離體蛙心灌流及某些離子

1、離體蛙心灌流及某些離子第1頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五主要內(nèi)容相關(guān)理論知識(shí)實(shí)驗(yàn)部分實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)對(duì)象實(shí)驗(yàn)儀器與藥品實(shí)驗(yàn)步驟結(jié)果分析與討論第2頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五相關(guān)理論知識(shí) 正常的蛙心能按靜脈竇的節(jié)律性自動(dòng)產(chǎn)生興奮，心臟的自動(dòng)節(jié)律性活動(dòng)，需要有一個(gè)合適的理化環(huán)境。 蟾蜍心臟離體后，用任氏液灌流，在一定時(shí)間內(nèi)仍能保持節(jié)律性興奮和收縮活動(dòng)。由于心臟的正?；顒?dòng)還有賴于內(nèi)環(huán)境因素的相對(duì)穩(wěn)定，改變灌流液的成分可引起心臟活動(dòng)的改變。第3頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五相關(guān)理論知識(shí) 心肌細(xì)胞的生理特性表現(xiàn)為：自動(dòng)節(jié)律

2、性、興奮性、傳導(dǎo)性和收縮性。 心肌細(xì)胞外離子濃度的變化和因體內(nèi)生物活性物質(zhì)（如激素）引起的細(xì)胞膜離子通透性的改變，對(duì)心肌細(xì)胞的生物電活動(dòng)和生理特性必然會(huì)產(chǎn)生明顯的影響。第4頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五影響心肌細(xì)胞電生理特性的原因1.心肌的自動(dòng)節(jié)律性（1）最大復(fù)極電位與閾電位的差距（2）4期自動(dòng)除極速度2.心肌的興奮性（1）靜息電位水平：依賴于細(xì)胞外K+濃度（2）Na+通道的性狀相關(guān)理論知識(shí)第5頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五3.心肌的傳導(dǎo)性主要取決于動(dòng)作電位0期除極速度和幅度4.心肌的收縮性依賴于細(xì)胞外鈣離子濃度相關(guān)理論知識(shí)影響心肌細(xì)胞電

3、生理特性的原因第6頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五相關(guān)理論知識(shí)離子對(duì)心臟活動(dòng)的影響鉀離子K+參與心肌細(xì)胞的復(fù)極化和自律細(xì)胞的4期自動(dòng)去極化過程，其改變不僅取決于細(xì)胞內(nèi)外K+濃度梯度，還與細(xì)胞膜對(duì)K+通透性有關(guān)，因此其影響是多方面的第7頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五相關(guān)理論知識(shí)離子對(duì)心臟活動(dòng)的影響鈣離子 Ca2+對(duì)Na+內(nèi)流存在競(jìng)爭(zhēng)抑制作用，稱膜屏障作用，對(duì)靜息電位無影響。 Ca2+o ，可使心肌細(xì)胞的興奮性降低，傳導(dǎo)減慢，收縮力增強(qiáng)。第8頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五相關(guān)理論知識(shí)迷走神經(jīng)和乙酰膽堿 迷走神經(jīng)興奮時(shí)

4、，節(jié)后纖維釋放Ach,激動(dòng)心肌細(xì)胞膜上M型膽堿受體，產(chǎn)生負(fù)性變力、負(fù)性傳導(dǎo)、負(fù)性變時(shí)等效應(yīng)。心交感神經(jīng)與去甲腎上腺素 心交感神經(jīng)節(jié)后纖維釋放的遞質(zhì)是去甲腎上腺素，激動(dòng)心肌細(xì)胞膜上的受體，產(chǎn)生正性變力、正性傳導(dǎo)、正性變時(shí)等效應(yīng)。第9頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。2.用離體蛙心灌流的方法觀察： K+、Ca2+ 酸、堿度 腎上腺素（E） 乙酰膽堿（Ach）對(duì)心臟活動(dòng)的影響第10頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)對(duì)象 蟾蜍第11頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備

5、RM6240生物采集系統(tǒng)張力換能器蛙類手術(shù)器械蛙心插管試管夾縫合線蛙心夾鐵支架滴管實(shí)驗(yàn)藥品任氏液lKCl 3CaC12l：10,000 El：10,000 ACh3乳酸2.5NaHCO3第12頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)步驟一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備 1.破壞腦和脊髓 2.暴露心臟第13頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備1.觀察心臟的解剖結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)步驟（腹面） （背面）第14頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)步驟一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備1.蛙心插管1.1 在主A干下穿一線打一松結(jié)；在左主A

6、下再穿一線結(jié)扎。第15頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)步驟一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備1.蛙心插管1.2 在主動(dòng)脈根部剪一斜口，將插管插入動(dòng)脈圓錐， 在心室收縮時(shí)將插管插入心室，結(jié)扎固定。第16頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五1.用試管夾將蛙心管固定在鐵支架上2.把張力換能器固定鐵支架支臺(tái)上，在心室舒張期將與換能器相連的蛙心夾夾在心尖上。實(shí)驗(yàn)步驟二、連接儀器和裝置第17頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五注意事項(xiàng)1.蛙心插管內(nèi)液面勿過高或過低，每次換液時(shí)，必須用任氏液沖洗3次。2.每次加藥，心搏曲線出現(xiàn)變化后立即將插管內(nèi)

7、液體吸出。3.隨時(shí)滴加任氏液于心臟表面使之保持濕潤。4.換能器頭端應(yīng)向下傾斜以免液體進(jìn)人換能器。5.各種試劑的滴管不要混淆,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第18頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五觀察項(xiàng)目 一、描記正常心搏曲線 曲線幅度 收縮的程度曲線疏密 心率曲線基線 舒張的程度第19頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五二、觀察離子、藥物和酸堿的影響1)更換任氏液為3%氯化鈣溶液12滴，記錄心率和收縮幅度，沖洗（下同）2)滴加12滴1%氯化鉀溶液3)滴加12滴1：10000去甲腎上腺素溶液4)滴加12滴1：10000腎上腺素溶液5)滴加12滴1：10000 乙

8、酰膽堿溶液6)滴加12滴 2.5%碳酸氫鈉溶液7)滴加12滴3%乳酸溶液觀察項(xiàng)目第20頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目收縮強(qiáng)度心率處理前處理后 處理前處理后任氏液2% CaCl21% KCl1：10000 E1：10000 Ach2.5% NaHCO33% 乳酸第21頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五結(jié)果分析與討論1.任氏液：正常對(duì)照2. 3%CaCl2灌流：Ca2+ o Ca2+內(nèi)流Ca2+i興奮-收縮耦聯(lián)收縮力第22頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五結(jié)果分析與討論3. 1%KCl灌流：K+ oAP平臺(tái)

9、期縮短 Ca2+內(nèi)流興奮-收縮耦聯(lián)收縮力第23頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五結(jié)果分析與討論4. 1:10000 E灌流4期 If 、I CaT通道4期自動(dòng)去極速度自律性心率與心肌1受體結(jié)合Ca2+內(nèi)流肌漿網(wǎng)釋放Ca2+興奮-收縮耦聯(lián)收縮力cAMP第24頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五結(jié)果分析與討論5. 1:10000 Ach灌流與心肌M受體結(jié)合K+外流, Ca2+內(nèi)流E-C耦聯(lián)收縮力最大復(fù)極電位 4期K+外流 自律性心率Ca2+i第25頁，共27頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)46分，星期五碳酸氫鈉 乳酸結(jié)果分析與討論6. 2.5NaHCO3 灌流中和H+，Ca2+與肌鈣蛋白結(jié)合，心肌收縮力恢復(fù)。7.