反復(fù)熱性驚厥大鼠體內(nèi)促炎癥細(xì)胞因子水平的變化

1、反復(fù)熱性驚厥大鼠體內(nèi)促炎癥細(xì)胞因子程度的變化【關(guān)鍵詞】驚厥發(fā)熱性細(xì)胞因子類大鼠Keyrds:seizures;febrile;ytkines;rat各種病理狀態(tài)如癲、腦損傷等均可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)entralnervussyste，NS細(xì)胞因子產(chǎn)生增加，而腦部細(xì)胞因子程度的改變可導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷16。熱性驚厥febrileseizures，F(xiàn)S是6個(gè)月至5歲兒童最常見的驚厥性疾病，大部分患者預(yù)后良好，約30%40%的FS有可能復(fù)發(fā)，而反復(fù)FS發(fā)作可以造成腦損傷，遺留認(rèn)知功能缺陷等后遺癥，并且是癲發(fā)病的潛在危險(xiǎn)因素7，8。我們采用熱水浴建立大鼠反復(fù)FS腦損傷模型9，觀察反復(fù)FS大鼠海馬IL-1、

2、IL-6和TNF-程度的變化，以討論FS的病理生理學(xué)機(jī)制。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型建立清潔級(jí)21日齡SD雄性大鼠溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重5080g，隨機(jī)按10只、12只、21只的數(shù)目依次分為正常對(duì)照組N組、高熱對(duì)照組H組和熱性驚厥組FS組。各組動(dòng)物處理同參考文獻(xiàn)9：將FS組大鼠放置在45熱水浴水槽303050內(nèi)，水深以大鼠沿水槽壁站立時(shí)僅露出頭部為準(zhǔn)。大鼠在熱水中浸浴直至誘發(fā)出驚厥，驚厥發(fā)生后，立即轉(zhuǎn)移至觀察臺(tái)上，即刻測(cè)量肛溫，同時(shí)記錄大鼠驚厥埋伏期s、驚厥持續(xù)時(shí)間s及驚厥級(jí)別。隔天誘發(fā)驚厥1次，共10次。H組建立采用45溫水定時(shí)3in浸浴法，隔天一次，共10次，而無驚厥。記錄

3、大鼠出水槽時(shí)的肛溫。1.2標(biāo)本制備及檢測(cè)1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法多組樣本均數(shù)比擬采用單因素方差分析；均數(shù)的兩兩比擬采用LSD法，方差不齊者采用Dennett檢驗(yàn)。兩變量的相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析。2結(jié)果2.1動(dòng)物模型FS組大鼠存活13只共誘導(dǎo)0級(jí)驚厥占0%，級(jí)驚厥占30%，級(jí)驚厥占47%，級(jí)驚厥占23%。平均驚厥埋伏期為4.210.75in；平均驚厥持續(xù)時(shí)間為3.141.68in；驚厥時(shí)平均肛溫42.870.50。H組驚厥1只，死亡1只，予剔除，剩10只大鼠出水的平均肛溫為42.760.57，與FS組大鼠驚厥時(shí)的肛溫相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義t=1.54，P=0.12。N組大鼠無一例死亡或驚厥。2.2海

4、馬細(xì)胞因子程度見表2。3討論眾所周知，細(xì)胞因子是炎癥反響和免疫反響的遞質(zhì)。大量研究發(fā)現(xiàn)各種途徑包括紅藻氨酸、甲碘荷包牡丹堿和電刺激誘發(fā)的邊緣系統(tǒng)起源的癲模型大鼠腦組織IL-1、IL-6和TNF-的表達(dá)增加，且均與癲腦損傷的發(fā)生有關(guān)16。臨床研究關(guān)于FS患者腦脊液中細(xì)胞因子程度的改變情況的結(jié)論常?；ハ嗝?。本實(shí)驗(yàn)通過建立了反復(fù)FS腦損傷模型，發(fā)現(xiàn)反復(fù)FS發(fā)病后12h海馬IL-1表達(dá)上調(diào)，而IL-6和TNF-RNA及其蛋白表達(dá)無明顯改變。驚厥后細(xì)胞因子程度上調(diào)的機(jī)制還不明確，有人認(rèn)為這種現(xiàn)象主要是繼發(fā)于神經(jīng)組織的損傷，然而大量的證據(jù)說明了癲發(fā)作本身會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞因子程度的上調(diào)16。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，海馬IL

5、-1RNA程度和其蛋白程度之間存在正相關(guān)關(guān)系。故推測(cè)，F(xiàn)S可誘導(dǎo)海馬IL-1RNA表達(dá)，從而使海馬IL-1含量升高；而對(duì)IL-6和TNF-的表達(dá)無明顯的影響。HEida等11使用脂多糖海人藻酸制造FS動(dòng)物模型，從驚厥發(fā)作開場(chǎng)到以后的2h測(cè)得海馬IL-1的表達(dá)持續(xù)升高，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果類似。Shbitz等12發(fā)現(xiàn)IL-1可增加NS小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL-6和TNF-的合成。本研究發(fā)現(xiàn)海馬IL-1含量與海馬IL-6含量之間存在正相關(guān)關(guān)系，但與海馬TNF-含量之間無直線相關(guān)性。提示反復(fù)FS導(dǎo)致的海馬IL-1的上調(diào)可促進(jìn)海馬IL-6的合成但未到達(dá)顯著性意義，卻缺乏以增加TNF-的合成，故推測(cè)反復(fù)F

6、S上調(diào)海馬IL-1表達(dá)的作用較弱。有研究證實(shí)，細(xì)胞外IL-1濃度的升高可導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷13，腦部IL-6長(zhǎng)期處于高程度可出現(xiàn)神經(jīng)元變性14，Shinda等15發(fā)現(xiàn)中和TNF-抗體可減少KA誘發(fā)驚厥后海馬DNA損傷細(xì)胞的數(shù)量。大量研究發(fā)現(xiàn)癲模型中，大鼠各腦區(qū)細(xì)胞因子IL-1、IL-6和TNF-的表達(dá)增加的分布與腦損傷的區(qū)域是一致的，更有研究證實(shí)腦部IL-1、IL-6和TNF-的表達(dá)程度與腦損傷體積之間存在相關(guān)性16。Ravizza等1發(fā)現(xiàn)KA誘導(dǎo)的驚厥也只對(duì)能誘導(dǎo)細(xì)胞因子尤其是IL-1表達(dá)增加的腦組織才有神經(jīng)元損傷作用。本實(shí)驗(yàn)提示FS可導(dǎo)致海馬IL-1表達(dá)的增加，同時(shí)發(fā)現(xiàn)FS組大鼠海馬A1區(qū)神

7、經(jīng)元損傷9，故認(rèn)為FS導(dǎo)致了IL-1表達(dá)的上調(diào)，IL-1參與了FS相關(guān)腦損傷過程。IL-1對(duì)神經(jīng)元的損傷作用與其他細(xì)胞因子IL-6和TNF-有協(xié)同效應(yīng)，各種關(guān)鍵炎癥級(jí)聯(lián)反響分子的增加可加劇損傷后繼發(fā)的神經(jīng)元損傷2。本實(shí)驗(yàn)提示FS只引起海馬IL-1上調(diào)，而海馬IL-6和TNF-的表達(dá)無明顯增加；相比擬，癲可導(dǎo)致以上三種促炎癥細(xì)胞因子廣泛的表達(dá)增加16，提示與其他因素誘導(dǎo)的癲發(fā)作相比，F(xiàn)S對(duì)海馬促炎癥細(xì)胞因子程度的影響可能較小，故推測(cè)這是FS對(duì)神經(jīng)元存活率影響較小的原因之一。此外腦部TNF-、IL-6和IL-1含量增加還可改變驚厥易感性1719，故反復(fù)FS引起海馬細(xì)胞因子表達(dá)的增加可能成為癲發(fā)作的

8、潛在因素。研究發(fā)現(xiàn)年齡較大的小鼠腦部TNF-、IL-6和IL-1的根底表達(dá)程度較年輕小鼠高，腦損傷后大齡小鼠丘腦TNF-和IL-1基因表達(dá)程度明顯高于年輕小鼠3。Ravizza等1發(fā)如今9日齡大鼠使用KA誘發(fā)驚厥后未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子表達(dá)增加；15日齡大鼠使用KA誘發(fā)驚厥后只可誘導(dǎo)IL-1表達(dá)增加；而21日齡大鼠使用KA誘發(fā)驚厥后可導(dǎo)致所有細(xì)胞因子IL-1、IL-6和TNF-的表達(dá)增加，與成年鼠大腦類似2。這說明隨著年齡的增長(zhǎng)，特定的細(xì)胞因子在根底狀態(tài)和損傷后的表達(dá)程度均增加。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)反復(fù)FS可導(dǎo)致海馬神經(jīng)元的損傷；也導(dǎo)致海馬IL-1系統(tǒng)表達(dá)增加，而IL-1系統(tǒng)表達(dá)上調(diào)的幅度可能隨著FS復(fù)發(fā)時(shí)

9、年齡的增長(zhǎng)而逐漸增大，故對(duì)海馬神經(jīng)元的損傷作用也會(huì)逐漸加重，因此早期防治FS的復(fù)發(fā)對(duì)腦正常發(fā)育很重要。綜上所述，IL-1參與了FS的病理生理學(xué)改變，IL-6和TNF-很可能與FS病理生理學(xué)過程無關(guān)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1RavizzaT,Rizzi,Pereg,etal.Inflaatryrespnseandgliaativatinindevelpingrathippapusaftersta-tusepileptiusJ.Epilepsia,2022,46(Suppl5):113-117.2DeSiniG,Pereg,RavizzaT,etal.Inflaatryytkinesandrelatedge

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