微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌培養(yǎng)、接種醫(yī)學(xué)課件

1、第二次實(shí)驗(yàn)課第二次實(shí)驗(yàn)課內(nèi) 容1.細(xì)菌培養(yǎng)法（錄象）2.基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備（講解示教）3. 細(xì)菌接種法（一份/組）講解4.人體、物品中細(xì)菌檢查（一份/組）講解5.飛沫、空氣中細(xì)菌檢查（一份/桌）講解6.觀察細(xì)菌代謝產(chǎn)物（講解）7. 第一次實(shí)驗(yàn)報(bào)告評(píng)講內(nèi) 容1.細(xì)菌培養(yǎng)法（錄象）基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備去筋膜黃牛肉絞碎500g加入1000ml蒸餾水直接煮沸2小時(shí)調(diào)整酸堿度至pH 7.6過(guò)濾，補(bǔ)足失水重新校正pH一次分裝，高壓滅菌，15磅（121.3）1520分鐘檢菌如無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)（液體透明）即可應(yīng)用脫脂紗布過(guò)濾，按比例加入1蛋白胨、0.5%NaCl，0.1%K2HPO4加熱溶解補(bǔ)足水至1000ml4浸泡過(guò)夜煮

2、沸半小時(shí)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備去筋膜黃牛肉絞碎500g加入1000ml蒸餾人體、物品中細(xì)菌檢查手衣發(fā)錢材料：普通平板 （1份/組）蓋上，標(biāo)記 , 置 37，18-24h后觀察。人體、物品中細(xì)菌檢查手衣發(fā)錢材料：普通平板 （1份/組）蓋上飛沫、空氣中細(xì)菌檢查材料：血平板 （1份/組） 距口1520cm用力咳嗽三次置空氣中（避日光照射）30分鐘飛 沫空 氣蓋上，標(biāo)記 , 置 37，18-24h后觀察。飛沫、空氣中細(xì)菌檢查材料：血平板 （1份/組） 距口152結(jié)果觀察血平板表皮葡萄球菌在血瓊脂平板培養(yǎng)基上形成不溶血的菌落。甲型溶血性鏈球菌形成的溶血現(xiàn)象也稱為甲型溶血現(xiàn)象或草綠色溶血現(xiàn)象，屬于不完全溶血。金

3、黃色葡萄球菌形成的溶血現(xiàn)象也稱為乙型溶血現(xiàn)象，屬于完全溶血。結(jié)果觀察血平板表皮葡萄球菌在血瓊脂平板培養(yǎng)基上形成不溶細(xì)菌培養(yǎng)接種法平板劃線法菌種：混合菌液材料：普通平板用具：接種環(huán)方法：分區(qū)劃線1區(qū)2區(qū)3區(qū)4區(qū)原始區(qū)域細(xì)菌培養(yǎng)接種法平板劃線法菌種：混合菌液1區(qū)2區(qū)3區(qū)4區(qū)半固體培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基 細(xì)菌培養(yǎng)接種法-斜面接種、液體接種、半固體菌種：大腸桿菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液體、半固體培養(yǎng)基用具：接種環(huán)、接種針液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基 細(xì)菌培養(yǎng)接種法-斜面接種、液體結(jié)果觀察普通平板普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，大腸埃希菌形成菌苔和菌落生長(zhǎng)現(xiàn)象。注意：大小、顏色、透明度、凸起度、表面干燥或濕潤(rùn)、

4、光滑或粗糙、邊緣是否整齊及血平板上的溶血情況。結(jié)果觀察普通平板普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，大腸埃希菌形成菌結(jié)果觀察液體培養(yǎng)基結(jié)果觀察液體培養(yǎng)基結(jié)果觀察斜面培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)基上大腸埃希菌形成的菌苔生長(zhǎng)現(xiàn)象菌苔（mossy）指細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖后，在培養(yǎng)基 表面形成的一層培養(yǎng)物結(jié)果觀察斜面培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)基上大腸埃希菌形成的菌苔結(jié)果觀察半固體培養(yǎng)基1、 擴(kuò)散生長(zhǎng)：具有動(dòng)力的細(xì)菌,可見(jiàn)培養(yǎng)物擴(kuò)散和培養(yǎng)基變混濁。即有鞭毛的細(xì)菌：由穿刺線向外擴(kuò)散生長(zhǎng)（羽毛狀或云霧狀）2、原位生長(zhǎng)：沒(méi)有動(dòng)力的細(xì)菌，可見(jiàn)培養(yǎng)物沒(méi)有擴(kuò)散，培養(yǎng)基仍然澄清。即無(wú)鞭毛的細(xì)菌： 沿穿刺線生長(zhǎng) 2 1 1 2結(jié)果觀察半固體培養(yǎng)基1、 擴(kuò)散生長(zhǎng)

5、：具有動(dòng)力的細(xì)菌,可細(xì)菌代謝產(chǎn)物觀察 細(xì)菌的酶不一樣，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力不一樣，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也不一樣。常見(jiàn)：糖發(fā)酵試驗(yàn)吲哚（indol）試驗(yàn)甲基紅（methyl red）實(shí)驗(yàn)VP（Voges-Proskauer）試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用（citrate utilization）試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn) 硫化氫試驗(yàn)細(xì)菌代謝產(chǎn)物觀察 細(xì)菌的酶不一樣，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力不一樣糖發(fā)酵試驗(yàn)不同細(xì)菌分解糖類的能力和代謝產(chǎn)物不同。糖發(fā)酵試驗(yàn)不同細(xì)菌分解糖類的能力和代謝產(chǎn)物不同。 甲基紅（methyl red）實(shí)驗(yàn)M - 甲基紅（methyl red）實(shí)驗(yàn)葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 甲基紅 -葡萄糖丙酮酸 甲基紅 + 甲基

6、紅（methyl red）實(shí)驗(yàn)M - 甲基紅（me吲哚（indol）試驗(yàn)I-吲哚（indol）試驗(yàn)色氨酸吲哚玫瑰吲哚 對(duì)二甲基氨基苯甲醛 吲哚（indol）試驗(yàn)I-吲哚（indol）試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)C -枸櫞酸鹽利用（citrate utilization）試驗(yàn)利用枸櫞酸鹽生長(zhǎng) +不能利用 -枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)C -枸櫞酸鹽利用（citrate uti 硫化氫試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)（醋酸鉛培養(yǎng)基）某些細(xì)菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇鐵鹽（如硫化亞鐵、醋酸鉛等），則形成黑褐色硫化鐵（鉛）沉淀物，而呈黑色為（）。 硫化氫試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)（醋酸鉛培養(yǎng)基） 尿素酶試驗(yàn) 產(chǎn)生氨使培養(yǎng)基變堿，指示劑顯紅色

7、，為陽(yáng)性。如：變形桿菌為陽(yáng)性。 尿素酶試驗(yàn) 產(chǎn)生氨使培養(yǎng)基變堿，指示劑顯紅色，為陽(yáng)性。IMViC試驗(yàn)I - 吲哚（indol）試驗(yàn)M - 甲基紅（methyl red）試驗(yàn)V - VP（Voges-Proskauer）試驗(yàn)C -枸櫞酸鹽利用（citrate utilization）試驗(yàn)IMViC試驗(yàn) I M Vi C試驗(yàn) 大腸埃希菌 + + - - 產(chǎn)氣桿菌 - - + + IMViC試驗(yàn)：是吲哚、甲基紅、V-P以及枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)四者的合稱。常用于腸道桿菌的鑒定。IMViC試驗(yàn)IMViC試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)小結(jié)1、三類培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基用于增菌； 均勻混濁、沉淀、表面生長(zhǎng) 半固體培養(yǎng)基觀察動(dòng)力；保存菌種（6個(gè) 月）；穿刺線，擴(kuò)散生長(zhǎng) 固體培養(yǎng)基分離純化；保存菌種（1個(gè)月） 菌落、菌苔2、IMViC試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)小結(jié)1、三類培養(yǎng)基第三次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容1、熱力對(duì)細(xì)菌和芽胞的殺菌作用2、紫外線的殺菌作用3、常用化學(xué)消毒劑的殺菌作用和抗生素敏感試驗(yàn)4、耐藥性變異；5、細(xì)菌的鞭毛變異；6、高壓滅菌器的使用；7、細(xì)菌的鑒定程序；8、全自動(dòng)微生物分析儀