘稠物質(zhì)，提高檢出率）耐一般消毒劑：對1：13000的孔雀綠有抵抗力耐一般的抗菌素：對青霉素等抗菌素耐藥2022/9/211結(jié)核分枝桿菌四耐生物學特性 抵抗力怕濕熱：液體中626315-30分鐘或煮沸 怕紫外線：直接日光照射2-3小時即被殺滅怕酒精、石炭酸、來蘇兒怕抗癆藥2022/9/212結(jié)核分枝桿菌四怕三、臨床意義 TB菌引起結(jié)核病。 對人類致病的有 人型分枝桿菌 牛型結(jié)核桿菌 非洲分枝桿菌 2022/9/213結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌發(fā)病率最高結(jié)核分枝桿菌所致疾病 最常見肺結(jié)核（pulmonary tuberculosis). 通過呼吸道、消化道和破損的皮膚粘膜進入機體，侵犯多種組織器官

6、，引起相應器官?？煞衷l(fā)感染和繼發(fā)感染。2022/9/214結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌免疫性 TB菌的感染率很高，發(fā)病率卻較低，這表明人體感染結(jié)核桿菌可獲得一定的抗結(jié)核免疫力，這種免疫稱為有菌免疫或傳染性免疫。 2022/9/215結(jié)核分枝桿菌原發(fā)性感染： 初次感染在肺內(nèi)形成病灶結(jié)核病的流行情況2022/9/2結(jié)核分枝桿菌16 全球結(jié)核病疫情現(xiàn)狀感染人數(shù)約為20億。發(fā)病890萬例，發(fā)病率為141/10萬，其中390萬為涂陽病人（43%報告到WHO）。結(jié)核病發(fā)病率每年增加1%，估計患病人數(shù)為1550萬例（患病率為246/10萬，）其中包括HIV+TB 38萬例，死于結(jié)核病為180萬例，結(jié)核死亡率為

7、29/10萬，其中包括HIV+TB 27萬例?，F(xiàn) 狀 由于HIV/AIDS流行、人口流動、耐藥結(jié)核菌的增加，結(jié)核菌發(fā)病率開始上升?，F(xiàn)全球有20億結(jié)核菌感染者，每年新增病例850萬，死亡達300人。1993年WHO宣布結(jié)核病緊急狀態(tài)，這在WHO歷史上尚屬首次。 1994年出臺抗結(jié)核耐藥全球計劃（90多個國家）。 我國是結(jié)核病負擔最重的國家之一，僅次于印度，居第二位。5.5億人感染結(jié)核菌，500萬結(jié)核病患者，其中開放性肺結(jié)核病人150萬。結(jié)核病是傳染性疾病中第一號殺手。 2022/9/217結(jié)核分枝桿菌我國結(jié)核病的疫情現(xiàn)狀 我國是結(jié)核病負擔最重的國家之一，僅次于印度，居第二位。5.5億人感染結(jié)核菌

8、，500萬結(jié)核病患者，其中開放性肺結(jié)核病人150萬。結(jié)核病是傳染性疾病中第一號殺手。 2001-2008年 全國共登記活動性肺結(jié)核病人642萬，其中傳染性肺結(jié)核病人330萬 發(fā)病為當選全球第二 全國傳染病發(fā)病和死亡第一 廣州地區(qū)：農(nóng)村地區(qū)疫情明顯高于城鎮(zhèn) 男性患病率197.4/10萬，女性110.3/10萬 性別比1.8：12022/9/218結(jié)核分枝桿菌耐結(jié)核病的流行情況耐多藥結(jié)核(multi-drug resistance,MDR-TB): 結(jié)核分枝菌至少對異煙肼，利福平同時耐藥嚴重耐多藥結(jié)核(Extensively drug- resistance,XDR-TB): 對異煙肼，利福平耐藥

9、， 同時對任何氟喹諾酮類藥物耐藥，以及至少對1種二線抗結(jié)核注射劑（卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星）耐藥XDR-TB已被認為是對公共衛(wèi)生和結(jié)核病控制的嚴重威脅 2022/9/219結(jié)核分枝桿菌結(jié)核病耐藥情況 WHO/UATLD 中國初治：至少對1種抗活 10.2% 16.0% 結(jié)核藥物耐藥MDR-TB 1.15% 7.6%復治：至少對1種抗 18.4% 30.0% 結(jié)核藥物耐藥 MDR-TB 7.0% 17.1% WHO和美國CDC的一項研究表明: 16個國家2000-2004年間收集的17690例菌株中， 20%為MDR-TB。 2022/9/220結(jié)核分枝桿菌脂質(zhì)：索狀因子 磷脂 蠟質(zhì)D 硫酸

10、腦苷脂蛋白質(zhì)莢 膜（多糖）2022/9/221結(jié)核分枝桿菌致病因素致病因素脂質(zhì) 索狀因子（cord factor） ： 是分枝菌酸與海藻糖結(jié)合的一種糖脂。使結(jié)核分枝桿菌在液體培養(yǎng)基相互粘連平行排列呈索狀，破壞線粒體膜，影響細胞呼吸，抑制白細胞游走和引起慢性肉芽腫。2022/9/222結(jié)核分枝桿菌致病因素 脂 質(zhì)磷脂： 促進單核細胞增生，引起結(jié)核結(jié)節(jié)、 干酪樣壞死蠟質(zhì)D： 是一種肽糖脂與分枝菌酸的復合物， 作為佐劑，激發(fā)機體產(chǎn)生遲發(fā)性 變態(tài)反應硫酸腦苷脂：抑制吞噬細胞中吞噬體與溶酶體 的融合，使結(jié)核桿菌在吞噬細胞 中長期存在2022/9/223結(jié)核分枝桿菌 蛋白質(zhì)結(jié)核菌素：誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體，但無

11、保護作用，與蠟質(zhì)D一 起注入體內(nèi)引起變態(tài)反應。分枝桿菌生長素（mycobic-tin）： 將環(huán)境中的鐵轉(zhuǎn)運到菌體內(nèi)與宿主機體競爭鐵。 莢 膜 主要為多糖（致病作用不清），少量脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。 粘附和入侵 分解物質(zhì)提供營養(yǎng) 防止有害物質(zhì)入侵2022/9/224結(jié)核分枝桿菌四、微生物學檢驗臨床標本涂片檢查分離培養(yǎng)核酸檢測抗體檢測直接涂片集菌涂片處理標本或無污染標本染色液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基動物試驗（羅氏或米氏）抗酸.金胺為O. 37，涂片鏡檢儀器培養(yǎng) 7天生長7天生長快速生長菌慢生長菌菌種鑒定抗酸染色菌落特點鑒定試驗藥敏試驗2022/9/225結(jié)核分枝桿菌微生物學檢查是結(jié)核的確診試驗。生化反應不發(fā)酵糖

12、類，產(chǎn)生觸酶人型結(jié)核分枝桿菌： 合成煙酸 還原硝酸鹽 耐受噻吩-2-羧酸酰肼 中性紅試驗陽性（人、牛型有毒株）2022/9/226結(jié)核分枝桿菌2022/9/227結(jié)核分枝桿菌2022/9/228結(jié)核分枝桿菌羅氏培養(yǎng)基熒光金胺染色抗酸染色2022/9/229結(jié)核分枝桿菌菜花狀菌落形態(tài)2022/9/2結(jié)核分枝桿菌30標本采集感染部位不同，取不同的標本，宜用能抑制污染菌的方法常見標本：痰、尿、胸腹水等檢查方法1.顯微鏡檢查1）直接涂片：用萋尼氏法染色，若鏡檢找到抗酸性桿菌，通常應報告：“查到抗酸性桿菌”，需進一步分離培養(yǎng)鑒定。2）濃縮集菌涂片：如標本中菌量少，雜菌和雜質(zhì)多時，用離心沉淀法將菌濃縮聚集

13、，再取沉淀物涂片作抗酸染色檢查 2022/9/231結(jié)核分枝桿菌分離培養(yǎng)TB菌接種前處理液化和處雜培養(yǎng)基選擇儀器培養(yǎng)鑒定1.染色性2.菌落特征3.生長速度4.色素產(chǎn)生5.生化試驗2022/9/232結(jié)核分枝桿菌免疫學檢測1.結(jié)核菌素試驗：遲發(fā)型超敏反應。2.全血干擾素測定3. 抗原、抗體檢測檢測PPDIgG輔助診斷。目前血清抗阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗體是一種新的較好的診斷結(jié)核病的指標?；顒有越Y(jié)核標志物（ATM）檢測。核酸檢測快速診斷PCR-RFLP、PCR-SSCP、PCR-核酸探針、PCR-核酸測序、多重PCR、雙重復插入序列PCR等。色譜分析技術(shù)測分枝菌酸2022/9/233結(jié)核分枝桿菌非

14、結(jié)核分枝桿菌（150多種）指結(jié)核分枝桿菌復合群和麻風分枝桿菌以外的分枝桿菌，由于在染色反應上具有抗酸性雙稱為非典型分枝桿菌。 1、光產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群） 2、暗產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群） 3、不產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群） 4、迅速生長分枝桿菌（Runyon 群）2022/9/234結(jié)核分枝桿菌選擇性培養(yǎng)基： 含對硝基苯甲酸的PNB培養(yǎng)基 含氯化羥胺HA培養(yǎng)基非結(jié)核分枝桿菌生長麻風分枝桿菌(M.LEPRAE)麻風病的病原體，為抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短、粗，呈束狀或團狀排列。麻風細胞三種病型：瘤型、結(jié)核樣型、界線類綜合征2022/9/236結(jié)核分枝桿菌2022/9/23

15、7結(jié)核分枝桿菌抗酸染色2022/9/238結(jié)核分枝桿菌諾卡菌(NOCARDIA)屬放線菌科共9種: 星形諾卡菌(N.asteroides) 短鏈諾卡菌(N.brevicatena) 鼻疽諾卡菌(N.farcinica) 肉色諾卡菌(N.carnea) 巴西諾卡菌(N.bradiliensis) 越橘諾卡菌(N.vaccinii) 豚鼠耳炎諾卡菌(N.otitidiscaviarun) 南非諾卡菌(N.transvalensis) 苦味諾卡菌(N.amarae)2022/9/239結(jié)核分枝桿菌微生物學特性： 1.革蘭陽性桿菌，著色不均勻, 形態(tài)與放線菌屬相似 2.部分諾卡菌具有弱抗酸性，抗酸染色

16、可陰可陽,用1%鹽酸乙醇延長脫色時間即可變?yōu)榭顾彡幮?，?jù)此可與結(jié)核分枝桿菌相鑒別 3.專性需氧菌 4.營養(yǎng)要求不高，在普通平板上或沙氏培養(yǎng)基上37可緩慢生長,一周左右長出可見菌落，菌落表面有皺折,顆粒狀,產(chǎn)生不同的色素.2022/9/241結(jié)核分枝桿菌2022/9/242結(jié)核分枝桿菌 腐物寄生菌，廣泛存在于土壤中，引起外源性感染 常見的致病性諾卡菌 星形諾卡菌 巴西諾卡菌 星形諾卡菌主要引起免疫力低下者的化膿性感染 1. 肺部感染： 引起肺炎、肺膿腫，慢性者類似肺結(jié)核或肺真菌病 2.中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染： 通過血行播散，引起腦膜炎與腦膿腫 3.皮膚創(chuàng)傷感染： 侵入皮下組織引起慢性化膿性肉芽腫與瘺管

17、形成 4.亦可引起足分枝菌病 巴西諾卡菌 可侵入皮下組織引起慢性化膿性肉芽腫，表現(xiàn)為腫脹、膿腫及多發(fā)性瘺管。感染好發(fā)于腿部和足，稱足分枝菌病 2022/9/246結(jié)核分枝桿菌KOH涂片見邊緣有大量菌絲的顆粒革蘭染色2022/9/247結(jié)核分枝桿菌諾卡菌感染所致的皮膚瘺管微生物學檢查法 1.肉眼觀察：在膿液、痰等標本中黃色或黑色 顆粒狀的諾卡菌菌落 2.顯微鏡檢查：將標本制成涂片或壓片，革蘭 染色，顯微鏡下觀察革蘭陽性分枝菌絲 3.分離培養(yǎng)與鑒定：將標本接種于沙保培養(yǎng)基及血平板上，在 30、37或45條件下分離 培養(yǎng)，可疑菌落作涂片染色鏡檢 預防：諾卡菌的感染無特異性預防方法 治療： 對膿腫和瘺

18、管等手術(shù)清創(chuàng) 使用抗生素或磺胺類藥物治療，一般治療時間不少于6周放線菌(Actinomyces) 原核細胞型微生物 絲狀、呈分支狀生長 廣泛分布于自然界 種類繁多，有53個屬 絕大多數(shù)不致病 是抗生素的主要產(chǎn)生菌 絕大多數(shù)抗生素由放線菌產(chǎn)生用來生產(chǎn)纖維素、酶、維生素具有固氮作用，用于生產(chǎn)生物菌肥少數(shù)寄生型放線菌可引起動植物病害有些放線菌能破壞棉毛織品和紙張 2022/9/252結(jié)核分枝桿菌放線菌(ACTINOMYCES)放線菌是一類主要呈菌絲狀生長和經(jīng)孢子繁殖的陸生性較強的原核微生物，革蘭染色陽性，無動力是介于細菌和真菌之間的單細胞微生物，大部分腐生菌，少數(shù)為寄生菌。其菌落中的菌絲常從一個中心

19、向四周輻射生長并由此得名。2022/9/253結(jié)核分枝桿菌引起人放線菌病的放線菌共5種:衣氏放線菌(A.israelii)內(nèi)氏放線菌(A.naeslundii)粘液放線菌(A.viscous)齲齒放線菌(A.odontolyticus)丙酸蛛網(wǎng)放線菌 (A.rachniapropionica)2022/9/254結(jié)核分枝桿菌 放線菌正常寄居在口腔、上呼吸道、胃腸道和泌尿生殖道等與外界相通的體腔中，為人體的正常菌群。當機體抵抗力下降，口腔衛(wèi)生不良、拔牙或口腔粘膜受損時，可致內(nèi)源性感染，引起放線菌病。 放線菌病的主要特征 放線菌病是一種軟組織的化膿性炎癥 多呈慢性肉芽腫，常伴有多發(fā)性瘺管形 成，膿

20、液中可見特征性的硫磺樣顆粒 可引起不同器官和組織感染臨床類型: 面頸部放線菌?。?大多近期有口腔炎、拔牙史或下頜骨骨折史 臨床表現(xiàn)為后頸面部腫脹，不斷產(chǎn)生新結(jié)節(jié)、多發(fā)性膿腫和瘺管形成 腦膜炎和腦膿腫 肺部感染：癥狀和體征酷似肺結(jié)核 腹部感染： 常能觸及腹部包塊與腹壁粘連，出現(xiàn)便血和排便困難，常疑為結(jié)腸癌 盆腔感染：多繼發(fā)于腹部感染 原發(fā)性皮膚放線菌病： 常由外傷或昆蟲叮咬所致，先出現(xiàn)皮下結(jié)節(jié)，然后結(jié)節(jié)軟化、破潰形成竇道或瘺管 齲齒和牙周炎：與內(nèi)氏和粘液放線菌感染有關(guān) 微生物學特性： 革蘭陽性，絲狀，常形成分枝狀無隔菌絲 無芽胞、無莢膜、無鞭毛 厭氧或微需氧 ，在血平板上呈灰白色或黃色粗糙不均一

21、的菌落.在膿標本中可見硫磺樣顆粒(鏡下菊花狀). 培養(yǎng)較困難，初次分離加 5% CO2可促進其生長 生長緩慢，46天長出灰白色、粗糙的微小菌落( 在形態(tài)上具有分枝桿菌菌絲，菌落形態(tài)與霉菌相似，以孢子進行繁殖） 病灶組織和瘺管的膿汁中，肉眼可見硫磺樣顆粒 硫磺樣顆粒壓片，在鏡下可見放射狀排列的菌絲，形似菊花狀 硫磺樣顆粒的鏡下形態(tài)2022/9/261結(jié)核分枝桿菌2022/9/262結(jié)核分枝桿菌2022/9/263結(jié)核分枝桿菌微生物學檢查法 肉眼觀察： 在膿液、痰液和組織切片中尋找硫磺樣顆粒 顯微鏡檢查： 1.將標本中可疑硫磺樣顆粒制成壓片，革蘭染色， 在顯微鏡下觀察特征性的放射狀排列的菊花狀菌絲 2.取組織切片經(jīng)蘇木精伊紅染色鏡檢 分離培養(yǎng)： 將標本接種于不含抗生素的沙保培養(yǎng)基及血平板上，在37、5% C