生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件

1、生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一 熒光法測(cè)定藥物中核黃素含量生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私鉄晒夥y(cè)定藥物中VB2的原理；學(xué)會(huì)熒光儀的使用。一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私鉄晒夥y(cè)定藥物中VB2的原理；二 實(shí)驗(yàn)原理核黃素（Vit B2）在pH49的條件下，用450nm波長(zhǎng)的光激發(fā)，可發(fā)出波長(zhǎng)為520nm的熒光。在核黃素的含量為0.110g范圍內(nèi)，熒光的強(qiáng)度，與核黃素濃度成正比，硫代硫酸鈉可消除核黃素的熒光性。二 實(shí)驗(yàn)原理核黃素（Vit B2）在pH49的條件下，三 試劑、材料和儀器1試劑與材料1.0g/ml標(biāo)準(zhǔn)核黃素溶液： 精稱5mg標(biāo)準(zhǔn)核黃素, 用蒸餾水定容至100ml, 再?gòu)闹腥?ml定容至100ml。

2、三 試劑、材料和儀器1試劑與材料含核黃素0.011g/ml樣品液（VB2）： 精稱2mg左右的 VB2藥片，用蒸餾水 定容至100ml, 從中取5ml再定容至100ml。 5g/ml熒光紅溶液：稱500g熒光紅，定容至100ml。熒光消光劑：0.2g硫代硫酸鈉, 加水溶解至10ml。0.1mol/L HCI：量取0.94ml濃鹽酸, 用水稀釋至100ml。精密pH5.0試紙。含核黃素0.011g/ml樣品液（VB2）：2儀器（1）RF-540熒光光度計(jì)：1臺(tái)。（2）1ml微量進(jìn)樣器：1個(gè) （槍頭若干）； （3）容量瓶：100ml6個(gè)； 10ml4個(gè)；（4）感量1/10000g電子天平：1臺(tái)；2

3、儀器四 操作步驟1掃描激發(fā)波長(zhǎng)EX在樣品室內(nèi)放入熒光紅溶液，首先調(diào)整熒光發(fā)射波長(zhǎng)到520nm，然后對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，譜圖峰值處即為熒光激發(fā)波長(zhǎng)EX。2掃描發(fā)射波長(zhǎng)EM將EX固定，再對(duì)發(fā)射波長(zhǎng)EM進(jìn)行掃描，譜圖峰值處即為熒光發(fā)射波長(zhǎng)EM。四 操作步驟1掃描激發(fā)波長(zhǎng)EX3 標(biāo)準(zhǔn)核黃素?zé)晒鈴?qiáng)度的測(cè)定 吸取樣品液10ml于25ml比色管中，加入標(biāo)準(zhǔn)核黃素溶液1ml，用0.1mol/L鹽酸調(diào)至pH5.0，測(cè)定熒光強(qiáng)度A。4樣品熒光強(qiáng)度的測(cè)定 吸取10ml樣品液于2支25ml比色管中，分別加入1ml蒸餾水和1ml消光劑溶液。用0.1mol/L鹽酸調(diào)至pH5.0，于熒光光度計(jì)中測(cè)定各自的熒光強(qiáng)度。加水者為

4、B，加消光劑者為C。3 標(biāo)準(zhǔn)核黃素?zé)晒鈴?qiáng)度的測(cè)定五計(jì)算五計(jì)算六注意事項(xiàng)1.開(kāi)機(jī)后，扳動(dòng)氙燈開(kāi)關(guān)到“ON”處數(shù)秒后，待燈亮后松手；2.核黃素對(duì)光敏感，樣品配制應(yīng)再暗處進(jìn)行；3.核黃素可被低亞硫酸鈉還原成無(wú)熒光型，但搖動(dòng)后很快就被空氣氧化成有熒光物質(zhì)，所以要立即測(cè)定。六注意事項(xiàng)1.開(kāi)機(jī)后，扳動(dòng)氙燈開(kāi)關(guān)到“ON”處數(shù)秒后，待燈七思考題1熒光法測(cè)定VB2含量的基本原理。2熒光法測(cè)定VB2時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？七思考題1熒光法測(cè)定VB2含量的基本原理。實(shí)驗(yàn)二 味精成品純度的測(cè)定生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握旋光法測(cè)定味精成品純度的測(cè)定方法；2. 了解旋光法測(cè)定味精成品純度的基本原理。一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

5、1. 掌握旋光法測(cè)定味精成品純度的測(cè)定方法；二原理食用味精為L(zhǎng)谷氨酸單鈉鹽。L谷氨酸分子中具有不對(duì)稱碳原子，故有旋光性。在水溶液中比旋光度為aD20=+12.1在2N鹽酸溶液中為+32。L谷氨酸在鹽酸溶液中的比旋光度在一定鹽酸濃度范圍內(nèi)隨酸度增加而增加。在測(cè)定味精純度時(shí)加入鹽酸使其濃度為2N，此時(shí)谷氨酸鈉以谷氨酸的形式存在。二原理食用味精為L(zhǎng)谷氨酸單鈉鹽。L谷氨酸分子中具有不對(duì)在一定的溫度下測(cè)定其比旋光度，并與該溫度下純L谷氨酸的比旋光度比較，即可求得味精中谷氨酸鈉的百分含量，即味精純度。結(jié)晶味精其純度可達(dá)99%以上。在一定的溫度下測(cè)定其比旋光度，并與該溫度下純L谷氨酸的比旋三儀器與試劑WZZ

6、-2B自動(dòng)旋光儀；99%紅梅味素、80%味精、次品味素；6N HCl；1dm或2dm長(zhǎng)旋光管。三儀器與試劑WZZ-2B自動(dòng)旋光儀；四測(cè)定步驟準(zhǔn)確稱取味精樣品10.00g，加2025ml蒸餾水,攪拌下加入6N鹽酸32ml,使其全部溶解，冷卻至室溫，用蒸餾水定容至100ml。旋光計(jì)零點(diǎn)校正：有三種校正法，一種為蒸餾水調(diào)零法，即將蒸餾水裝入旋光管于旋光儀中調(diào)零；一種為空白溶液校正法，即取32毫升6N HCl置入100ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，于旋光儀中調(diào)零；另一種為空氣法，即不用溶液和旋光管，空著儀器調(diào)零。四測(cè)定步驟準(zhǔn)確稱取味精樣品10.00g，加2025ml蒸用少量樣品溶液洗滌旋光管三次，

7、然后注滿一管，將玻璃蓋片從管的側(cè)面水平地推進(jìn)蓋好，適當(dāng)擰緊螺絲蓋，用干布擦干蓋片。打開(kāi)旋光儀光源，穩(wěn)定后校正零點(diǎn)。放入裝好樣品的旋光管，記錄旋光儀的讀數(shù)，并記錄測(cè)定時(shí)的溫度。用少量樣品溶液洗滌旋光管三次，然后注滿一管，將玻璃蓋片從管的五計(jì)算當(dāng)溫度為t時(shí)旋光物質(zhì)的比旋光度為：式中：a測(cè)得旋光度； L旋光管長(zhǎng)度（dm）； C100ml樣品溶液中含旋光物質(zhì)的克數(shù)。五計(jì)算當(dāng)溫度為t時(shí)旋光物質(zhì)的比旋光度為：因測(cè)定時(shí)溶液中是L谷氨酸，故需將味精樣品的重量W換算成L谷氨酸的重量C：式中：147.13L谷氨酸的分子量；18713味精的分子量(含1分子結(jié)晶水的L谷氨酸單鈉鹽)。 因測(cè)定時(shí)溶液中是L谷氨酸，故需將

8、味精樣品的重量W換算成L純L谷氨酸20時(shí)比旋光度為+32，校正為t時(shí)比旋光度為：純L谷氨酸20時(shí)比旋光度為+32，校正為t時(shí)比旋光度式中：a測(cè)得的旋光度； t測(cè)量時(shí)溫度（）； L旋光管長(zhǎng)度（dm）； W味精樣品重量（g）。 生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件六思考題1配制樣品時(shí)為何要加32ml 6N NCl？2旋光法測(cè)定樣品的純度，零點(diǎn)校正的方法有幾種？怎樣校正？六思考題1配制樣品時(shí)為何要加32ml 6N NCl？實(shí)驗(yàn)三 電位滴定法測(cè)定總酸測(cè)定 (設(shè)計(jì)性)生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)會(huì)用酸度計(jì)測(cè)pH值和總酸度；任選兩種方法或兩種樣品做實(shí)驗(yàn)；進(jìn)一步熟悉滴定操作；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，從實(shí)驗(yàn)中總結(jié)出3個(gè)問(wèn)題進(jìn)行討

9、論。 一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)會(huì)用酸度計(jì)測(cè)pH值和總酸度； 二. 實(shí)驗(yàn)原理采用酸堿中和容量分析法。pH9.0為中和反應(yīng)時(shí)酚酞指示劑發(fā)生顏色突變時(shí)的pH值。電位滴定法控制pH終點(diǎn)，消除了目視比色法對(duì)有色試樣的感官誤差，有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。 二. 實(shí)驗(yàn)原理采用酸堿中和容量分析法。pH9.0為中和反應(yīng) 三. 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑pHS-3型酸度計(jì)；磁力攪拌器；0.1N標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液；20、50ml移液管；100ml燒杯；除CO2蒸餾水的制備：將蒸餾水煮沸15min后，冷卻至室溫。樣品隨意在市場(chǎng)采購(gòu)。 三. 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑pHS-3型酸度計(jì)；四.酸度計(jì)的校正與定位四.酸度計(jì)的校正與定位把選擇開(kāi)關(guān)鈕調(diào)到pH

10、檔；調(diào)節(jié)溫度補(bǔ)償旋鈕，使旋鈕白線對(duì)準(zhǔn)溶液溫度值；把斜率調(diào)節(jié)旋鈕順時(shí)針旋到底；把清洗過(guò)的電極插入pH=6.86的緩沖溶液中；調(diào)解定位調(diào)節(jié)旋鈕，使儀器顯示讀數(shù)與該緩沖溶液當(dāng)時(shí)溫度下的pH值相一致；用蒸餾水清洗電極，再插入pH9.18的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，調(diào)節(jié)斜率旋鈕使儀器顯示讀數(shù)與該緩沖溶液中當(dāng)時(shí)溫度下的pH值一致；重復(fù)以上操作2-3次。把選擇開(kāi)關(guān)鈕調(diào)到pH檔； 測(cè)定乳酸菌飲料總酸度生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一.測(cè)定步驟吸取20ml乳酸菌飲料于100ml燒杯中，加入40ml蒸餾水（除CO2），放入一攪拌指，置于磁力攪拌器上，將玻璃電極和甘汞電極插入試樣中，開(kāi)動(dòng)攪拌器，按下酸度計(jì)讀數(shù)開(kāi)關(guān)，用0.1N標(biāo)準(zhǔn)NaO

11、H滴定試樣，隨時(shí)觀察試樣pH值變化，到接近pH9.0時(shí)應(yīng)每加半滴停一停，直至pH9.0時(shí)為滴定終點(diǎn)。記錄消耗0.1 N標(biāo)準(zhǔn) NaOH的毫升數(shù)。一.測(cè)定步驟吸取20ml乳酸菌飲料于100ml燒杯中，加入4二. 計(jì)算式中： T100ml樣品所需0.1 N NaOH溶液的毫升數(shù)；V滴定試樣時(shí)消耗0.1 N 標(biāo)準(zhǔn)NaOH的毫升數(shù)。注：酸度（QB）：2580T二. 計(jì)算 啤酒總酸度的測(cè)定 生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一.測(cè)定步驟吸取50ml除氣啤酒于100ml燒杯中，放入一攪拌指，置于磁力攪拌器上，將玻璃電極和甘汞電極插入試樣中，開(kāi)動(dòng)攪拌器，按下酸度計(jì)讀數(shù)開(kāi)關(guān)，用0.1N標(biāo)準(zhǔn)NaOH滴定試樣，隨時(shí)觀察試樣pH值

12、變化，到接近pH9.0時(shí)應(yīng)每加半滴停一停，直至pH9.0時(shí)為滴定終點(diǎn)。記錄消耗0.1 N標(biāo)準(zhǔn) NaOH的毫升數(shù)。一.測(cè)定步驟吸取50ml除氣啤酒于100ml燒杯中，放入一攪二.計(jì)算式中：N、V標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液的當(dāng)量濃度與消耗體積（ml）;50吸取酒樣體積（ml）;100換算成100ml酒樣中酸量。二.計(jì)算 白酒中總酸含量的測(cè)定生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一.測(cè)定步驟吸取50ml白酒于250ml三角瓶中，加100ml蒸餾水（除CO2），2滴0.5%酚酞指示劑，用0.1N標(biāo)準(zhǔn)NaOH滴定試樣至微紅色，記錄消耗0.1 N標(biāo)準(zhǔn) NaOH的毫升數(shù)。一.測(cè)定步驟吸取50ml白酒于250ml三角瓶中，加100m二.

13、計(jì)算式中：N、V標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液的當(dāng)量濃度與消耗體積（ml）;50吸取酒樣體積（ml）;100換算成100ml酒樣中酸量；0.06006乙酸的毫克當(dāng)量（g）.二.計(jì)算實(shí)驗(yàn)四 紫外分光光度法測(cè)定 樣品中蛋白質(zhì)含量 生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諛悠分械鞍踪|(zhì)提取的基本方法；學(xué)會(huì)紫外分光光度計(jì)的使用。 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諛悠分械鞍踪|(zhì)提取的基本方法；二. 實(shí)驗(yàn)原理 蛋白質(zhì)及其降解產(chǎn)物（胨、肽和氨基酸）的芳 R 香環(huán)殘基NHCHCO在紫外區(qū)內(nèi)對(duì)一定波長(zhǎng)的光具有選擇吸收作用。在此波長(zhǎng)（280nm）下，光吸收程度與蛋白質(zhì)濃度（38mg/ml）成線性關(guān)系,故可做定量測(cè)定。核苷酸分子中的堿基含有共軛雙鍵，在

14、紫外光區(qū)（260nm）也有吸收，可通過(guò)校正加以清除。本法操作簡(jiǎn)便迅速，故常用于生化領(lǐng)域研究工作中。二. 實(shí)驗(yàn)原理 三. 儀器與試劑1UV755B-分光光度計(jì)；三. 儀器與試劑1UV755B-分光光度計(jì)；20.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液0.1M磷酸氫二鈉溶液：稱取Na2HPO4.12H2O 8.995g定容至250ml。0.1M磷酸二氫鈉溶液：稱取NaH2PO4.2H2O 3.90g定容至250ml。量取0.1M磷酸氫二鈉溶液244ml和0.1M磷酸二氫鈉溶液156ml混合均勻。3打漿機(jī)；4高速離心機(jī)。20.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液四.UV755B-分光光度計(jì)的使用開(kāi)機(jī)，儀器顯

15、示F755B，開(kāi)蓋, 預(yù)熱520min；調(diào)整測(cè)定波長(zhǎng)；將參比試樣(空白)裝入比色皿，放入比色槽后，調(diào)零；調(diào)零時(shí)開(kāi)蓋，按“MODE”鍵，使儀器顯示“T 0.0”, 按“0%”鍵；然后閉蓋，按“100%”鍵，使儀器顯示“T100”， 反復(fù)調(diào)節(jié)數(shù)次，使之穩(wěn)定；放入待測(cè)樣，按“MODE”鍵，儀器顯示“A”，讀數(shù)記錄；再按“MODE”鍵，儀器顯示“T”后，開(kāi)蓋；測(cè)定完畢后關(guān)機(jī)。 四.UV755B-分光光度計(jì)的使用開(kāi)機(jī)，儀器顯示F755B，五. 操作步驟1樣品處理準(zhǔn)確稱取約10g左右的大豆，洗凈，用蒸餾水浸泡，加0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液至100ml打漿，過(guò)濾，然后用0.1mol/L pH7.

16、0磷酸緩沖液將漿液定容至250ml。4000r/min離心15min，上清液即為蛋白質(zhì)提取液。五. 操作步驟1樣品處理2樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定取適量的樣品提取液，根據(jù)蛋白質(zhì)濃度，用0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液適當(dāng)稀釋（取1ml提取液定容至50ml）后，用紫外分光光度計(jì)，10mm厚的石英比色皿分別在280nm和260nm波長(zhǎng)下讀取吸光值，以0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液為空白調(diào)零。2樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定六結(jié)果計(jì)算式中：A280蛋白質(zhì)溶液在280nm處的吸光值：A260蛋白質(zhì)溶液在260nm處的吸光值；1.45和0.74校正值；n稀釋倍數(shù)；W樣品重（mg）。六結(jié)果計(jì)算七.思考題

17、1.石英比色皿與玻璃比色皿的區(qū)別？2.使用高速離心機(jī)應(yīng)注意的事項(xiàng)。七.思考題1.石英比色皿與玻璃比色皿的區(qū)別？實(shí)驗(yàn)五 氣相色譜法分離分析酒中雜醇油生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解氣相色譜儀及色譜工作站的使用；. 了解氣相色譜儀的基本分析原理。一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解氣相色譜儀及色譜工作站的使用；二. 實(shí)驗(yàn)原理氣相色譜分析是采用氣體作為流動(dòng)相的一種層析方法。由于流動(dòng)相為氣體，物質(zhì)在氣相中傳遞速度快，氣態(tài)樣品中各組分與固定相相互作用（吸附或分配）次數(shù)多，因而混合物通過(guò)氣相色譜可以得到良好的分離，再通過(guò)適當(dāng)?shù)臋z測(cè)儀器進(jìn)行鑒定，即可給出定性或定量的結(jié)果。二. 實(shí)驗(yàn)原理氣相色譜分析是采用氣體作為

18、流動(dòng)相的一種層析方法酒除了乙醇和水外，還含有數(shù)百種微量香味成分。酒中的香味成分以醇類、酯類、酸類為主。酒中的醇類除乙醇外，還含有甲醇、正丙醇、異丁醇、正丁醇、2-戊醇、異戊醇、正戊醇、正己醇等。用常規(guī)的化學(xué)分析方法測(cè)出的是這類物質(zhì)的總量，如雜醇油是以異丁醇和異戊醇計(jì)，這樣不足以反映各種成分的本來(lái)面目。利用氣相色譜儀可以準(zhǔn)確迅速地檢測(cè)出酒中所含的各種醇類物質(zhì)。酒除了乙醇和水外，還含有數(shù)百種微量香味成分。酒中的香味成分以三儀器GC122氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測(cè)器。微量注射器10ul。三儀器GC122氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測(cè)器。微量注四色譜操作條件色譜柱：FFAP毛細(xì)管柱。柱溫：40

19、恒溫6min后，以4/min程序升溫至220，繼續(xù)恒溫16min；汽化室溫度：230；檢測(cè)器溫度：240。載氣：高純氮，柱頭壓：20psi；柱流量：1.36ml/min；尾吹氣：39ml/min；空氣：400ml/min；氫氣：30ml/min；進(jìn)樣量：0.4ul。四色譜操作條件色譜柱：FFAP毛細(xì)管柱。五定性方法標(biāo)準(zhǔn)物保留時(shí)間的確定 分別取甲醇、正丙醇、正丁醇、異丁醇、異戊醇各0.2ul（試劑都用色譜純?cè)噭┳⑷肷V儀，調(diào)節(jié)衰減控制器，使信號(hào)在量程范圍內(nèi)，分別記錄各物質(zhì)的保留時(shí)間。樣品中各組分保留時(shí)間的測(cè)定 將樣品溶液注入色譜儀，測(cè)定各色譜峰的保留時(shí)間，與標(biāo)準(zhǔn)物保留時(shí)間對(duì)照初步定性。五定性方

20、法標(biāo)準(zhǔn)物保留時(shí)間的確定六思考題什么叫程序升溫？程序升溫的目的？雜醇油的概念。六思考題什么叫程序升溫？程序升溫的目的？實(shí)驗(yàn)六 高效液相色譜法分離分析葡萄酒中的有機(jī)酸生物產(chǎn)品分析實(shí)驗(yàn)課件一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私飧咝б合嗌V儀分離分析有機(jī)酸的基本原理；學(xué)會(huì)恒流洗脫的基本方法。一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私飧咝б合嗌V儀分離分析有機(jī)酸的基本原理；二. 實(shí)驗(yàn)原理利用混合物中各組分的化學(xué)、物理性質(zhì)差異，使各組分以不同程度分布在兩相中。當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)含有樣品的固定相時(shí)，各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到互相分離的目的。二. 實(shí)驗(yàn)原理利用混合物中各組分的化學(xué)、物理性質(zhì)差異，使各三. 試劑色譜純甲醇，超聲波除氣；0.01 mol/L磷酸二氫鉀；20%磷酸溶液；pH值為4.9的0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液（用20%磷酸調(diào)節(jié)），經(jīng)孔徑為0.45m濾膜過(guò)濾，超聲波除氣；三. 試劑色譜純甲醇，超聲波除氣；酒石酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、琥珀酸，分析純，經(jīng)孔徑為0.45m濾膜過(guò)濾，超聲波除氣。葡萄酒樣品經(jīng)0.