小柴胡湯誘導(dǎo)內(nèi)異癥異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的研究

1、小柴胡湯誘導(dǎo)內(nèi)異癥異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的研究【關(guān)鍵詞】小柴胡湯；,內(nèi)異癥；,異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡摘要：目的討論小柴胡湯對(duì)內(nèi)異癥大鼠異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的影響。方法建立大鼠內(nèi)異癥模型，采用透射電鏡技術(shù)及免疫組化方法，觀察小柴胡湯對(duì)異位內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)構(gòu)造和Fas及aspase-3蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果中、高劑量小柴胡湯10，15gkg-1d-1治療后，異位內(nèi)膜有較多腺上皮細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的特征，表現(xiàn)為細(xì)胞體積變小，核固縮，胞漿和核染色質(zhì)凝集，密度增高，細(xì)胞間凋亡小體，同時(shí)間質(zhì)細(xì)胞中可見一些壞死細(xì)胞；異位內(nèi)膜Fas蛋白、aspase-3蛋白的表達(dá)程度明顯高于其在位內(nèi)膜。結(jié)論小柴胡湯可通過上調(diào)Fas蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)異位內(nèi)

2、膜細(xì)胞的凋亡。關(guān)鍵詞：小柴胡湯；內(nèi)異癥；異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡Abstrat：bjetiveTexplretheeffetfXiahaiHuDetinnetpiendetriuellapptsisinrats.ethdsUsingtheratdel,etpiendetriuasevaluatedbyeletrnirspe.Fasandaspase-3prtEinexpressinintheendetriuandendetrititissueerebservedbyiunhistheialethd.ResultsTheglandularellintheendetrialiplantafterthera

3、pyithiddlerhigh-dsef(10，15gkg-1d-1)XiahaiHuDetinshedharateristifeaturesfapptsishihdisplayedbytheelldereasedinsize,karypyknsis,ytplasiandnulearhratinndensatin,densityinreasedandaltfappttibdiesangell.hereassestralelldisplayeddegeneratinandnersis.TheprtEInexpressinfFasandaspase-3inendetrititissuefXiaha

4、iHuDetingrupashigherthanthatintheendetriu.nlusinThetherapeutiehanisfXiahaiHuDetinfrendetrisisayberelatedtprtingtheapptsisinendetrititissuebyinreasingFasprteinexpressin.Keyrds：XiahaiHuDetin;Endetrisis；Apptsis內(nèi)異癥病因復(fù)雜，目前無一種藥物能到達(dá)根治效果。小柴胡湯是著名古方，由柴胡、黃芩、人參、半夏、炙甘草、生姜、大棗組成，具有免疫調(diào)節(jié)、抑制細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)異常增殖細(xì)胞凋亡的作用1。我們?cè)诖篌w

5、、光鏡、電鏡等形態(tài)學(xué)程度觀察到，小柴胡湯可使內(nèi)異癥大鼠異位內(nèi)膜明顯萎縮，說明小柴胡湯對(duì)大鼠內(nèi)異癥具有治療作用2。本研究觀察小柴胡湯對(duì)內(nèi)異癥大鼠異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的影響，討論小柴胡湯治療內(nèi)異癥的作用機(jī)制。1材料1.1動(dòng)物60只雌性SD大鼠，體重220250g，廣東醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2藥品與試劑小柴胡湯，廣州光華制藥廠；丹那唑，江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)公司；Fas抗體，武漢博士德生物公司；asepas-3抗體，NEARKER公司；鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶免疫組化染色超敏試劑盒，北京中山生物技術(shù)公司。1.3儀器JEL-100XII/T透射電子顯微鏡，日本電氣公司；A-820切片機(jī)，美國(guó)生物儀器公司；T

6、IGER細(xì)胞圖像分析儀，重慶大學(xué)泰格爾圖像工程技術(shù)研究所。2方法2.1內(nèi)異癥大鼠模型的復(fù)制參考Jnes3方法建模。實(shí)驗(yàn)中60只大鼠共49只建模成功。2.2分組與給藥分為5組，即小柴胡湯低、中、高劑量組、丹那唑組及對(duì)照組。小柴胡湯低、中、高劑量組分別給予5，10，15g/kg小柴胡湯；丹那唑組給予0.1g/kg丹那唑；對(duì)照組給予蒸餾水。各組大鼠注入藥物溶液體積均為20l/kg，灌胃給藥1次/d，連續(xù)4周。2.3電鏡觀察給藥4周后取材，標(biāo)本經(jīng)多聚甲醛-戊二醛固定液前固定2h后，再經(jīng)1%鋨酸作后固定2h，酒精、丙酮梯度脫水，Epn812浸透包埋，超薄切片機(jī)切片，鈾鉛雙重染色，透射電鏡觀察。2.4免疫

7、組化法分析Fas及aspase-3蛋白的表達(dá)按SP法染色。參照毛熙光等4方法，計(jì)算蛋白表達(dá)評(píng)分。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)同一組大鼠在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜的綜合評(píng)分結(jié)果進(jìn)展兩相關(guān)樣本秩和檢驗(yàn)，反映同一藥物對(duì)在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜作用間的差異。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1小柴胡湯對(duì)異位內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)構(gòu)造的影響電鏡下，小柴胡湯中、高劑量組和丹那唑組均可見腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的凋亡和壞死現(xiàn)象。小柴胡湯中、高劑量組以凋亡現(xiàn)象為多見，散在分布，表現(xiàn)為細(xì)胞收縮，細(xì)胞體積變小，核固縮、碎裂，胞漿凝集，染色質(zhì)邊集，胞膜和核膜完好，個(gè)別細(xì)胞間可見凋亡小體，同時(shí)也可見一些間質(zhì)細(xì)胞的壞死。丹那唑組

8、以壞死細(xì)胞居多，較集中呈點(diǎn)片狀，主要存在于腺上皮，壞死細(xì)胞中的細(xì)胞器明顯呈空泡狀變性，間質(zhì)細(xì)胞中可見一些凋亡早期細(xì)胞，表現(xiàn)為核膜完好，核周腔擴(kuò)張，核質(zhì)邊集的現(xiàn)象。對(duì)照組中凋亡和壞死現(xiàn)象均較少發(fā)現(xiàn)。3.2小柴胡湯對(duì)內(nèi)異癥大鼠異位內(nèi)膜Fas,aspase-3蛋白表達(dá)的影響Fas蛋白主要表達(dá)于各組在位、異位內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞，大多在胞漿和胞膜表達(dá)，個(gè)別細(xì)胞呈全細(xì)胞表達(dá)；aspase-3蛋白在各組在位、異位內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的胞漿中表達(dá)。結(jié)果見表1。表1小柴胡湯對(duì)異位內(nèi)膜Fas，aspase-3蛋白表達(dá)程度的影響略與在位內(nèi)膜比擬，*P0.05，P0.014討論本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小柴胡湯中、高劑量組異位

9、內(nèi)膜中有較多的腺上皮細(xì)胞凋亡，個(gè)別基質(zhì)細(xì)胞壞死現(xiàn)象，丹那唑組中那么以腺細(xì)胞壞死為主，細(xì)胞凋亡主要發(fā)生在間質(zhì)細(xì)胞中?？梢娝幬飳?duì)不同細(xì)胞的影響并不單純決定于藥物本身的作用，可能還與不同細(xì)胞對(duì)藥物所引起的部分內(nèi)環(huán)境改變的反響和識(shí)別有關(guān)。丹那唑是17乙炔睪丸酮的衍生物，它通過作用于下丘腦垂體卵巢軸的各個(gè)部位而抑制卵巢功能，引起在位與異位內(nèi)膜萎縮。在間質(zhì)細(xì)胞與腺細(xì)胞中，雌激素受體和孕激素受體表達(dá)程度不同，針對(duì)激素程度的變化所做出的反響也就不盡一樣，小柴胡湯可能是通過改變微環(huán)境的免疫狀態(tài)和功能，促進(jìn)凋亡失調(diào)控，凋亡程度表現(xiàn)低下的細(xì)胞凋亡率增加5，使機(jī)體正常的免疫去除得以實(shí)現(xiàn)，到達(dá)預(yù)防和治療的作用。正常子宮

10、內(nèi)膜，從增生期到分泌期，F(xiàn)asRNA及蛋白表達(dá)強(qiáng)度均呈明顯上升趨勢(shì)6，而Fas在內(nèi)異癥患者的在位及異位內(nèi)膜中的表達(dá)均較低，使得在位及異位內(nèi)膜始終保持一種低程度的凋亡狀態(tài)，這種抗凋亡機(jī)制可能是子宮內(nèi)膜細(xì)胞在子宮以外部位得以生長(zhǎng)和增殖的病理生理學(xué)基矗小柴胡湯是著名古方，具有免疫調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)凋亡的功能。研究說明，小柴胡湯可以上調(diào)一些惡性增殖細(xì)胞外表的Fas蛋白表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖。本研究的免疫組化結(jié)果顯示，在小柴胡湯組內(nèi)異癥大鼠異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞Fas蛋白、aspase-3蛋白的表達(dá)程度明顯高于其在位內(nèi)膜，而對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果卻恰恰相反，丹那唑組中兩者相差不明顯。由此分析，小柴胡湯可能通過

11、上調(diào)內(nèi)異癥大鼠異位內(nèi)膜腺細(xì)胞外表Fas蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡程度，而起到對(duì)異位內(nèi)膜的抑制作用，提示小柴胡湯對(duì)內(nèi)異癥大鼠異位內(nèi)膜的抑制作用可能是通過上調(diào)Fas蛋白的表達(dá)，而促進(jìn)異位內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡。參考文獻(xiàn)：1吳敏毓.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)，第3版.合肥：中國(guó)科技大學(xué)出版社，1998：70.2左連東，鄭輝，李洪義，等.小柴胡湯沖劑治療子宮內(nèi)膜異位癥的實(shí)驗(yàn)研究J.中藥新藥與臨床藥理，2022，152：86.3JnesR.TheeffetfalutEinizinghrnereleasinghrne(LRH)agnist，levnrgestrel，danazlandvarietynexperientalendetrisisintheratJ.Ataendrinlgia，1984，106(2)：282.4毛熙光，彭芝蘭，鄭瑩，等.FAS基因蛋白在人子宮內(nèi)膜的表達(dá)及意義J.瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，21(5)：361.5Garia-VelasJA,ulayiN,KayisliUA,etal.ElevatedslubleFas-ligandlevelsaysuggestarlefrapptsisinenithe