流式細(xì)胞儀精品課件

1、流式細(xì)胞儀第1頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五總覽 流式細(xì)胞術(shù)基本知識(shí) 流式細(xì)胞儀的組成 數(shù)據(jù)采集與分析第2頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五流式細(xì)胞技術(shù)是什么？流式細(xì)胞術(shù)在流動(dòng)的狀態(tài)中檢測(cè)細(xì)胞或顆粒的各項(xiàng)特性特異性強(qiáng)，靈敏度高，速度快，并能實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析可檢測(cè)的樣本種類多樣：外周血，骨髓，細(xì)胞穿刺液，洗脫液，實(shí)體組織，培養(yǎng)細(xì)胞，微生物Flow CytometryFlow:Fluid Cyto:Cell Metry:Measurement第3頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本0.4um40um第4頁，共49頁

2、，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)指標(biāo)流式細(xì)胞術(shù)提供的信息： - 相對(duì)細(xì)胞大小 - 相對(duì)細(xì)胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度 - 染色過細(xì)胞的相對(duì)熒光強(qiáng)度第5頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞粒度DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細(xì)胞功能細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體細(xì)胞凋亡在上述信號(hào)基礎(chǔ)上的細(xì)胞分選流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用第6頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五流式細(xì)胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細(xì)胞光學(xué)系統(tǒng)：產(chǎn)生和收集光學(xué)信號(hào)電子系統(tǒng)：光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，

3、進(jìn)行信號(hào)處理第7頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五Fluidics DiagramSheath Flowsheath tankSample Flowsheathinterior reservoirwasteinterior reservoirsheath filtersample injectiontube (SIT)test tubeor plateflow cellinterrogation pointbubble filterwaste tank第8頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五液流系統(tǒng)第9頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，

4、星期五光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:- 激光器- 透鏡和反射鏡，將激光引導(dǎo)到檢測(cè)區(qū)域收集光學(xué)系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)到對(duì)應(yīng)的光學(xué)接收器第10頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第11頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第12頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五光學(xué)系統(tǒng)第13頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第14頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五光學(xué)系統(tǒng)-濾光片460 500 540460 500 540460 500 540SP 500LP 500BP500/50LongpassS

5、hortpassBandpass第15頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第16頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第17頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage第18頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五電子系統(tǒng)第19頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五電子系統(tǒng)第20頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五Review懸浮狀態(tài)的細(xì)胞單個(gè)流過流動(dòng)室細(xì)胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光 信號(hào)信號(hào)

6、被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)存儲(chǔ)于電腦上液流系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電子系統(tǒng)第21頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五回顧流式細(xì)胞儀的三大組成部分？濾光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？第22頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五數(shù)據(jù)采集三種數(shù)據(jù)： - 前向散射光FSC - 側(cè)向散射光SSC - 各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L4第23頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五當(dāng)使用激光光源時(shí)，在前向方向（和激光行進(jìn)的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的強(qiáng)度是和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的大小、形狀密切相關(guān)的數(shù)據(jù)采集-

7、前向散射光第24頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五當(dāng)激光光源被使用時(shí)，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生， 可以用90o 角的側(cè)向散射光檢測(cè)通道來采集側(cè)向散射光的強(qiáng)度和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的顆粒密度、內(nèi)部復(fù)雜程度密切相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光第25頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖 顆粒雜質(zhì)、氣泡對(duì)檢測(cè)的影響第26頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五細(xì)胞標(biāo)記上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長的激發(fā)光來激發(fā)，同時(shí)發(fā)出特定波長的光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生的發(fā)射光將由特定的熒光通道來接收特定檢測(cè)是通過光學(xué)濾片和透鏡來控

8、制的數(shù)據(jù)采集-熒光信號(hào)熒光強(qiáng)度是和細(xì)胞上標(biāo)記上的熒光染料的量正相關(guān)第27頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五數(shù)據(jù)采集第28頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五電壓信號(hào)放大方式：log、lin信號(hào)類型：A,W,H電壓的調(diào)節(jié):根據(jù)陰性對(duì)照管來調(diào)節(jié)第29頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五閾值可以以任意參數(shù)及多個(gè)參數(shù)的組合作為閾值大多數(shù)樣本都可以設(shè)定FSC/SSC閾值以下的信號(hào)不存儲(chǔ)根據(jù)陰性對(duì)照管來調(diào)節(jié)目的是將不需要的雜質(zhì)信號(hào)，噪音信號(hào)，無用的細(xì)胞信號(hào)等扣除，使收集到的都是有用信號(hào)第30頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期

9、五第31頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第32頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五補(bǔ)償補(bǔ)償方式：任意兩個(gè)通道之間，可以采用手動(dòng)或自動(dòng)補(bǔ)償。補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié):根據(jù)單染對(duì)照管來調(diào)節(jié)第33頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第34頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第35頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第36頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第37頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五第38頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五1.) Com

10、pensation - Too Little; Too Much第39頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五2.) Basic Principles of Compensation - % Compensation is independent of fluorescence intensity第40頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五3.) Compensation- Too Dim, Too Bright Compensation ControlsSmall errors in compensation of a dim control (A) can

11、 result in large compensation errors with bright reagents (B & C).第41頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五數(shù)據(jù)分析 流式數(shù)據(jù)直方圖散點(diǎn)圖等高線圖密度圖三維圖統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)第42頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五直方圖直方圖(Distribution Histogram)橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，單位是對(duì)數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)?？v坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)。第43頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖(Dot Plot)X坐標(biāo)為該細(xì)胞一參數(shù)相對(duì)含量，Y坐標(biāo)為該細(xì)胞另一參數(shù)的含量，可以將細(xì)胞亞群分開。第44頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五等高線圖和密度圖第45頁，共49頁，2022年，5月20日，1點(diǎn)29分，星期五三維圖第46頁，共