實驗七 食品中總糖含量的測定

1、 實驗七食品中總糖含量的測定實驗?zāi)康恼莆蛰焱壬y糖的原理和方法。實驗原理糖類在較高溫度下可被濃硫酸作用而脫水生成糠醛或羥甲基糖醛后，與蒽酮(CH0)脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈1410藍綠色。該物質(zhì)在620nm處有最大吸收，在150卩g/ml范圍內(nèi)，其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量在30卩g左右就能進行測定，所以可做為微量測糖之用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較合適。儀器及材料3.1儀器可見分光光度計(752型)、可調(diào)試移液器或移液管、電子分析天平、水浴鍋、電爐子、25mL具塞比色管3.2試劑標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖儲備液(1.0mg/ml)：稱取已在80C烘箱中

2、烘至恒重的葡萄糖1.0000g,配制成1000ml溶液，即得每ml含糖為1000卩g的標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖工作液(0.1mg/ml):100mg葡萄糖溶解到蒸餾水中，定容到1000ml備用。72%硫酸：72mL98%H2S04加到28mL純凈水中，并不斷攪拌。0.1%蒽酮顯色液：0.1g蒽酮和1.0g硫脲，置于燒杯中，在攪拌狀態(tài)下，緩慢加入100ml72%H2S04，棕色瓶中低溫存放兩天，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。3.3材料市售玉米粉實驗步驟4.1樣品處理精確稱取玉米粉0.200g置于錐形瓶中，加入少量溫水充分溶解并定容至1000毫升，搖勻過濾備用。4.2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取7支干燥潔凈的試管，按表1順

3、序加入試劑，進行測定。以吸光度值為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。表1蒽酮比色法定糖一標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及樣品檢測0123456待測葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液/mL00.20.4蒸餾水/mL蒽酮試劑1010100.60.81.01.2樣品濾液1.0補滿定容2mL1010101010迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸l(wèi)Omin取出，用流水冷卻，室溫放置1Omin，在620nm波長下比色。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量（ug）作橫坐標(biāo)，以吸光值作縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.3樣品測定吸取1.0ml已稀釋的提取液于試管中，加入

4、10.0ml蒽酮試劑，平行三份；空白管以等量蒸餾水取代提取液。以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。根據(jù)A620平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡萄糖的含量（臨）。實驗結(jié)果及分析5.1數(shù)據(jù)記錄表2蒽酮比色法定糖-標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及樣品檢測數(shù)據(jù)表0123456待測葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)匍萄糖溶液/mL00.20.40.60.81.01.2樣品濾液1.0蒸餾水/mL補滿定容2mL蒽酮試劑1010101010101010沸水浴中準(zhǔn)確煮沸10min，取出用流水冷卻，室溫放10minA620第一次00.0410.0840.1510.2200.2780.3560.084第二次00.0420.0830.1490.2200.2790.3570

5、.084第三次00.0420.0870.1470.2220.2820.3600.084平均值00.0420.0850.1490.2220.2800.3680.084圖1糖-標(biāo)準(zhǔn)曲線0.40度光分-0.05Equationy=a+b*xAdj.R-Squa0.98434ValueStandardErrBIntercept-0.02020.01137BSlope0.30660.015770.350.300.250.200.150.100.050.000.01.01.20.20.40.60.8標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖工乍液/mL5.2數(shù)據(jù)計算計算公式為式中：X二X100mX樣品總糖含量(以匍萄糖計，mg/100g

6、)c-從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測定樣品的糖含量，mg；m測定時相當(dāng)于樣品的量，g；根據(jù)數(shù)據(jù)記錄(表2)計算:c384+0.22)x0.1=O.34o6g)0.3066Xx100=x100=0.17(mg/1g)m0.200根據(jù)計算可知樣品的總糖含量為：17mg/100g。6.討論與心得6.1思考題6.1.1影響檢驗準(zhǔn)確性的主要因素有哪些？答：主要有樣品的前處理，如稱取玉米粉質(zhì)量誤差、溶解不夠充分等；以及實驗操作過程中的誤差，如反應(yīng)條件的控制、標(biāo)準(zhǔn)匍萄糖貯備液與標(biāo)準(zhǔn)匍萄糖工作液的配制引起的誤差等；最后就是標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備帶來的誤差。6.1.2水可以提取哪些糖？答：主要是水溶性糖，如匍萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖

7、等?！痉椒ǚ治觥枯焱壬ǖ奶攸c是幾乎可測定所有的碳水化合物，不但可測定戊糖與已糖，且可測所有寡糖類和多糖類，包括淀粉、纖維素等(因為反應(yīng)液中的濃硫酸可把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng))，所以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價值，但在測定水溶性碳水化合物時，則應(yīng)注意切勿將樣品的未溶解殘渣加入反應(yīng)液中，否則會因為細胞壁中的纖維素、半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了測定誤差。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，匍萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳

8、糖顯色更淺，故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時則可避免此種誤差。6.2注意事項一定要注意溫度要控制在100C從100C開始準(zhǔn)確計時10min,然后迅速冷卻，于室溫中平衡10min.蒽酮要注意避光保存。配置好的蒽酮試劑也應(yīng)注意避光，當(dāng)天配制好的當(dāng)天使用。4.試管要保證干燥清潔，無殘留水滴。6.3心得體會這是第四次進行食品分析與檢驗實驗課程。實驗內(nèi)容是食品中總糖含量的測定。其中我主要學(xué)會了用蒽酮比色法測量總糖含量的基本操作技術(shù)，掌握了相關(guān)實驗測定條件的選擇，這在以后的食品分析與檢驗試驗中是很有用的。在實驗過程中我組成員各有分工，尤其注意了精確稱重、按照規(guī)范使用分光光度計等一系列基本操作。同時我們也順利完成所有實驗項目。這門課程作為專業(yè)課程的配套實驗，這是提高我們實驗技術(shù)，掌握基本的試驗方法的基本。我們會更加認真完成課程