2023-3-25新苗杯申報(bào)書修3333

1、浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)方案新苗人才方案工程申報(bào)書創(chuàng)新工程名稱： WHBE兔紅細(xì)胞免疫功能與CR1 基因表達(dá)的相關(guān)性研究 創(chuàng)新工程負(fù)責(zé)人：孫朗朗工程負(fù)責(zé)人專業(yè)：生物工程學(xué)校名稱：浙江中醫(yī)藥大學(xué)申報(bào)日期：2023 年 3 月25 日工程類別：大學(xué)生科技創(chuàng)新工程大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)孵化工程大學(xué)生科技成果推廣工程浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)方案新苗人才方案實(shí)施辦公室 制填寫說(shuō)明一、申報(bào)書要按照要求，逐項(xiàng)認(rèn)真填寫，填寫內(nèi)容必須實(shí)事求是，表達(dá)明確嚴(yán)謹(jǐn)。二、格式要求：申報(bào)書中各項(xiàng)內(nèi)容以Word文檔格式填寫，表格中的字體為小四號(hào)仿宋體，1.5倍行距；表格空間缺乏的，可以擴(kuò)展或另附紙張；均用A4紙雙面打印，于左側(cè)裝訂成

2、冊(cè)。三、申報(bào)書由所在學(xué)校領(lǐng)導(dǎo)審查、簽署意見(jiàn)并加蓋公章后，一式2份均為原件，報(bào)送至團(tuán)省委學(xué)校部。一、工程簡(jiǎn)介項(xiàng)目概況工程名稱 WHEB兔紅細(xì)胞免疫功能與CR1基因表達(dá)的相關(guān)性研究工程性質(zhì)根底研究 應(yīng)用根底研究工程來(lái)源自主立題 教師指導(dǎo)選題起止時(shí)間自 2023年 01月 至 2023 年12月工程狀況1、研發(fā)階段 2、中試階段 3、批量規(guī)模生產(chǎn)選項(xiàng)打申請(qǐng)人姓名孫朗朗性別男出生年月1990.09學(xué)歷本科生所在院系生物工程聯(lián)系 電子信箱987215051qq 項(xiàng) 目 組主要成員姓名性別學(xué)歷專業(yè)具體分工杜勇男研究生生物化工熒光定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)量燕架軍男本科制藥工程RNA提取和血樣采集葉洪琳女本

3、科生物工程C3b受體花環(huán)率測(cè)定劉維琪女本科生物工程免疫復(fù)合物花環(huán)率測(cè)定項(xiàng)目指導(dǎo)教師姓名趙偉春性 別女 出生年月1973.10職稱副教授主要研究方向中藥活性成分別離提取及作用機(jī)理研究近三年獲獎(jiǎng)成果：國(guó)家級(jí)_等獎(jiǎng) 0 項(xiàng)，省部級(jí)_等獎(jiǎng) 0 項(xiàng)近三年科研經(jīng)費(fèi) 6 萬(wàn)元，年均 2 萬(wàn)元項(xiàng)目主要內(nèi)容簡(jiǎn)介 1采集兔血樣，制備紅細(xì)胞懸浮液，測(cè)定紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率E-C3bRR和紅細(xì)胞循環(huán)免疫復(fù)合物花環(huán)率E-ICRR，比較不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞免疫功能差異；2采集兔骨髓，提取總RNA，通過(guò)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)兔CR1基因 mRNA的表達(dá)量，比較不同發(fā)育期實(shí)驗(yàn)兔CR1基因mRNA表

4、達(dá)量；3分析WHEB兔紅細(xì)胞免疫功能與CR1基因表達(dá)的相關(guān)性。二、工程研究目的、意義及創(chuàng)新性1、申請(qǐng)工程的必要性、目的及意義1申請(qǐng)工程的必要性紅細(xì)胞免疫功能的研究在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中具有重要的意義，各種疾病狀態(tài)下人類紅細(xì)胞免疫功能及CR1表達(dá)的變化已經(jīng)通過(guò)直接檢測(cè)人體血液的相關(guān)指標(biāo)得以研究。但是，增強(qiáng)或調(diào)控紅細(xì)胞免疫功能的藥物篩選及藥效研究必須借助于符合臨床疾病發(fā)生開(kāi)展規(guī)律的動(dòng)物模型。但目前還缺乏相關(guān)的動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)兔是教學(xué)科研中重要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，開(kāi)展實(shí)驗(yàn)兔紅細(xì)胞免疫低下或缺陷模型研究，不僅為動(dòng)物醫(yī)學(xué)和中醫(yī)藥的研究開(kāi)發(fā)提供理想的動(dòng)物模型，而且可為實(shí)驗(yàn)兔在生產(chǎn)繁殖及疾病的防治、保持實(shí)驗(yàn)兔的優(yōu)良品質(zhì)等方面提供

5、可靠的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。CR1作為紅細(xì)胞免疫功能的重要物質(zhì)根底之一，測(cè)定其水平、研究其變化規(guī)律及其分子機(jī)理對(duì)了解某些疾病的病情和判定治療反響具有重要的意義。WHBE兔是白毛黑眼兔White Hair Black Eyes Rabbit的簡(jiǎn)稱，是在日本大耳白兔JW兔生產(chǎn)群中發(fā)現(xiàn)一只雄性白毛黑眼兔，通過(guò)與雌性JW兔交配的后代回交后出現(xiàn)的白毛黑眼兔，再用同胞和半同胞交配的方式，將白毛黑眼的性狀固定后，連續(xù)封閉擴(kuò)群繁殖而來(lái)的實(shí)驗(yàn)兔封閉群。它與目前常用的JW兔相比，具有心功能強(qiáng)、免疫反響敏感、產(chǎn)生抗體效價(jià)高、紅細(xì)胞與網(wǎng)織紅細(xì)胞低、淋巴細(xì)胞高、血液學(xué)參數(shù)指標(biāo)與人類較為接近，尤其是網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)與人相近等特點(diǎn)。

6、提示W(wǎng)HBE兔的紅細(xì)胞免疫功能可能更接近于人類，因此，WHBE兔可能是人類紅細(xì)胞免疫功能和紅細(xì)胞老化研究較好的模型動(dòng)物，開(kāi)展WHBE兔紅細(xì)胞免疫功能研究對(duì)于更好的開(kāi)發(fā)和利用WHBE兔具有重要的科學(xué)意義。2申請(qǐng)工程的目的及意義本工程在研究WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞免疫功能與CR1基因表達(dá)的相關(guān)性的根底上，獲得WHBE兔和JW兔CR1基因cDNA全序列并比較了二者的差異。通過(guò)本工程的研究，為明確WHBE兔紅細(xì)胞免疫功能的特性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為WHBE兔的培育、遺傳檢測(cè)和分子生物學(xué)特點(diǎn)的進(jìn)一步研究奠定根底。有助于說(shuō)明WHBE兔紅細(xì)胞免疫功能特性的分子機(jī)制，為明確WHBE兔是否比JW兔、NZW兔更適于紅細(xì)

7、胞免疫相關(guān)疾病、機(jī)體衰老等的研究奠定根底，借以擴(kuò)展在生物市場(chǎng)上的應(yīng)用價(jià)值。2、工程的背景、主要內(nèi)容、技術(shù)水平及應(yīng)用范圍1工程的背景紅細(xì)胞免疫功能的研究是當(dāng)前的一個(gè)熱點(diǎn)。紅細(xì)胞是血液中含量最多的一種有形成分，具有識(shí)別、粘附、殺傷抗原、去除循環(huán)免疫復(fù)合物IC、參與機(jī)體免疫調(diào)控等多種功能1。紅細(xì)胞免疫功能缺陷與自身免疫性貧血、慢性肝病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎病、冠心病、惡性腫瘤以及中醫(yī)血瘀證等疾病密切相關(guān)5。機(jī)體衰老和老年性疾病的發(fā)生也與紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)異常息息相關(guān)1。紅細(xì)胞免疫功能測(cè)定的方法主要為補(bǔ)體致敏的酵母菌花環(huán)試驗(yàn)。紅細(xì)胞擁有如型補(bǔ)體受體CR1，C3b/C4b受體又稱CD35、補(bǔ)體受體、降解加速因

8、子、超氧化物歧化酶、NK細(xì)胞增強(qiáng)因子、-內(nèi)啡肽受體和腎上腺素受體等許多與免疫相關(guān)的物質(zhì)。紅細(xì)胞的調(diào)理促吞噬作用、免疫調(diào)控作用、粘附作用、去除IC及炎癥作用等均通過(guò)補(bǔ)體受體介導(dǎo)，其中CR1是紅細(xì)胞免疫功能最重要的物質(zhì)根底之一2。人的CR1基因位于第1號(hào)染色體長(zhǎng)臂32區(qū)的補(bǔ)體激活調(diào)節(jié)子區(qū)，由145638個(gè)核苷酸組成。其內(nèi)含子7.4kb和6.9kb Hind 酶切片段可區(qū)分紅細(xì)胞CR1密度相關(guān)三種基因型。但是B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞等的CRl表達(dá)與上述酶切位點(diǎn)無(wú)關(guān)8。肝癌、2型糖尿病、急性白血病等疾病患者的紅細(xì)胞免疫功能低下與CR1密度基因突變型L的缺陷表達(dá)有關(guān)6。兔CR1基因的研究較少，從G

9、enbank中僅檢索到家兔Oryctolagus cuniculus 新西蘭品系NZW兔CR1基因共673個(gè)核苷酸的局部cDNA序列，該序列編碼224個(gè)氨基酸殘基，其CR1基因和cDNA全序列未見(jiàn)有研究報(bào)道4。國(guó)內(nèi)外對(duì)兔紅細(xì)胞免疫功能的研究主要集中在三個(gè)方面。利用補(bǔ)體致敏的酵母菌花環(huán)試驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)兔紅細(xì)胞免疫功能隨年齡遞增逐漸衰退，同種實(shí)驗(yàn)兔不同品種間其紅細(xì)胞免疫粘附活性也不同9。研究實(shí)驗(yàn)兔疾病或疾病動(dòng)物模型中紅細(xì)胞免疫功能的變化。已經(jīng)證實(shí)，在免疫性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、中醫(yī)證候等實(shí)驗(yàn)兔模型以及實(shí)驗(yàn)兔創(chuàng)傷性疾病、寄生蟲(chóng)病等疾病中其紅細(xì)胞的免疫功能均有顯著下降3。增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)兔紅細(xì)胞免疫功能的藥效實(shí)驗(yàn)。

10、比方通過(guò)灌服免疫增強(qiáng)劑、中藥添加劑及中藥復(fù)方或是利用針灸療法等處理來(lái)提高實(shí)驗(yàn)兔的免疫功能7。但是，所有研究均未涉及實(shí)驗(yàn)兔CR1基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)產(chǎn)物含量的變化。已有的研究中，在基因水平上，只有家兔CR1局部cDNA序列的研究，未見(jiàn)有實(shí)驗(yàn)兔CR1基因全序列及其基因多態(tài)性和cDNA全序列的報(bào)道。在蛋白水平上，只有CR1蛋白局部片段的氨基酸殘基排列順序，未見(jiàn)有CR1蛋白全分子組成及其多態(tài)性的研究，這嚴(yán)重影響有關(guān)實(shí)驗(yàn)兔免疫功能在不同發(fā)育期、不同品種間、疾病狀態(tài)或藥物作用下存在差異的分子機(jī)理的研究，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)兔作為動(dòng)物模型用于人類相關(guān)疾病及衰老的研究。而近期所做的預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，顯示了不同發(fā)育期不同實(shí)驗(yàn)兔

11、的紅細(xì)胞免疫功能與CR1基因的表達(dá)差異存在著必然關(guān)系。2工程的主要內(nèi)容1通過(guò)測(cè)定紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率E-C3bRR、紅細(xì)胞循環(huán)免疫復(fù)合物花環(huán)率E-ICRR和紅細(xì)胞免疫粘附腫瘤細(xì)胞能力，明確不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞免疫功能的變化規(guī)律；2采用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)兔CR1基因 mRNA的表達(dá)量，探討不同實(shí)驗(yàn)兔mRNA轉(zhuǎn)錄水平與紅細(xì)胞免疫水平間的相關(guān)性。3實(shí)驗(yàn)方法及技術(shù)1) 紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率和紅細(xì)胞循環(huán)免疫復(fù)合物花環(huán)率的測(cè)定血樣的采集WHBE兔和JW兔按月齡分為幼年兔0-3月齡、青年兔318月齡、壯年兔1830月齡和老年兔30月齡以上四組，各組均雌雄各6只。實(shí)驗(yàn)前將所有

12、實(shí)驗(yàn)兔禁食8h后，從耳中央動(dòng)脈采血1.5 mL，置于枸櫞酸鈉抗凝管中，混勻。紅細(xì)胞懸液制備將實(shí)驗(yàn)兔抗凝血1.5 mL，加PBS液15 mL及適量淋巴別離液，2000r/min離心5 min，棄白細(xì)胞、血漿層及淋巴別離層，再用PBS洗滌34次，用HankS液配制成1.25107個(gè)/mL紅細(xì)胞懸液。致敏酵母菌懸液制備 取未致敏酵母多糖凍干試劑1支，參加2mL PBS液，37水浴融化并混勻，2000r/min離心5min，棄上清，加PBS1mL和等量的豚鼠血清，混勻，37水浴30min，然后再以PBS液洗滌2次，調(diào)整酵母菌濃度為1108個(gè)/m1即為致敏酵母菌懸液。未致敏酵母菌懸液制備 取未致敏酵母多

13、糖凍干試劑1支，參加2mL PBS液，37水浴融化混勻，2000r/min離心5min，然后再以PBS 液洗滌2次，調(diào)整酵母菌濃度為1108個(gè)/m1備用。紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率及紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率測(cè)定取2支試管，每管加待測(cè)紅細(xì)胞懸液50L，第一管加補(bǔ)體致敏酵母多糖懸液50L，第二管加酵母多糖懸液50L，混勻，置于37水浴30min，取出輕輕搖勻，加生理鹽水100L2) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)CR1基因的mRNA表達(dá)量骨髓的采集成熟紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核，其細(xì)胞膜上的CR1蛋白由骨髓幼稚紅細(xì)胞的CR1基因表達(dá)而來(lái)。因此，采集骨髓檢測(cè)CR1基因的表達(dá)量。將實(shí)驗(yàn)兔禁食12h，從耳靜脈緩慢注射3%戊巴比妥

14、鈉1mL/kg溶液麻醉，剪去股骨大轉(zhuǎn)子外側(cè)的毛，用8%硫化鈉處理3min脫去細(xì)毛，再用清水洗滌3次，用碘伏擦拭皮膚，再用75%酒精擦拭兩遍。將兔自然仰臥位，雙后肢自然伸直。以股骨第三轉(zhuǎn)子下0.3-0.5cm處穿刺點(diǎn)，在股骨外側(cè)嵴偏前，于脛骨前偏外1/3處，向后30-40，向上40-60方向，骨髓穿刺針透過(guò)皮質(zhì)骨進(jìn)入髓腔0.8-1.2cm后，用帶有1.5mL2000U肝素鈉的無(wú)菌注射器吸取骨髓3mL，立即混勻防止凝血。RNA的提取采用Trizol RNA提取試劑盒提取RNA，將提取的RNA取1L測(cè)定A260/A280，并計(jì)算其濃度，然后用常規(guī)1 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量，-80實(shí)時(shí)熒光定量

15、RT-PCR根據(jù)兔CR1基因的mRNA局部序列ACCESSION：EU407475設(shè)計(jì)引物。采用SYBR PrimeScipt TM RT-PCR Kit進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR。.反轉(zhuǎn)錄：10L 反響體系中含5 PrimeScript TM Buffer 2L，PrimeScript TM RT Enzyme Mix 015 L，Oligo dT Primer 25 pmol，隨機(jī)引物50 pmol，Total RNA 1L，DEPC水加至10L。上述成分混勻后置于PCR儀器中，反響條件：37 15 min，85 5s，.標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和目的基因的定量：取4.5L cDNA模板按2倍濃度

16、梯度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。取2L分別對(duì)CR1基因和-actin基因進(jìn)行QRT-PCR擴(kuò)增，每樣本重復(fù)3次，另加3個(gè)無(wú)模板的陰性對(duì)照，依次在冰上加樣：1 SYBR Premix Ex TaqTM，上、下游引物各0.2mol/L，1 ROX Reference Dye (50 )，cDNA 模板2 L，滅菌蒸餾水加至20 L。PCR擴(kuò)增程序：95 預(yù)變性10 s；95 5 s，55 20 s，72 10 s，404技術(shù)水平及應(yīng)用范圍本工程在紅細(xì)胞具有免疫功能的根底上，深入研究CR1基因mRNA的表達(dá)量與紅細(xì)胞功能的相關(guān)性，利用紅細(xì)胞免疫能力測(cè)定和熒光RT-PCR技術(shù)從蛋白和基因水平研究，探討不同發(fā)育期不同實(shí)

17、驗(yàn)兔的CR1基因表達(dá)量差異對(duì)紅細(xì)胞免疫功能的影響這不僅為動(dòng)物醫(yī)學(xué)和中醫(yī)藥的研究開(kāi)發(fā)提供理想的動(dòng)物模型，而且可為實(shí)驗(yàn)兔在生產(chǎn)繁殖及疾病的防治、保持實(shí)驗(yàn)兔的優(yōu)良品質(zhì)等方面提供可靠的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。更重要的是，對(duì)于國(guó)內(nèi)生物藥物快速開(kāi)展提供了技術(shù)支持，今后開(kāi)發(fā)新藥假設(shè)能應(yīng)用于臨床，將具有良好的開(kāi)發(fā)前景及應(yīng)用價(jià)值9。3、實(shí)施該工程所具備的根底、優(yōu)勢(shì)和風(fēng)險(xiǎn)本實(shí)驗(yàn)室配有定性PCR儀、熒光定量PCR儀、Bio-RAD酶標(biāo)儀、紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式冷凍離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、瓊脂糖凝膠電泳儀、-20冰箱、超低溫冰箱、生物平安柜、移液槍等儀器和設(shè)備，為本工程的順利開(kāi)展創(chuàng)造了很好的條件。所需各種藥品、試劑可

18、通過(guò)國(guó)內(nèi)外有關(guān)公司購(gòu)置，均已落實(shí)。本工程動(dòng)物實(shí)驗(yàn)局部，已聯(lián)系浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。作為浙江省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)學(xué)科和浙江省中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，其具有符合國(guó)家規(guī)定的二級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施，能確保實(shí)驗(yàn)順利完成。工程指導(dǎo)老師一直致力于免疫學(xué)和分子生物學(xué)的研究工作，具備了扎實(shí)的理論知識(shí)和動(dòng)手能力作為實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢(shì)。工程組成員結(jié)構(gòu)合理，精力充分，事業(yè)心強(qiáng)，工作認(rèn)真負(fù)責(zé)，具有開(kāi)展本工程研究的根本素質(zhì)、豐富經(jīng)驗(yàn)和實(shí)踐技能。申請(qǐng)者及工程組成員已廣泛地查閱了文獻(xiàn)資料，掌握了哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞免疫及CR1基因的研究資料，為本工程的研究提供了扎實(shí)的背景依據(jù)。工程組的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，隨著年齡的增長(zhǎng)，WHBE兔和J

19、W兔的E-C3bRR和免疫粘附腫瘤細(xì)胞能力與年齡呈顯著負(fù)相關(guān)9，且老年WHBE兔紅細(xì)胞免疫粘附腫瘤細(xì)胞能力顯著高于日本大耳白兔P0.05，以雌性動(dòng)物變化最為明顯P0.05；而E-ICRR隨年齡呈顯著正相關(guān)。說(shuō)明隨著機(jī)體在衰老過(guò)程中，老齡動(dòng)物由于血清補(bǔ)體含量降低，體內(nèi)循環(huán)免疫復(fù)合物的大量堆積，引起機(jī)體體液免疫的下降，導(dǎo)致疾病發(fā)生的易感性增強(qiáng)。通過(guò)上述研究工作的開(kāi)展，申請(qǐng)者及其工程組成員在本工程所涉及的實(shí)驗(yàn)兔飼養(yǎng)、血樣采集、紅細(xì)胞免疫功能評(píng)價(jià)等方面均積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，為本工程的研究奠定了扎實(shí)的根底。 本工程為國(guó)內(nèi)首例針對(duì)紅細(xì)胞免疫功能與基因表達(dá)的相關(guān)性研究，涉及實(shí)驗(yàn)兔CR1基因表達(dá)產(chǎn)物含量的變化，

20、從基因和蛋白水平上進(jìn)行相關(guān)性分析研究，這是創(chuàng)新之處，也是風(fēng)險(xiǎn)所在。而近期實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，實(shí)驗(yàn)兔免疫功能在不同發(fā)育期、不同品種間基因表達(dá)存在差異，因此，本工程研究確實(shí)可行，有助于實(shí)驗(yàn)兔作為動(dòng)物模型用于人類相關(guān)疾病及衰老的研究。4、工程創(chuàng)新之處1首次對(duì)不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔骨髓CR1基因的mRNA表達(dá)進(jìn)行定量分析；2首次探索不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔骨髓CR1基因的mRNA表達(dá)量與WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞免疫功能特性的相關(guān)性。5、工程方案目標(biāo)1明確不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞免疫功能的差異；2明確不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔CR1基因mRNA表達(dá)量的差異；3明確WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞

21、免疫功能增齡變化與CR1基因mRNA表達(dá)增齡變化的關(guān)系。參考文獻(xiàn)1 郭峰現(xiàn)代紅細(xì)胞免疫學(xué)M上海：第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，2002，19(2)：21-232 趙煥英，包金風(fēng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的原理及其應(yīng)用研究進(jìn)展J中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2007，72：66-673 陳曄光，張傳茂，陳儉分子細(xì)胞生物學(xué)M北京：清華大學(xué)出版社，2006，2：427-4384 李一經(jīng)，劉寶全，李海濱馬立克氏病病毒感染雞TCR1與TCR2 T細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化觀察J東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，24)：355-3585 曹東，黃宗干，曹維西白血病患者紅細(xì)胞免疫功能的研究J中華內(nèi)科雜志，1988，7(10)：634 6 林森

22、國(guó)外有關(guān)紅細(xì)胞CR1研究的幾種測(cè)定方法M南京：南京大學(xué)出版社，19937 虞紫茜，趙中平紅細(xì)胞免疫功能的初步研究J 中華醫(yī)學(xué)雜志，1982，2(2)：7158 李德菊，邵華腫瘤患者紅細(xì)胞免疫功能與T淋巴亞群關(guān)系的探討M南京：南京大學(xué)出版社，1993：1819 郭峰血清對(duì)紅細(xì)胞免疫粘附抑制作用的測(cè)定 J上海免疫學(xué)雜志，1987，5(7)：13310郭峰，張俊潔，趙書平，等正常人紅細(xì)胞CR1密度相關(guān)基因多型性分布J上海免疫學(xué)雜志，1998，8(3)：l52 11鄔偉秀，蔡敏琪，等 腫瘤患者紅細(xì)胞免痤功能刮定及其影響因素的研究J中華血液學(xué)雜志，1996，7(4)：30912 Fearon DTIde

23、ntification of the membrane glyeor rotein that is the C3b receptor of the human erythrocys polymer phonuclear leukocyteB lymphocyte and monoJJ.Exp. Med.，1980，2(1)：20-3013 Xiang L，Rundles J R，Hamihon D R，et alQuantitative alleles of CRl coding sequence analysis and comparison of haplotypes in two eth

24、nic groupsJJ. hnmuno1，1999，3(9)：4939-4945三、預(yù)期成果、知識(shí)產(chǎn)權(quán)形成及經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益分析工程的預(yù)期成果及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬情況1明確不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞免疫功能的差異；2明確不同發(fā)育期WHBE兔和JW兔CR1基因mRNA表達(dá)量的差異；3明確WHBE兔和JW兔紅細(xì)胞免疫功能差異與CR1基因mRNA表達(dá)量間的相關(guān)性；4以論文形式提供研究成果，在國(guó)家級(jí)核心期刊上發(fā)表學(xué)術(shù)論文12篇。工程的市場(chǎng)前景分析CR1作為紅細(xì)胞免疫功能的重要物質(zhì)根底之一，測(cè)定其水平、研究其變化規(guī)律及其分子機(jī)理對(duì)了解某些疾病的病情和判定治療反響具有重要的意義。紅細(xì)胞免疫在免疫調(diào)控中占

25、有很重要的地位，是機(jī)體免疫系統(tǒng)重要的組成局部?，F(xiàn)代紅細(xì)胞免疫研究發(fā)現(xiàn)，許多疾病的發(fā)病機(jī)理中，紅細(xì)胞免疫缺陷和免疫功能低下占大多數(shù)。紅細(xì)胞可黏附腫瘤細(xì)胞，這種免疫黏附活性主要與紅細(xì)胞上的補(bǔ)體受體I型(CR1)有關(guān)，在腫瘤免疫中具有重要作用。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞能產(chǎn)生自然殺傷(NK)細(xì)胞增強(qiáng)因子(NKEF)，該因子可明顯增強(qiáng)N K細(xì)胞殺傷活性。目前對(duì)紅細(xì)胞免疫功能的表現(xiàn)、機(jī)制、調(diào)節(jié)機(jī)制與疾病關(guān)系等的研究都取得了一定的進(jìn)展，紅細(xì)胞具有免疫功能已是不容質(zhì)疑的事實(shí)。在臨床中，腫瘤病人往往伴有貧血，同時(shí)有紅細(xì)胞CR1數(shù)量與活性都下降。近年來(lái)研究證明紅細(xì)胞在抗腫瘤免疫反響中有多種作用，而腫瘤病人紅細(xì)胞免疫功能

26、全面紊亂與低下?，F(xiàn)在的社會(huì)人群中，腫瘤病依然是一大塊重要的難治疾病，這也正說(shuō)明了紅細(xì)胞免疫藥物的廣闊市場(chǎng)需求。然而，我國(guó)目前正研制的和生產(chǎn)的免疫藥物大局部是追蹤模仿國(guó)外的產(chǎn)品，缺少原創(chuàng)的技術(shù)和擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)品，更缺少增強(qiáng)或調(diào)控紅細(xì)胞免疫功能的藥物篩選及藥效研究的動(dòng)物模型。近年來(lái)，止血愈瘍顆粒、胃痛寧膠囊、健胃愈瘍顆粒等一批中藥制劑在腫瘤病的治療方面起到了積極的作用。但是，由于紅細(xì)胞免疫功能病理機(jī)制極其復(fù)雜，各種藥物治療的效果亦因人而異。因此，利用最新技術(shù)研究紅細(xì)胞免疫功能與基因表達(dá)的相關(guān)性，從而開(kāi)發(fā)有針對(duì)性的新藥仍具有廣闊的市場(chǎng)需求。同時(shí)，通過(guò)本工程的研究，為明確WHBE兔紅細(xì)胞免疫功能

27、的特性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為WHBE兔的培育、遺傳檢測(cè)和分子生物學(xué)特點(diǎn)的進(jìn)一步研究奠定根底。有助于說(shuō)明WHBE兔紅細(xì)胞免疫功能特性的分子機(jī)制，為明確WHBE兔是否比JW兔、NZW兔更適于紅細(xì)胞免疫相關(guān)疾病、機(jī)體衰老等的研究奠定根底，借以擴(kuò)展在生物市場(chǎng)上的應(yīng)用價(jià)值。工程的盈利能力分析對(duì)于免疫性疾病，紅細(xì)胞具有重要的免疫功能，本工程的初步試驗(yàn)說(shuō)明，CR1基因的表達(dá)量與免疫功能成正比關(guān)系，其作用途徑明確，對(duì)于開(kāi)發(fā)有針對(duì)性的新藥有積極作用。目前市場(chǎng)上，并沒(méi)有針對(duì)加強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能的基因藥物，因此，假設(shè)在本工程根底上開(kāi)發(fā)新藥，將具有很強(qiáng)的盈利空間。工程的社會(huì)效益分析對(duì)于社會(huì)上常見(jiàn)而難治的腫瘤病，根本上都是基因

28、突變和逐漸積累的結(jié)果，本工程從分子水平去分析闡述紅細(xì)胞免疫功能與基因表達(dá)的相關(guān)性，為紅細(xì)胞免疫功能對(duì)腫瘤作用的的可能鼓勵(lì)提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，推動(dòng)了于紅細(xì)胞免疫相關(guān)疾病、機(jī)體衰老等的研究和臨床應(yīng)用，具有良好的社會(huì)效益。四、工程實(shí)施進(jìn)度方案2023.01-2023.02 兔血樣和骨髓的采集；2023.03-2023.04 紅細(xì)胞懸液的制備；2023.05-2023.06 紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率和循環(huán)免疫復(fù)合物花環(huán)率的測(cè)定；2023.07-2023.08 紅細(xì)胞免疫粘附腫瘤細(xì)胞能力的測(cè)定；2023.09-2023.10 總RNA提取和熒光定量RT-PCR檢測(cè)CR1基因的mRNA表達(dá)量。2023.11-2

29、023.12 資料統(tǒng)計(jì)分析，課題總結(jié)，論文撰寫。五、工程經(jīng)費(fèi)預(yù)算預(yù)算科目名稱金額一、經(jīng)費(fèi)來(lái)源合計(jì)100001、省財(cái)政經(jīng)費(fèi)50002、學(xué)校配套經(jīng)費(fèi)50003、自籌經(jīng)費(fèi)04、其他0二、經(jīng)費(fèi)支出合計(jì)100001、設(shè)備費(fèi)01購(gòu)置設(shè)備費(fèi)02試制設(shè)備費(fèi)03設(shè)備租賃費(fèi)02、材料費(fèi)48003、測(cè)試化驗(yàn)加工費(fèi)5004、燃料動(dòng)力費(fèi)05、差旅費(fèi)12006、會(huì)議費(fèi) 07、合作、協(xié)作研究與交流費(fèi)5008、出版/文獻(xiàn)/信息傳播/知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)費(fèi)12009、人員勞務(wù)費(fèi)100010、專家咨詢費(fèi)011、其他開(kāi)支800注：支出預(yù)算按照經(jīng)費(fèi)開(kāi)支范圍確定的支出科目和不同經(jīng)費(fèi)來(lái)源編列，同一支出科目一般不同時(shí)在財(cái)政經(jīng)費(fèi)和自籌經(jīng)費(fèi)中預(yù)算。其中購(gòu)置設(shè)備費(fèi)20% 其中不能用于購(gòu)置通用設(shè)備；人員勞務(wù)費(fèi)15%