HPLCMS法測(cè)定人血漿中羅紅霉素濃度

1、HPLC-MS法測(cè)定人血漿中羅紅霉素濃度【摘要】目的建立液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定血漿中羅紅霉素濃度的方法。方法色譜柱為TherHypersil-HyPURITY181502.1n,5；流動(dòng)相為10乙酸銨1.5乙酸，0.1TFA：甲醇：乙腈38：365：26；電噴霧電離源ESI；選擇性正離子監(jiān)測(cè)SI,質(zhì)荷比/z羅紅霉素為838、麥迪霉素為815。結(jié)果羅紅霉素血藥濃度在2516000ng/l間線性關(guān)系良好，低、中、高三濃度的平均相對(duì)回收率分別為98.6%、100.2%和99.4%，日內(nèi)、間相對(duì)RSD均小于15%。結(jié)論本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，可用于羅紅霉素的治療藥物監(jiān)測(cè)及藥動(dòng)學(xué)研究。【關(guān)鍵詞】羅

2、紅霉素；高效液相色譜質(zhì)譜法；血藥濃度羅紅霉素rxithryin由紅霉素衍生而來，抗菌譜與紅霉素一樣，但抗菌作用比紅霉素強(qiáng)，尤其對(duì)流感嗜血桿菌、淋病奈瑟桿菌、大腸桿菌、百日咳桿菌的抗菌作用較強(qiáng)，對(duì)肺炎衣原體、肺炎支原體、軍團(tuán)菌等細(xì)胞內(nèi)病原微生物的作用也超過紅霉素。其特點(diǎn)為對(duì)胃酸穩(wěn)定、口服吸收好、組織穿透性強(qiáng)、血藥峰濃度高、分布廣且不良反響較少1。有關(guān)羅紅霉素的血液藥物濃度測(cè)定方法，文獻(xiàn)報(bào)道較多的是微生物法24，操作繁雜且系統(tǒng)誤差大，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性；也有人用HPL-UV法檢測(cè)5，但羅紅霉素紫外吸收波長在220n以下，血漿中的許多內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)其檢測(cè)有干擾，檢測(cè)靈敏度不高。本文擬通過實(shí)驗(yàn)建立液相色譜

3、-質(zhì)譜測(cè)定血液中羅紅霉素濃度的方法，為羅紅霉素的治療藥物監(jiān)測(cè)及藥動(dòng)學(xué)研究提供簡便、準(zhǔn)確、高靈敏度的檢測(cè)方法。1材料與方法1.1藥品與試劑羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所，麥迪霉素標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。1.2儀器島津LS2021液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，L-10ADVP低壓四元梯度泵，T-10AVP柱溫箱，SL-10ADVP系統(tǒng)控制器，LSslutin工作站。上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備DZF-6020型真空枯燥器，HeraeusBifugestrats高速冷凍離心機(jī)。1.3色譜和質(zhì)譜條件色譜柱為TherHypersil-HyPURITY181502.1

4、n,5；流動(dòng)相為10乙酸銨1.5乙酸，0.1TFA：甲醇：乙腈38：365：26；流速0.25l/in；柱溫45。電噴霧電離源ESI，選擇性正離子監(jiān)測(cè)SI,質(zhì)荷比/z為838(羅紅霉素，+H)，815麥迪霉素，+2H帶正電荷的分子離子峰，電離源電壓4.5kV，噴霧氣氮?dú)獾牧魉贋?.5L/in，枯燥氣體氮?dú)饬魉贋?0L/in。脫溶劑溫度為250，檢測(cè)器電壓1.5kV。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1質(zhì)譜和色譜圖圖1中A、B分別為羅紅霉素和麥迪霉素的質(zhì)譜掃描圖譜；圖2中A、B、分別空白血樣、空白血樣中參加標(biāo)準(zhǔn)品、受試者服藥后6h血漿的總離子流圖，麥迪霉素的保存時(shí)間約為2.5in，羅紅霉素的保存時(shí)間約為3.0in。

5、血漿內(nèi)源性物質(zhì)及其他雜質(zhì)不干擾樣品的別離測(cè)定。2.3回收率及精細(xì)度配制濃度50、1000、8000ng/l的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)血漿各5份，按上法平行操作，進(jìn)展測(cè)定，得日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD均小于15%分別為8.9%、8.6%和5.7%，平均相對(duì)回收率分別為98.6%、100.2%和99.4%。每天配制濃度50、1000、8000ng/l的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)血漿各5份，連續(xù)測(cè)定3天，得日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD均小于15%分別為10.2%、10.5%和5.8%2.4萃取回收率配制濃度50、1000、8000ng/l的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)血漿各5份；按5.2項(xiàng)下操作，記錄羅紅霉素和內(nèi)標(biāo)峰面積。另配制含羅紅霉素濃度分別50、1

6、000、8000ng/l，內(nèi)標(biāo)濃度為10g/l的流動(dòng)相溶液各1l，直接進(jìn)樣5l，記錄羅紅霉素和內(nèi)標(biāo)峰面積。計(jì)算血漿樣品和流動(dòng)相樣品的峰面積百分比，得羅紅霉素的萃取回收率分別為64.6%、64.2%、64.6%，內(nèi)標(biāo)的萃取回收率為62.5。2.5穩(wěn)定性考察血樣的室溫穩(wěn)定性：配制濃度50、1000、8000ng/l的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)血漿，在室溫條件下放置，分別在0、2、4、6、12h按上述方法測(cè)定羅紅霉素的濃度，結(jié)果說明RSD15,樣品在室溫放置12h內(nèi)穩(wěn)定。血樣的凍融穩(wěn)定性：配制濃度50、1000、8000ng/l的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)血漿，在-40冰箱中冷凍后取出，室溫融化，測(cè)定羅紅霉素的濃度，重復(fù)操作4

7、次，結(jié)果說明RSD15，樣品在4次凍融過程中穩(wěn)定，氨氯地平血樣歷經(jīng)3次凍融后穩(wěn)定。血漿樣品冷凍放置穩(wěn)定性：配制濃度50、1000、8000ng/l的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)血漿，在-40冰箱中放置，分別在0、5、10、20、30天取樣按上述方法測(cè)定羅紅霉素的濃度，結(jié)果說明RSD15，樣品在冷凍條件下放置30天內(nèi)穩(wěn)定。3討論本試驗(yàn)建立起羅紅霉素血藥濃度的高效液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)法，方法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，操作簡便，血漿內(nèi)源雜質(zhì)無干擾，最低定量濃度達(dá)25ng/l，可以滿足羅紅霉素生物利用度和藥代動(dòng)力學(xué)研究的要求?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1ZhanelGG，Duek，HbanDJ,etalReviefarlidesandketlides：fusnrespiratrytratinfetinsDrugs,2001,61(4)：443-498.2郁繼誠，張菁，曹憶堇,等.國產(chǎn)羅紅霉素膠囊劑的藥代動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度測(cè)定中國新藥雜志，2001,10(9)：685-688.3杜智敏，張波，趙紅光,等.國產(chǎn)羅紅霉素膠囊的人體生物利用度和藥代動(dòng)力學(xué)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000,34(6)：425-427.5aekJ，PtaekPDete