腹腔巨噬細胞吞噬功能檢測方法

1、在機體的免疫過程中，巨噬細胞（MF）承擔著噬菌、殺菌、清除機體內被損 傷和衰老的細胞，以及傳遞抗原信息；MF將捕獲的抗原進行加工處理后，把降 解的抗原信息傳遞給T、B淋巴細胞。MF又是天然殺傷細胞（NK細胞）的激活 劑，且對B淋巴細胞的激活、增殖和分化具有調節(jié)作用。實驗目的掌握巨噬細 胞（MF）體外吞噬異物能力的測定方法，觀察機體的非特異性免疫現(xiàn)象。實驗原 理巨在機體的免疫過程中，巨噬細胞（MF）承擔著噬菌、殺菌、清除機體內被損 傷和衰老的細胞，以及傳遞抗原信息；MF將捕獲的抗原進行加工處理后，把降 解的抗原信息傳遞給T、b淋巴細胞。MF又是天然殺傷細胞（NK細胞）的激活 劑，且對B淋巴細胞的

2、激活、增殖和分化具有調節(jié)作用。實驗目的掌握巨噬細胞（MF）體外吞噬異物能力的測定方法，觀察機體的非特異性免 疫現(xiàn)象。實驗原理巨噬細胞（MF）在機體的非特異性免疫中具有重要作用，其吞噬異物的能力 在一定程度上反映了機體免疫水平的高低。本實驗采用測定小鼠腹腔MF吞噬雞紅細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，來評價免疫抑制劑環(huán)磷酰胺（CYP對機體免疫狀態(tài)的抑制作用。實驗用品一、材料小白鼠 610 只，隨機分為二組。5%雞紅細胞懸液：用已滅菌的注射器，自健康雞的翼下靜脈采血1ml，放置于5倍體積的Alsevers溶液中。4C條件下可保存一周。使用時用滅菌的生理鹽水洗滌3遍（2000r/min，每次5min）,然

3、后用生理鹽水配成 5%的濃度。、試劑Alsevers 溶液葡萄糖2.05g檸檬酸三鈉(Na3C6H5O72H2O)0.89g氯化鈉0.42g溶解后加蒸餾水至100ml，用檸檬酸(C6H8O7H2O)調pH至7.2，超濾除菌或6.6 104Pa(磅)滅菌20min，保存4 C冰箱備用。Hank 液s(1)貯存液(藥品全部用AR試劑)，甲液:NaCI80g,MgSO4 - 7H2O 1g,MgCI2 - 6H2用雙蒸餾水定容至 450mlCaCl21.4g 雙蒸餾水定容至 50ml。將 、 液混合，加氯仿 1ml。乙液 :Na2HPO4l2H2O1.52g， KH2PO40.6g,酚紅0.2g,葡

4、萄糖l0g,用雙蒸餾水定容至500ml,加氯仿Iml。(2)應用液:貯存液甲 :貯存液乙 :雙蒸餾水 =1:1:18。6.6 104Pa磅)滅菌20min。4C保存可使用1個月。臨用前，用3.5%的 NaHCO3調 pH 至7.2。3.0.9%生理鹽水 (滅菌)Giemsa 染液貯存液 :稱取Giemsa粉0.5g研細，再將33ml甘油逐滴加入，繼續(xù)研磨至無顆粒。80C水浴過夜, 然后加入33ml甲醇。置棕色瓶中，于56C放置24h后即可使用。應用液:臨用時取貯存液 lml 加 l0ml pH7.4 磷酸緩沖液，混勻后過濾。甲醇肝素鈉溶液 :用滅菌生理鹽水配制。每 20IU0.1ml 可抗凝

5、1ml 全血。7.0.6%環(huán)磷酰胺溶液 : 用滅菌生理鹽水配制。三、設備 保溫箱、顯微鏡、帶蓋解剖盤 .醫(yī)用剪刀、鑷子、刻度離心管及試管架、載 玻片、滴管、酒精及碘酒棉球、擦鏡紙、稱量紙及濾紙。實驗方法 實驗前二天，給實驗組小鼠腹腔注射0.6%的環(huán)磷酰胺 （0.2ml/只）對照組小鼠注射滅菌生理鹽水 J每只小鼠注射pH7.2 的 Hank液 2m1（腹腔注射時進針切忌過深，針頭方向最好向后，以免傷其內臟，使血管破 損出血，影響實驗取材）J實驗當天給小鼠腹腔注射5%雞紅細胞0.5ml/ 只J 23h后脫頸法處死小鼠立即由腹腔注入 lml 生理鹽水J輕揉小鼠腹部約lmin，剪開腹部皮膚，肌肉層上開口滴管伸入腹腔吸出腹腔液，置于滴有肝素鈉的離心管中混勻J把腹腔液滴加在潔凈的載玻片上J將載玻片置于帶蓋解剖盤中（盤底部放23盒濕沙布）J 37C培養(yǎng)箱孵育30min取出玻片，漂洗去上清液和末粘附在玻片上的細胞（漂洗標準 : 在顯微鏡下檢查無重疊細胞層，且水流不要過急以免將貼附在玻片 上的 MF 沖掉）J室溫下晾干或用吹風機吹干載玻片Giemsa染液染色5IOmin J中洗去