常用檢測方法的分析

1、常用檢測方法的分析第1頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三HPV檢測的意義HPV 感染與CIN 和宮頸癌變有著密切的關(guān)系HPV的檢測可能對宮頸癌的預(yù)后有預(yù)測作用HPV檢測對科學(xué)研究的價(jià)值第2頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三常用檢測方法1細(xì)胞學(xué)檢查；2. 組織學(xué)檢查；3感染組織中HPV蛋白的檢測；4. HPV感染的血清學(xué)檢查；5. HPV基因組檢測.第3頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三細(xì)胞學(xué)檢查 傳統(tǒng)巴氏涂片（CV） 液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)自動(dòng)細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)test，又稱LCT計(jì)算機(jī)輔助細(xì)胞檢測系統(tǒng)（CCT），第4頁，共2

2、1頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三優(yōu)點(diǎn)與問題 優(yōu)點(diǎn)： 操作簡單，價(jià)格低廉，適宜作初步篩查； 缺點(diǎn)： 凹空細(xì)胞是HPV 感染的主要形態(tài)學(xué)改變， 但由于其他病毒感染及人為因素均有可能造成細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡或凹空樣變，而且細(xì)胞學(xué)檢查易受取材、染色及細(xì)胞病理醫(yī)生的主觀判斷等因素的影響，因此應(yīng)用細(xì)胞病理學(xué)檢測HPV 存在靈敏度低、特異性差、假陰性率和假陽性率高、不能對HPV 進(jìn)行分型.第5頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三組織學(xué)檢查；肉眼觀察；陰道鏡觀察；組織檢查；第6頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三優(yōu)點(diǎn)與問題優(yōu)點(diǎn)： 操作簡單，價(jià)格低廉，適宜作初步

3、篩查； 缺點(diǎn)：準(zhǔn)確率低，人員素質(zhì)要求高，病人痛苦程度大。第7頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三感染組織中HPV蛋白的檢測針對HPV抗原，主要是衣殼蛋白制備抗體，通過免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。ELISA，免疫沉淀法等。第8頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三優(yōu)點(diǎn)與問題優(yōu)點(diǎn)：原理明確，操作相對簡單缺點(diǎn)：由于HPV 至今尚不能在體外培養(yǎng)， 且其免疫原性較弱，故血清學(xué)方法檢測靈敏度較低。第9頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三HPV感染的血清學(xué)檢查檢測人體血清中是否存在有針對HPV產(chǎn)生的抗體，通過免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。第10頁，共21頁，2022年

4、，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三優(yōu)點(diǎn)與問題優(yōu)點(diǎn)：原理明確，操作相對簡單缺點(diǎn)：血清學(xué)檢測的對象是抗原和抗體，由于人體對HPV產(chǎn)生免疫應(yīng)答有一定的遲滯性，所以血清學(xué)檢測對無免疫應(yīng)答者和HPV 潛伏期感染者會(huì)產(chǎn)生漏檢。第11頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三HPV基因組檢測PCR類檢測方法Southern雜交法原位雜交雜交捕獲法第12頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三PCR類檢測方法優(yōu)點(diǎn)：該方法靈敏度高，缺點(diǎn)：是容易發(fā)生樣品間的交叉污染，從而導(dǎo)致假陽性率高。另外利用該方法進(jìn)行HPV分型操作比較煩瑣。第13頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星

5、期三Southern雜交法優(yōu)點(diǎn)：該方法靈敏度及特異性均高，適用于HPV 分型、HPV-DNA分子質(zhì)量鑒定、基因組酶切圖譜建立及物理狀態(tài)研究等。缺點(diǎn)：其操作麻煩、耗時(shí)、費(fèi)用高，且必須應(yīng)用新鮮組織標(biāo)本，故不宜大規(guī)模臨床使用。第14頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三原位雜交該法利用HPV 探針與組織中的HPV-DNA 雜交，首先將探針和組織中的雙鏈HPV-DNA 變性為單鏈，然后使探針與組織雜交.優(yōu)點(diǎn)：利于病理學(xué)分析缺點(diǎn)：雜交鏈的穩(wěn)定性不高，在雜交過 程中，部分探針單鏈復(fù)性，使雜交率降低，影響HPV-DNA 的檢出率。第15頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期

6、三雜交捕獲法 雜交捕獲(hybridcapturesystem，HCS) 實(shí)驗(yàn)是美國Digene 公司新發(fā)展的一種檢測HPV DNA 的技術(shù)，其原理是利用對抗體捕獲信號的放大和化學(xué)發(fā)光信號的檢測?；緦?shí)驗(yàn)步驟如下： 1. 樣本DNA 雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈; 2. DNA 單鏈與RNA 探針結(jié)合為RNADNA 雜交體; 3. 特異性抗體將RNADNA 雜交體固定在試管壁或微孔壁上; 4. 結(jié)合有堿性磷酸酶的多個(gè)第二抗體與RNADNA 雜交體結(jié)合,使信號放大; 5. 堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光,判讀光的強(qiáng)弱可確定堿性磷酸酶的含量,從而確定RNADNA 雜交體的含量。第16頁，共21頁，2022

7、年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三雜交捕獲一代（HC-)試驗(yàn)可檢測9 種高危型HPV ,包括16 、18 、31 、33 、35 、45 、51 、52 和56 。所用的反應(yīng)載體是試管；雜交捕獲二代試驗(yàn)(HC)原來的試管法改為96 孔平板法，能同時(shí)檢測13 種高危型HPV (16 、18 、31 、33 、35 、39 、 45 、51 、52 、56 、58 、59 和68) 。第17頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三第18頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三優(yōu)點(diǎn)：其靈敏度和特異性均較好，缺點(diǎn)：存在交叉污染、費(fèi)用昂貴等問題利用該法進(jìn)行HPV 分型需要

8、將HPV 常見基因型逐個(gè)篩選才能最后確定感染的HPV 型別，成本高。第19頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三HPV基因芯片檢測方法敏感性高、特異性強(qiáng)、檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。有研究報(bào)道，HPV 基因芯片的檢測靈敏度是PCR方 法的100 倍。操作簡單：通過1次雜交檢測不僅可以判斷待檢樣品中是否存在HPV 感染，而且可以鑒定出是哪種型別的HPV 感染。針對性強(qiáng)：對樣品中的HPV-DNA 直接進(jìn)行檢測，可以檢出HPV 的潛伏期感染，克服了血清學(xué)及免疫組化檢測法對潛伏感染會(huì)產(chǎn)生漏檢的缺點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)對疾病的早期快速診斷。同時(shí)檢測多種HPV 型別，對多重HPV. 感染的判斷一目了然，克服了其他HPV. 檢測方法難以判斷混合感染或操作煩瑣的缺點(diǎn)。第20頁，共21頁，2022年，5月20日，5點(diǎn)44分，星期三問題成本高，芯片制作和使用需要較多昂貴的儀器，如用于原位合成寡核苷酸的光刻機(jī)器和合成儀，用于合成后點(diǎn)樣的全自動(dòng)點(diǎn)樣儀，用于信號檢測的激光共聚焦掃描儀或熒光顯微鏡等設(shè)備，這些都成為基因芯片檢測成本居