血液制品去除滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則

1、RZ/XZ.W.69-2022RZ/XZ.W.69-2022關(guān)于印發(fā)血液制品去除滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則的通知國藥監(jiān)注2022160各省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)視治理局：轉(zhuǎn)發(fā)至轄區(qū)內(nèi)各有關(guān)單位。2022年五月九日血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則CJD。但有少數(shù)爭辯報告覺察有試驗性傳染現(xiàn)象，因此要親熱關(guān)注CJD，特別是vCJD進(jìn)展動向。為了提高血液制品安全性，生產(chǎn)工藝要具有肯定的去除/滅活局部病毒力量，生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的去除/滅活病毒方法。本技術(shù)指導(dǎo)原則是對血液制品指以人血漿為原料制備的制品生產(chǎn)過程以及/滅活方法的選擇、驗證方案的設(shè)計、結(jié)果判定以及附錄所列技術(shù)驗證申報的程序。一

2、、去除/滅活病毒方法的選擇/滅活方法的側(cè)重點也應(yīng)有所不同：一凝血因子類制品/滅活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可承受一種或多種方法聯(lián)合去除/滅活病毒。二免疫球蛋白類制品對于免疫球蛋白類制品包括靜脈注射用人免疫球蛋白、人免疫球蛋白和特異性人免生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的滅活脂包膜病毒方法。但從進(jìn)一步提高這類制品安全性考慮，提倡生產(chǎn)過程中參加特定的針對非脂包膜病毒的去除/滅活方法。三白蛋白承受低溫乙醇生產(chǎn)工藝和特定的去除/滅活病毒方法，如巴斯德消毒法等。二、常用的去除/滅活病毒方法評價一巴斯德消毒法巴氏消毒法人血白蛋白制品幾十年臨床應(yīng)用結(jié)果說明，白蛋白的巴氏消毒法對 HIV 和肝炎病毒是安全的。其病毒毒各參

3、數(shù)符合要求包括制品內(nèi)溫度分布的均一性和滅活時間。其它血液制品液體制劑由于制品的組成、穩(wěn)定劑如：氨基酸、糖、枸櫞酸鹽等及其濃度的不同，均會對滅活病毒效果有肯定的影響。因此在承受巴氏消毒滅活病毒方法時必需進(jìn)展病毒滅活效果驗證。二干熱法凍干制品8072HBV、HCV、HIVHAV如：蛋白質(zhì)、糖、鹽和氨基酸對病毒滅活效果的影響。應(yīng)確定允許的制品瓶間各參包括制品內(nèi)、箱內(nèi)最高和最低溫度點。三有機溶劑/去污劑S/D處理法有機溶劑，如：磷酸三丁脂TNBP和非離子化的去污劑，如：Triton X-100800.3%TNBP1%吐溫-80，在246；0.3%TNBP1%Triton X-100，244時。S/D1

4、m顆粒可能公開病毒從而影響病毒滅活效果。參加S/DS/DS/D化，如有變化應(yīng)進(jìn)展適當(dāng)調(diào)整。吐溫-80 應(yīng)承受植物源性，并應(yīng)承受稱量法量取。四膜過濾法獨使用，應(yīng)與其它方法聯(lián)合使用。濾后應(yīng)測試濾膜的完整性。五pH爭辯說明，免疫球蛋白生產(chǎn)工藝中的低 pH如 pH4處理有時加胃酶能滅活幾種影響病毒滅活效果，驗證試驗應(yīng)當(dāng)爭辯這些參數(shù)允許變化的幅度。三、特定的去除/滅活病毒方法驗證一指示病毒的選擇首先，應(yīng)中選擇經(jīng)血液傳播的相關(guān)病毒如：HIV，不能用相關(guān)病毒的，要選擇與其理化性質(zhì)盡病毒大小、核酸類型以及有無包膜其中至少應(yīng)包括一種對物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。在進(jìn)展去除/滅活病毒驗證時，應(yīng)依據(jù)制品的特

5、性及所承受的病毒去除/滅活工藝，參照下表列舉的病毒選擇適宜的指示病毒。所選擇的指示病HIV-1、HBVHCVVSVpHpH毒效果時可選用此指示病毒。經(jīng)血液傳播疾病的相關(guān)病毒及驗證可選用的指示病毒舉例病毒基因組脂包膜大小nrn 指示病毒舉例HIV RNA 有 80-100HIVHBV DNA 有 45鴨乙型肝炎病毒、偽狂犬病毒 HCV RNA 有 40-60牛腹瀉病毒、Sindbis病毒HAV RNA 無 27HAV、脊髓灰質(zhì)炎病毒、腦心肌 炎EMC病毒B19 DNA 無 20犬細(xì)小病毒、豬細(xì)小病毒二方案設(shè)計去除/滅活病毒驗證爭辯應(yīng)符合 GLP 的要求。爭辯影響去除/滅活病毒效果的參數(shù)包括機械參

6、數(shù)和理化參數(shù)允許變化的幅度。爭辯病毒滅活動力學(xué)，包括病毒滅活速率和滅活曲線。指示病毒滴度應(yīng)當(dāng)盡可能高病毒滴度應(yīng)106/ml。參加的病毒與待驗證樣品體積比不能高于 19。如可能，驗證過程中每步取出的樣品應(yīng)盡快直接進(jìn)展病毒滴定，不做進(jìn)一步處理如超離心、。假設(shè)樣品必需做進(jìn)一步處理，或不同時間取出的樣品要在同一時間進(jìn)展測定，應(yīng)考慮這些處理方法對病毒檢測結(jié)果的影響。如合胞體或病灶形成、終點滴定或其他方法。這些方法應(yīng)當(dāng)有適宜的靈敏度和可重復(fù)性，每一個取樣點應(yīng)取雙份樣品并設(shè)有比照以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。/滅活方法，應(yīng)當(dāng)分別進(jìn)展病毒滅活效果驗證。三觀看指標(biāo)病毒方面去除/滅活病毒滴度；滅活病毒速率、滅活曲線。以列表

7、和做圖形式報告驗證結(jié)果。病毒去除/滅活各參數(shù)允許變化范圍蛋白質(zhì)方面制品質(zhì)量應(yīng)符合中國生物制品規(guī)程或有關(guān)規(guī)定；RZ/XZ.W.69-2022RZ/XZ.W.69-2022承受適當(dāng)方法測定蛋白質(zhì)構(gòu)造和功能活性的變化。如：制品比活性、IVIG 的 Fc外形變化可導(dǎo)致集中系數(shù)、沉降常數(shù)和粘度的轉(zhuǎn)變；SDS-，雙向電泳也是檢測蛋白質(zhì)構(gòu)造變化的很好方法。假設(shè)承受的去除/滅活方法包括更換使用已認(rèn)可的病毒滅活方法或國內(nèi)外未/滅活方法，需對蛋白質(zhì)半衰期和免疫原性進(jìn)展?fàn)庌q。要求如下：如大鼠或家兔和未經(jīng)病毒去除/滅活的一樣制品進(jìn)展半衰期比較；免疫原性：免疫原性用來檢查蛋白質(zhì)較高級別構(gòu)造上的變化。這些變化不肯定損如家

8、兔，所產(chǎn)生的抗體穿插用未經(jīng)和經(jīng)病毒滅活的蛋白結(jié)合。假設(shè)經(jīng)病毒滅位與試驗動物一樣，因此推舉在期臨床獲得生產(chǎn)文號后開展是否有抗原產(chǎn)生的爭辯。四效果的判定/滅活的有效性須綜合考慮，不能僅以病毒去除/滅活的量來確定。在確定有效之前，必需考慮如下因素，審慎評價每次驗證結(jié)果。驗證試驗所選擇的病毒是否適宜，病毒驗證的設(shè)計是否合理。病毒降低量log104logs，表示該步驟去除/滅活病毒有效。如因檢測方法造成病毒降低量4 logs病毒滅活動力學(xué)可更好的顯示病毒滅活的效果。病毒滅活通常不是簡潔的一級反響。往往是起病毒對該滅活方法有抵抗力，說明該步病毒滅活方法無效。1:9/滅活方法步驟實際的滅活病毒的量。舉例說明

9、： 病毒，可將去除/log過程中去除/滅活病毒總量之中，但是就此步方法去除/滅活病毒力量而言是無效的。 4 logs ，2 logs logs 的剩余病毒，且去除病毒的量可重復(fù)出，并不受工藝的影響，應(yīng)認(rèn)為是有效的去除/滅活病毒的方法。 2 logs ，僅 4 logs ，因此應(yīng)判定此方法去除的病毒量4 logs。病毒滅活動力學(xué)是格外重要的觀看指標(biāo)。如巴氏消毒法60，10，假設(shè)病毒殘留量低量，同時也要考慮病毒滅活動力學(xué)。四、生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒力量的驗證/滅活病毒力量驗證參照特定的去除/滅活病毒方法驗證的要求進(jìn)展。需要特別考慮的問題有以下幾方面：一只對可能有去除/滅活病毒作用的生產(chǎn)步驟進(jìn)展驗證

10、。二模擬的生產(chǎn)工藝各種參數(shù)應(yīng)盡可能與實際的生產(chǎn)工藝相全都，如pH、溫度、蛋白質(zhì)和其他組成成分的濃度、反響時間、層析柱的柱床高度及流速與床高的比例、洗脫圖譜及該步驟的生產(chǎn)效果如產(chǎn)量、比活性、組成成分。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對病毒去除/滅活效果的影響。三生產(chǎn)各步驟對不同類型病毒去除/滅活的選擇性。四核酸擴增技術(shù)如 PCR檢測病毒核酸的靈敏度比較高，但是該檢測技術(shù)最大生產(chǎn)過程中病毒去除量的驗證。五通常在生產(chǎn)過程中去除/滅活病毒量是可以計算在去除病毒總量中，但不能認(rèn)定如：糖基化，指示病毒與靶病毒安排形式可能完全不同。在試驗室增殖的相關(guān)病毒可即，認(rèn)為是有效去除/滅活病毒步驟。六驗證的目的是為了確

11、定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的力量，獲得生產(chǎn)全過程中估量去除/滅活病低量1 log五、去除/滅活病毒方法的再驗證以下幾種狀況需進(jìn)展病毒去除/滅活方法的再驗證：一首次生產(chǎn)者，需對生產(chǎn)工藝中特定的去除/滅活病毒方法進(jìn)展再驗證；力量驗證；對特定的去除/滅活病毒方法進(jìn)展去除/滅活病毒效果驗證；三工藝轉(zhuǎn)變但不屬重大工藝改革時，需對特定的去除/滅活病毒方法進(jìn)展再驗證；/滅活病毒方法進(jìn)展再驗證。附錄：血液制品病毒去除/滅活驗證申報程序效果的驗證工作。2、血液制品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按本技術(shù)指導(dǎo)原則的要求對其生產(chǎn)工藝和特定的病毒去除/滅活方法進(jìn)展驗證。如無條件，可托付其它單位進(jìn)展去除/滅活病毒效果的驗證。3、血液制品生產(chǎn)企

12、業(yè)在完成去除/滅活病毒效果驗證后，向中國藥品生物制品檢定所SOP、至少中試規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)的三批病毒滅活前中間品去除/滅活病毒前的樣品及其制造記錄等相關(guān)資料。/滅活方法相關(guān)的參數(shù)如：pH、蛋白質(zhì)濃度、水分及穩(wěn)定劑含量、純度等的檢測。5、中國藥品生物制品檢定所及授權(quán)認(rèn)定的檢測試驗室對生產(chǎn)單位提交的連續(xù)生產(chǎn)的三批病毒滅活生物制品檢定所。6、在病毒去除/滅活驗證的同時或驗證后，中國藥品生物制品檢定所對申報單位供給批號可與病毒驗證時報送的制品的批號不同，但必需是承受一樣的生產(chǎn)工藝和病毒去除/滅活方法生產(chǎn)的制品進(jìn)展全面質(zhì)量復(fù)核按中國生物制品規(guī)程及有關(guān)的法定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)展全檢，出具檢驗報告。7、承受的病毒去除/滅活方法時，在資料審查及病毒滅活效果驗證完畢后，由中國人員參與的技術(shù)論證