實(shí)驗(yàn)一分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡介

1、實(shí)驗(yàn)一分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)施簡介一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖炝?xí)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器并嫻熟使用二、實(shí)驗(yàn)原理、恒溫氣浴搖床：用于對溫度和振蕩頻次有較高要求的細(xì)菌培育，發(fā)酵，雜交，生化反響及酶和組織研究等。、超凈工作臺：用于分子生物學(xué)無菌操作。、低溫臺式高速離心計(jì)：用于分別純化DNA和蛋白質(zhì)等，如基因片段的分別，蛋白酶的積淀和回收等。、微量移液管：是連續(xù)可調(diào)的，計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。有多種規(guī)格：0.5-10L10-100L20-200L100-1000L。、電泳儀：用于確立大分子物質(zhì)的分子量以及判斷物種親緣關(guān)系的儀器。6、PCR儀：用于目的基因的擴(kuò)增，是一對寡糖核苷酸引物聯(lián)合到

2、正負(fù)DNA鏈上的靶序列雙側(cè)，進(jìn)而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段。主要用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等領(lǐng)域。、滅菌鍋：用于細(xì)菌和細(xì)胞培育及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)使用的試劑，器皿及實(shí)驗(yàn)器具的嚴(yán)格滅菌。三、實(shí)驗(yàn)儀器恒溫氣浴搖床、超凈工作臺、低溫臺式高速離心計(jì)、微量移液管、滅菌鍋、PCR儀、電泳儀。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）、恒溫氣浴要穿的使用：1、樣品瓶堅(jiān)固放入彈簧夾中2、接通電源開關(guān)，儀器進(jìn)入準(zhǔn)備狀態(tài)3、參數(shù)設(shè)定，（設(shè)定溫度、時間、轉(zhuǎn)速等參數(shù)）4、按啟動鍵儀器開始工作，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉(zhuǎn)；、按電源鍵，顯示屏顯示消逝，封閉電源總開關(guān)（二）、超凈工作臺的使用1、使用工作臺時，先經(jīng)過潔凈液浸泡的紗布擦抹臺面，此

3、后用消毒劑擦抹消毒。2、接通電源，提早30分鐘翻開紫外燈照耀消毒，辦理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺表面積累的微生物，15分鐘后，封閉紫外燈，開啟送風(fēng)機(jī)。、工作臺面上，不要寄存不用要的物件，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受攪亂。4、操作結(jié)束后，清理工作臺面，采集各荒棄物，封閉風(fēng)機(jī)及照明開關(guān)，用潔凈劑及消毒劑擦抹消毒。5、最后開啟工作臺紫外燈，照耀消毒30分鐘后，封閉紫外燈，切斷電源。（三）、低溫臺式高速離心計(jì)的使用1、把離心計(jì)擱置于平面桌或平面臺上，目測使之均衡，用手輕搖一下離心計(jì)，檢查離心計(jì)能否擱置均衡。2、翻開門蓋，將離心管放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，離心管必然成偶數(shù)對稱放入，且要起初均衡，完成用手輕輕旋轉(zhuǎn)一下轉(zhuǎn)子體，使

4、離心管架運(yùn)行靈巧。3、關(guān)上門蓋，注意必然要使門蓋鎖緊，完成用手檢查門蓋能否關(guān)緊。4、插上電源插座，按下電源開關(guān)（電源開關(guān)在離心計(jì)反面，電源座上方）。5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間：在停止?fàn)顟B(tài)下時，用戶可以設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間，此時離心計(jì)處于設(shè)置狀態(tài)，停止燈亮、運(yùn)行燈閃耀；按下啟動離心開始（常用，最高轉(zhuǎn)速為13000r/min，時間最長為20分鐘）；注意：對應(yīng)的轉(zhuǎn)子必然要設(shè)置在相應(yīng)的轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，不可以超速使用，不然對試管或轉(zhuǎn)子有破壞。6、離心計(jì)時間倒計(jì)時到“0”時，離心計(jì)將自動停止，當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，翻開門蓋拿出離心管，關(guān)斷電源開關(guān)。（四）、微量移液管的使用1將微量移液器裝上吸頭（不一樣樣規(guī)格的移液器

5、用不一樣樣的吸頭）2將微量移液器按鈕輕輕壓至第一停點(diǎn)；3垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液樣面下幾毫米，千萬不要將吸嘴直接插到液體底部；4遲緩、安穩(wěn)地松開控制按鈕，吸上樣液。不然液體進(jìn)入吸嘴太快，致使液體倒吸入移液器內(nèi)部，或吸入體積減少；5等一秒鐘后將吸嘴提離液面6安穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點(diǎn)，再把按鈕壓至第二停點(diǎn)以排出節(jié)余液體；7提起微量移液器，此后按吸嘴彈射器除掉吸嘴。（五）、PCR的使用1、開機(jī)：翻開開關(guān)，視窗上顯示“SELFTEST”。2、放入樣品管，關(guān)緊蓋子。3、假如要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按Proceed，用箭頭鍵選擇已積蓄的程序，按Proceed，則開始履行程序。4、假如要輸入新的

6、程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTERPROGRAM,按Proceed，1）命名新的程序，最多8個字母，輸入后按Proceed確認(rèn)(怎樣輸入字母、數(shù)字)。2）輸入程序步驟：名字輸入后，確認(rèn)，此后輸入有關(guān)程序5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運(yùn)行。6、其余：用pause可以暫停一個運(yùn)行的程序，再按一次連續(xù)程序。用stop或Cancel可停止運(yùn)行的程序。（六）、電泳儀的使用1第一用導(dǎo)線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。2按電源開關(guān)，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀”等字樣后，同時系統(tǒng)初始化，蜂鳴4聲，設(shè)

7、置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，依據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。3確認(rèn)各參數(shù)無誤后，按“啟動”鍵，啟動電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start!并蜂鳴4聲，提示操作者電泳儀將輸出高電壓，注意安全。今后漸漸將輸出電壓加至設(shè)置值。同時在狀態(tài)欄中顯示“Run”，并有兩個不停閃耀的高壓符號，表示端口已有電壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實(shí)質(zhì)的工作時間（精準(zhǔn)到秒）4電泳結(jié)束，儀器顯示：“END”，并連續(xù)蜂鳴提示。此時按任一鍵可止鳴（七）、高壓滅菌鍋1、開蓋：轉(zhuǎn)著手輪，使鍋蓋走開密封圈，增添蒸餾水剛沒至板上2、通電：將控制面板上電源開關(guān)按至ON處，若水位低（LOW）紅燈亮3、堆放物件：需包扎

8、的滅菌物件，體積不超出200mm100mm100mm為宜，各包裝之間留有空隙，堆放在金屬框內(nèi)，這樣有益于蒸汽的穿透，提升滅菌見效，滅菌時間：121，20min，；如為液體，液體必然裝在可耐高溫的玻璃器皿中，且不可以裝滿，2/3即可，121，18-20min4、密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，使鍋蓋下壓，充分壓緊5、設(shè)準(zhǔn)時間和溫度，開始滅菌6、滅菌結(jié)束，全部東西放入干燥箱干燥，排盡水氣五、思慮題1、列出分子生物學(xué)常用儀器的名稱，用途及操作時的注意事項(xiàng)。答：恒溫氣浴搖床：常用于液體搖勻以培育微生物、細(xì)菌和細(xì)胞等。注意要依據(jù)不一樣樣的用途設(shè)置不一樣樣的參數(shù)。超凈工作臺：常用于為微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)供給

9、無菌操作環(huán)境。注意操作時關(guān)掉紫外燈，防備給人類帶來損害。低溫臺式高速離心計(jì)：常用于分別純化蛋白、病毒、細(xì)胞等。使用時不可以隨意挪動離心計(jì)或翻開蓋子；離心計(jì)運(yùn)行時要處于鎖定狀態(tài)；離心管的擱置要處于均衡狀態(tài)。微量移液管：用于計(jì)量和轉(zhuǎn)移微量液體的專用儀器。操作時注意防備槍頭的污染；調(diào)理刻度時不宜超出最大批程；使用完后將刻度調(diào)到最大珍藏。電泳儀：可對不一樣樣物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，或?qū)⒈厝换煜镞M(jìn)行組分分析或單個組分的提取制備。操作時不可以把導(dǎo)線極性接反；當(dāng)電泳儀進(jìn)入工作狀態(tài)后，防備人體與其各部分的接觸，不一樣樣介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀進(jìn)步行；若使用時出現(xiàn)異樣，要馬上切斷電源。PCR儀：用

10、于擴(kuò)增DNA片斷。操作時應(yīng)注意蓋子要蓋緊，按正確步驟進(jìn)行。高壓高溫滅菌鍋：用于殺菌消毒。使用時應(yīng)嚴(yán)格依據(jù)規(guī)程操作，防備發(fā)生安全事故。實(shí)驗(yàn)二瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測一.二.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;2、學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的操作。實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，開水中溶解，45開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。DNA分子在堿性環(huán)境中帶負(fù)電荷，在外加電場作用下向正極泳動。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。不一樣樣DNA，其分子量大小及構(gòu)型不一樣樣，電泳時的泳動率就不一樣樣，進(jìn)而分出不一樣樣的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分別DNA，主假

11、如利用分子篩效應(yīng)，遷徙速度與分子量的對數(shù)值成反比關(guān)系。溴化乙錠（EB）未扁平狀分子，在紫外照耀下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復(fù)合物，其發(fā)射的熒光強(qiáng)度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強(qiáng)度大10倍以上，且熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。三、儀器和試劑儀器：微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐試劑：瓊脂糖：1.0%；電泳緩沖液（50TAE電泳緩沖液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/LEDTA(pH8.0)20ml，加蒸餾水至100ml）EB：5l/100mlTBE電泳資料：標(biāo)準(zhǔn)分子量核酸（DL2000）四.操作步驟（1）制膠（以20mL為例）a.b.c.d.稱取0.2g瓊脂糖

12、，加入20ml的1XTAE緩沖液（pH8.0），搖勻；微波爐加熱，至瓊脂糖完滿溶解（要防備過熱溢出三角瓶）；將制膠板放入制膠槽中，插入適合的梳子，將溶解的瓊脂糖（約50）加入2ulEB后，混平均，倒入此中，直至厚度為46mm（若有氣泡要把氣泡趕出），在室溫下冷卻凝結(jié)(約3045min)；當(dāng)心垂直向上拔出梳子,以保證點(diǎn)樣孔圓滿,將膠板置于電泳槽中。（2）點(diǎn)樣用微量移液器將5l含藍(lán)色染液的DL2000加入點(diǎn)樣孔下部。（3）電泳翻開電源開關(guān)，調(diào)理電壓至35V/cm(約100V)，可見到溴酚藍(lán)條帶由負(fù)極向正極挪動，約30-40分鐘后即可察看結(jié)果。4）察看將電泳好的膠置于紫外透射檢測儀上，翻開紫外燈，可見到橙紅色核酸條帶，依據(jù)條帶粗細(xì)，可大體預(yù)計(jì)該樣品DNA的濃度。憂如時有已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)DNA進(jìn)行電泳，則可經(jīng)過線性DNA條帶的相對地點(diǎn)初步預(yù)計(jì)樣品的分子量。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果點(diǎn)樣時見效較好的照片點(diǎn)出的白色熒光芒比較亮，條帶粗細(xì)平