生物樣品的常用分析方法課件

1、 體內(nèi)藥分專題之五 生物樣品常見分析方法思考 1.在體內(nèi)藥物分析中所采用的生物 樣品有哪些? 2.最常用的生物樣品是什么?3.藥物分析中常見分析方法包括哪些?哪些適用于體內(nèi)藥物分析? 生物樣品的常用分析方法 體內(nèi)藥物分析是借助于現(xiàn)代化的儀器與技術(shù)來(lái)分析藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，以獲得藥物在體內(nèi)的各種藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)、代謝方式、代謝途徑等信息。目前，用于生物樣品分析的方法有很多，歸納起來(lái)主要有以下幾類： 生物樣品的常用分析方法 1. 色譜分析法 2. 光譜分析法 3. 免疫分析法 4. 微生物分析法 5. 電化學(xué)分

2、析法 com色譜法(chromatography) 色譜法(chromatography) 一種物理或化學(xué)的分離分析方法，其分 離原理主要是利用物質(zhì)在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)，或吸附能力的差異而達(dá)到分離。 包括薄層色譜(TLC)，紙色譜(PC)，凝 膠色譜，氣相色譜(GC)和液相色譜(LC)。 薄層色譜法（thin layer chromatography ） 分離速度快 優(yōu)點(diǎn) 檢出靈敏度高 選擇性好 顯色方便等 缺點(diǎn)：對(duì)生物高分子分離效果不甚理想。 薄層掃描法 (TLCS)系指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄

3、層色譜中有紫外或可見吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢查的方法。與高效液相色譜法相比，具有多通道效應(yīng)，可同時(shí)平行分離分析多個(gè)樣品；流動(dòng)相用量少且選擇范圍寬、更換方便；固定相為一次性使用，對(duì)樣品的預(yù)處理要求不高等優(yōu)點(diǎn)。已成為薄層色譜常用的定量方法，在體內(nèi)藥物分析中廣泛應(yīng)用。 氣相色譜法 (gas chromatography，GC)定義：以氣體為流動(dòng)相的的色譜法稱為氣相 色譜法。分類：按固定相的聚集狀態(tài)：GSC、GLC按分離原理：GSC屬于吸附色譜、GLC 屬于分配色譜按色譜操作形式：填充柱氣相色譜、毛

4、細(xì)管柱氣相色譜。優(yōu)點(diǎn)：1.效能高 neff可達(dá)103-106。2.靈敏度高 檢測(cè)限可達(dá)納克級(jí)或更低。3.選擇性高 固定相對(duì)性質(zhì)極為相似的組分，如烴類異構(gòu)體等有較強(qiáng)的分離能力。4.分析速度快 一般的氣相色譜分析一次僅需幾分鐘。5.應(yīng)用范圍廣 氣相色譜法廣泛應(yīng)用于氣體和易揮發(fā)性物質(zhì)或可轉(zhuǎn)化為易揮發(fā)性物質(zhì)的生物樣品的定性和定量分析。 氣相色譜法 (gas chromatography，GC) 氣相色譜法 (gas chromatography，GC) 缺點(diǎn)：要求被測(cè)藥物及其代謝物必須具有一定的 揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性。解決方法

5、：固定相發(fā)展和衍生化試劑的廣泛使用，使生物樣品不再受限制。氣相色譜法(gas chromatography ，GC)結(jié)論: 該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，檢出限低，適合中毒病人血液中溴氰菊酯含量的測(cè)定。定義 高效液相色譜法優(yōu)點(diǎn) 以經(jīng)典液相色譜為基礎(chǔ)，以微粒型填料作固定相，采用高壓送液泵和各種高靈敏度檢測(cè)器。 分離效能高檢測(cè)靈敏度高分析速度快 選擇性好 適用范圍廣分離方法 高效液相色譜法高效液相色譜法 主要根據(jù)是樣品的相對(duì)分子質(zhì)量的大小，在水中

6、和有機(jī)溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學(xué)結(jié)構(gòu)等物理、化學(xué)性質(zhì)。色譜分離方法的選擇高效液相色譜法一、相對(duì)分子質(zhì)量 對(duì)于相對(duì)分子質(zhì)量較低（一般在200以下），揮發(fā)性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進(jìn)行分析 。 相對(duì)分子質(zhì)量在2002000的化合物，可用液-固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對(duì)分子質(zhì)量高于2000，則可用空間排阻色譜法。高效液相色譜法二、溶解度 水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液-液分配色譜法； 微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法； 油溶性樣品或相對(duì)

7、非極性的混合物，可用液-固色譜法。高效液相色譜法三、化學(xué)結(jié)構(gòu) 若樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（例如配位體及有機(jī)螯合劑），可首先考慮用離子交換色譜，但空間排阻和液-液分配色譜也都能順利地應(yīng)用于化合物；異構(gòu)體的分離可用液-固色譜法；具有不同官能團(tuán)的化合物、同系物可用液-液分配色譜法；對(duì)于高分子聚合物，可用空間排阻色譜法。高效液相色譜法高效液相色譜法串聯(lián)紫外- 熒光檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定人血漿中對(duì)乙酰氨基酚與鹽酸曲馬多的濃度為10.03 ng/ml，線性范圍為10.0340110 ng

8、/mL，日內(nèi)RSD為1.9% 5.9% ，日間RSD為3.4% 7.3%。受試制劑中對(duì)乙酰氨基酚的相對(duì)生物利用度為(96.1 15.0) % ，曲馬多的相對(duì)生物利用度為(93.9 15.3) %。結(jié)論:本方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，可用于臨床血藥濃度測(cè)定。受試制劑與參比制劑生物等效。 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC) 在MECC體系中存在著以膠束形式存在的準(zhǔn)固定相和作為載體的液體流動(dòng)相，膠束帶電荷在電場(chǎng)的作用下產(chǎn)生泳動(dòng)，溶質(zhì)中各組分依據(jù)其在水相和膠束相之間的分配差異及在電泳和電滲流驅(qū)動(dòng)下出現(xiàn)淌度差異而分離。優(yōu)點(diǎn)：手性拆分

9、常用的分離模式之一，只需在背景電解質(zhì)中添加手性選擇劑，構(gòu)建手性環(huán)境，即可進(jìn)行手性拆分，本法適用于拆分人體內(nèi)的氨基酸。渦流色譜技術(shù)(TFC) 渦流色譜技術(shù)是利用大粒徑填料使流動(dòng)相在高流速下產(chǎn)生渦流狀態(tài)，從而對(duì)生物樣品進(jìn)行凈化與富集。優(yōu)點(diǎn): 可以在線處理生物樣品，速度快、選擇性好、靈敏度高，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，近年來(lái)在生物領(lǐng)域尤其是體內(nèi)藥物分析中得到了廣泛的應(yīng)用。參考文獻(xiàn)：渦流色譜技術(shù)在生物樣品分析中的應(yīng)用劉朋，周建良，安婧婧，李萍，Chinese Journal of Chromatography1 光譜法(Spectroscopy) 光譜法是基于檢測(cè)能量（電磁輻射）作用于待測(cè)物質(zhì)后產(chǎn)生的輻射信號(hào)或

10、所引起的變化的分析方法。特點(diǎn)應(yīng)用于體內(nèi)藥物分析的光譜法 比色法（COL） 紫外分光光度法（UV） 熒光分析法（Fluorescence method） 原子吸收分光光度法（AAS）一.比色法（COL）屬于吸收光度法 定量依據(jù)-Lambert-Beer定律 A=ECL 物質(zhì)在一定波長(zhǎng)處的吸收度與其濃度成正比。比色法僅用于少數(shù)藥物濃度高，干擾成分少的生物樣品的測(cè)定。主要用于藥物監(jiān)測(cè)和人群代謝分型的測(cè)定，逐漸被現(xiàn)代色譜分析方法所取代。紫外分光

11、光度法（UV） 原理同比色法。適用于測(cè)定具有紫外吸收的藥物。 體內(nèi)藥分中母體藥物與代謝物的紫外吸收光譜非常相似，易產(chǎn)生干擾。受靈敏度和選擇性的限制，其在體內(nèi)藥分中的應(yīng)用也呈下降趨勢(shì)。 熒光分析法（Fluorescence method） 利用物質(zhì)經(jīng)光照射后能發(fā)射熒光的特性進(jìn)行分析的光學(xué)分析法。 優(yōu)點(diǎn)： 1.靈敏度高。檢出限可達(dá)10-10 g/ml10-12g/ml。 2.選擇性好。熒光分析法（Fluorescence method）1.直接測(cè)定法 適于自身能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，因熒光性質(zhì)與溶液的pH有關(guān)，故熒光強(qiáng)度的測(cè)

12、定須在適宜的pH介質(zhì)中進(jìn)行。(一)常規(guī)熒光分析法2.間接測(cè)定法 將無(wú)熒光或弱熒光物質(zhì)衍生化，測(cè)定衍生物熒光強(qiáng)度的方法。熒光分析法（Fluorescence method）利用膠束溶液對(duì)熒光物質(zhì)的增溶、增敏和增穩(wěn)作用，大大提高熒光分析法的靈敏度和穩(wěn)定性。（二）膠束增溶增敏熒光分析法用-CD單分子膠束熒光技術(shù)檢測(cè)秦艽中龍膽苦苷血藥濃度。 龍膽苦苷嵌入-CD的疏水空洞中，使其在膠束中溶解度增加和相互碰撞幾率減少，熒光量子效率提高，從而提高檢測(cè)靈敏度。熒光分析法（Fluorescence method）（三）熒光探針分析法

13、 使用熒光探針從無(wú)熒光的藥物制備有熒光的衍生物。優(yōu)點(diǎn)1增強(qiáng)待分析物質(zhì)的熒光響應(yīng)，提高檢測(cè)靈敏度和選擇性。2穩(wěn)定分析物，尤其針對(duì)活潑的和有揮發(fā)性的化合物。3有助于化合物基團(tuán)的確證。局限 衍生化增加分析步驟，易引入分析誤差。熒光分析法（Fluorescence method）示例 Tb-吡哌酸的熒光體系及尿和血清中吡哌酸含量的測(cè)定 應(yīng)用鑭系離子發(fā)光探針生成Tb-吡哌酸配合物，在紫外光照射下發(fā)生分子內(nèi)能量傳遞使Tb產(chǎn)生特征熒光，其熒光強(qiáng)度與吡哌酸濃度呈線性關(guān)系，從而建立一種靈敏、快速的分析吡哌酸的方法。4熒光分析法（Fluorescence method）（四

14、）熒光淬滅分析法 待分析的物質(zhì)能使某種熒光化合物的熒光淬滅，通過(guò)測(cè)量熒光化合物熒光的下降，間接測(cè)量該分析物質(zhì)。原子吸收分光光度法（AAS） 原子吸收分光光度法是基于蒸汽相中被測(cè)元素的基態(tài)原子對(duì)其原子共振輻射的吸收來(lái)測(cè)定樣品中該元素含量的一種方法。 原子吸收分光光度法在測(cè)定體液中微量金屬元素方面占有特殊的地位。原子吸收分光光度法（AAS）優(yōu)點(diǎn)： 靈敏度高，精密度好，選擇性好，應(yīng)用范圍廣，試樣用量少，簡(jiǎn)便快速，易于自動(dòng)化。局限性： 1.該法只能進(jìn)行無(wú)機(jī)元素的含量分析，不能直接用于有機(jī)化合物的含量分析和結(jié)構(gòu)分析；2.每測(cè)

15、一種元素要更換一次空心陰極燈，不能同時(shí)進(jìn)行元素分析；3.標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性范圍窄，一般為一個(gè)數(shù)量級(jí)。原子吸收分光光度法（AAS）原子吸收分光光度計(jì)主要部件： 光源（空心陰極燈） 原子化器 單色器 檢測(cè)系統(tǒng)原子吸收分光光度法（AAS）ab吸收光譜儀光源單色器樣品檢測(cè)器讀出器件原子化器 單色器光電倍增管樣品空心陰極燈讀出器件原子吸收分光光度法（AAS） 直接測(cè)定法 石墨爐原子吸收法測(cè)定大鼠血清、尿、膽汁和組織中的順鉑 間接測(cè)定法 尿樣中氨基多糖含量的測(cè)定 www。themegal

16、免疫分析法放射免疫分析法 (radioimmunoassay) 原理:放射性標(biāo)記抗原和未標(biāo)記抗原（待測(cè)物）與不足量的特異性抗體競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合，反應(yīng)后分離并測(cè)量放射性而求得未標(biāo)記抗原的量。用反應(yīng)式表示為： Ag + Ab=Ag-Ab + Ag* | Ag*-A放射免疫分析法 (radioimmunoassay)1靈敏度高2特異性強(qiáng)3取樣量少，適用于大批量樣品的測(cè)定優(yōu)點(diǎn)：放射免疫分析法 (radioimmunoassay)1需要用放射性同位素標(biāo)記抗原，其放射性對(duì)操

17、作人員的健康、對(duì)環(huán)境的污染都會(huì)造成危害。2有時(shí)會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)、假陽(yáng)性反應(yīng)。3需要有專用的同位素實(shí)驗(yàn)室及免疫測(cè)定儀器。缺點(diǎn)：放射免疫分析法 (radioimmunoassay)應(yīng)用實(shí)例最典型的例子是：地高辛的血藥濃度測(cè)定酶免疫分析法 （enzyme Immunoassay）均相EIA 非均相EIA 酶免疫分析法均相EIA非均相EIA酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA） 原理： 將特異的抗原- 抗體免疫學(xué)反

18、應(yīng)和酶催化反應(yīng)相結(jié)合，以酶促反應(yīng)的放大作用來(lái)顯示初級(jí)免疫反應(yīng)。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA） ELISA是通過(guò)在合適的載體上，酶標(biāo)限定量抗原與未知抗原競(jìng)爭(zhēng)固相抗體結(jié)合位點(diǎn)或固相抗原與未知抗原競(jìng)爭(zhēng)限定量的標(biāo)記抗體結(jié)合位點(diǎn)，形成抗體復(fù)合物。在一定底物參與下，復(fù)合物上的酶催化底物，使其水解、氧化或還原成另一種帶色物質(zhì)。由于酶的降解底物與顯色是成正比的，通過(guò)肉眼觀察或分光光度計(jì)測(cè)定，從而確定是否存在未知抗原或含量。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）應(yīng)用實(shí)例：酶聯(lián)免疫分析法及其在食品農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用武中平，徐春祥等 酶免疫分

19、析法檢測(cè)肝腎胰島細(xì)胞移植患者術(shù)后CSA濃度的臨床評(píng)價(jià) 溫冬梅 ，梁劍平 ，吳劍楊 ，龐嘉琳 ，李曼 酶免疫分析法（enzyme Immunoassay）酶標(biāo)記物是非放射性同位素，可避免對(duì)人體的放射性傷害和對(duì)環(huán)境的污染。酶標(biāo)記物比較穩(wěn)定，半衰期可超過(guò)一年。反應(yīng)不需溫育，均相EIA不需分離直接測(cè)定。反應(yīng)可用可見-紫外分光光度法測(cè)定。4123EIA優(yōu)點(diǎn)：酶免疫分析法（enzyme Immunoassay）標(biāo)記酶不能像同位素標(biāo)記物和熒光標(biāo)記物那樣直接產(chǎn)生信號(hào)，須有其他試劑（酶底物、輔酶）的參與，才能完成酶反應(yīng)。EIA缺點(diǎn)：

20、化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA） 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）是將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，借以檢測(cè)超微量物質(zhì)的一種分析技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析包含兩個(gè)部分，即化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)和免疫反應(yīng)分析系統(tǒng)。 化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)：經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化激發(fā) 態(tài)的中間體光子發(fā)光信號(hào)光量子 產(chǎn)額。 免疫反應(yīng)系統(tǒng)：類似于抗原與抗體 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）按發(fā)光劑不同分為:1.直接化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記法（CLIA）發(fā)光劑直接標(biāo)記抗體，多用吖啶酯類和苯酚類化合物。2.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法（CLEIA）以催化反應(yīng)的

21、酶為標(biāo)記物，抗原抗體結(jié)合后，其中的酶可對(duì)發(fā)光體系產(chǎn)生催化作用，產(chǎn)生發(fā)光效應(yīng)。多用的發(fā)光體系是HRP-魯米諾。3.電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)32+，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強(qiáng)度對(duì)待測(cè)的Ag或Ab進(jìn)行定量定性。 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）高度敏感，可達(dá)pgml或pmol水平；特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。測(cè)定范圍寬，可達(dá)7個(gè)數(shù)量級(jí)。試劑穩(wěn)定，無(wú)毒害，無(wú)污染，有效期長(zhǎng)，達(dá)數(shù)月甚至數(shù)年。操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，易于自動(dòng)化。在對(duì)環(huán)保很重視的國(guó)家，CLIA成了取代RIA的首選方法?；瘜W(xué)發(fā)光免

22、疫分析（CLIA）應(yīng)用實(shí)例呂干新、何偉珍等人化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定地高辛血藥濃度結(jié)果分析鐘筑寧、谷俊瑩等人化學(xué)發(fā)光免疫分析法與放射免疫分析法測(cè)定性激素的評(píng)價(jià)熒光免疫分析FIA 是以熒光物質(zhì)作為標(biāo)記物與待測(cè)藥物結(jié)合，所形成的熒光標(biāo)記物能與抗體發(fā)生免疫反應(yīng) ，引起熒光強(qiáng)度發(fā)生變化的一種分析方法。 按產(chǎn)生熒光的方式不同 1.底物標(biāo)記熒光免疫分析2.熒光偏振免疫分析3.熒光淬滅免疫分析4.熒光增強(qiáng)免疫分析5.時(shí)間分辨熒光免疫分析底物標(biāo)記熒光免疫分析(FPLA) 用一種本身不能發(fā)出熒光的酶底物來(lái)標(biāo)記藥物，當(dāng)酶底物受到相應(yīng)酶作

23、用時(shí)，能裂解產(chǎn)生熒光，其熒光強(qiáng)度與待測(cè)藥物含量成正比。熒光偏振免疫分析( FPIA) 用一定波長(zhǎng)的激發(fā)偏振光照射熒光物質(zhì)，然后利用物質(zhì)吸收光能后所發(fā)射出的偏振熒光強(qiáng)度來(lái)測(cè)定樣品中待測(cè)組分含量的一種分析方法。熒光偏振免疫分析( FPIA)熒光偏振免疫測(cè)定方法評(píng)價(jià)：樣品用量少熒光素標(biāo)記試劑穩(wěn)定，使用壽命長(zhǎng)重復(fù)性好快速，易自動(dòng)化適于小、中等分子物質(zhì)檢測(cè)熒光偏振免疫測(cè)定方法評(píng)價(jià)靈敏度較非均相熒光免疫測(cè)定法低熒光偏振免疫分析( FPIA) 目前應(yīng)用最多的是FPIA，是一種新型的競(jìng)爭(zhēng)性免

24、疫分析方法 ，相對(duì)于傳統(tǒng)的酶聯(lián)吸附免疫分析 (ELISA) ，F(xiàn)PIA是均相的反應(yīng)體系，不需要分離結(jié)合和未結(jié)合的抗體，其已在藥物檢測(cè)領(lǐng)域得到了初步應(yīng)用，主要用于測(cè)定藥物、激素等物質(zhì)，是用于治療藥物監(jiān)測(cè)的最新檢測(cè)技術(shù)。 熒光淬滅免疫分析FQIA 是利用游離標(biāo)記藥物具有熒光，當(dāng)其與抗體結(jié)合之后即失去熒光這一性質(zhì)來(lái)測(cè)定樣品含量的一種熒光分析方法。 熒光增強(qiáng)免疫分析FEIA 是利用熒光標(biāo)記藥物與抗體結(jié)合之后，能使其熒光強(qiáng)度增強(qiáng)的性質(zhì)來(lái)測(cè)定樣品的含量。時(shí)間分辨熒光免疫分析TRFIA T

25、RFIA 技術(shù)是以鑭系元素為示蹤劑，用具有雙功能基團(tuán)的鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，當(dāng)與抗體或抗原結(jié)合時(shí)，抗原抗體復(fù)合物在增強(qiáng)液中解離，在特定激發(fā)光激發(fā)下發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光。用時(shí)間分辨熒光儀測(cè)定復(fù)合物中稀土離子發(fā)射的熒光強(qiáng)度，從而確定待測(cè)樣品中抗原或抗體的濃度值，以達(dá)到定量分析的目的。 時(shí)間分辨熒光免疫分析TRFIA 與以往的放射免疫分析法相比，鑭系元素具有以下特點(diǎn)：激發(fā)光譜帶寬，可以增加激發(fā)能，提高靈敏度；發(fā)射光譜帶窄，減少非特異熒光，可有效降低本底熒光，且能量損失也不大；鑭系離子鰲合物的熒光壽命很長(zhǎng)，鑭系離子由激發(fā)態(tài)躍遷到基態(tài)時(shí)發(fā)射熒光，在測(cè)量時(shí)間內(nèi)可反復(fù)激發(fā)鑭系離子，相當(dāng)于大大提高了標(biāo)記比活性

26、；標(biāo)記物比較穩(wěn)定，可以保存1-2年。時(shí)間分辨熒光免疫分析TRFIA應(yīng)用舉例：李慧萍、段巧艷 時(shí)間分辨熒光免疫分析 法檢測(cè)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物研究 國(guó)內(nèi)最常用的HBV感染者的血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)主要依靠酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），它只能對(duì)HBV 血清學(xué)標(biāo)志物做定性或半定性分析，而且操作過(guò)程中受多種因素影響。ELISA 檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度降低，時(shí)間分辨熒光免疫分析TRFIA甚至出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果。尤其目前ELISA 法不能用于定量測(cè)定，局限了其應(yīng)用。 TRFIA 靈敏度高，特異性強(qiáng)，對(duì)于乙型肝炎兩對(duì)半定量檢測(cè)，能夠準(zhǔn)確、及時(shí)、靈敏地反映患者體內(nèi)的HBV 病毒標(biāo)志物的含量。 微生物測(cè)定法（microbiological analysis，MA） 為生物檢定法，它是利用藥物（常為 抗生素）對(duì)于微生物的抑制或殺滅作用，通過(guò)選擇對(duì)藥物敏感的試驗(yàn)菌，在適當(dāng)?shù)臈l件下，根據(jù)培養(yǎng)基上所產(chǎn)生的抑菌圈的大小來(lái)測(cè)定藥物效價(jià)的方法。