免疫學(xué)的技術(shù)原理

1、關(guān)于免疫學(xué)技術(shù)原理第1頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四（一）抗原抗體反應(yīng)的原理 抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。 抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補結(jié)合 抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合 抗原抗體之間的結(jié)合力 親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體 物質(zhì)基礎(chǔ):第2頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四體內(nèi)：表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進吞噬或中和毒素或引起免疫病理的損傷體外：凝集、沉淀、細胞溶解和補體結(jié)合等反應(yīng)第3頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四（二）抗原抗體反應(yīng)的特點特異性 可逆性比例性 階段性第4頁，共38頁，2022年

2、，5月20日，9點46分，星期四特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補性（1）特異性第5頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)交叉反應(yīng)（cross reactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖Ag B第6頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四(2)可逆性可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性 影響因素： 抗體對相應(yīng)抗原的親合力親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離 環(huán)境因素

3、對復(fù)合物的影響pH、離子強度 第7頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四前帶(prezone)：抗體過量后帶(postzone)：抗原過量等價帶(equivalence zone)： 抗原抗體比例合適 抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系(3)比例性第8頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見 第二階段：反應(yīng)可見階段，反應(yīng)慢，出現(xiàn)凝集、 沉淀和細胞溶解等現(xiàn)象 (4)階段性第9頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四A.抗原、抗體反應(yīng)物的自身因素環(huán)境因素（三） 影響抗原

4、抗體反應(yīng)的因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價第10頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四B.環(huán)境因素電解質(zhì): 生理鹽水或緩沖液酸堿度: pH6pH9溫 度: 1540，37最適第11頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應(yīng)補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗同上(四）免疫學(xué)檢測技術(shù)的類型第12頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四反應(yīng)類

5、型實驗技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測發(fā)光強度金免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀第13頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四按實際用途分為:e免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry techniqu,IHCT)免疫測定(immunoassay)標(biāo)記免疫技術(shù)：用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記抗原或抗體，進行抗原抗體反應(yīng)后，通過檢測標(biāo)記物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析第14頁，共38頁，2022年，5月20日，

6、9點46分，星期四按測定反應(yīng)體系的物理狀態(tài)分為: 均相免疫測定(homogenous immunoassay）非均相免疫測定(heterogenous immunoassay) 按檢測現(xiàn)象分為: 放射免疫技術(shù) 熒光免疫技術(shù)酶免疫技術(shù) 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)金免疫技術(shù)第15頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四1什么是抗原抗體反應(yīng)？ 抗原抗體反應(yīng)的原理是什么？ 2.抗原抗體反應(yīng)有哪些特點？ 3.如何理解抗原抗體反應(yīng)的特異性？4什么是抗原抗體反應(yīng)的可逆性？有何應(yīng)用？5抗原抗體反應(yīng)體系中為何要確定抗原、抗體的最適比例？ 6抗原抗體反應(yīng)有哪些影響因素？7基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù)有哪

7、些？思考題第16頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四小結(jié) 抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。 抗原抗體反應(yīng)的特點是特異性、可逆性、比例性和階段性。 第17頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 影響抗原抗體反應(yīng)的因素包括反應(yīng)物的自身因素和環(huán)境因素。免疫學(xué)檢測技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，免疫學(xué)技術(shù)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補體參與的反應(yīng)、中和反應(yīng)和標(biāo)記免疫反應(yīng)五種類型。 第18頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四抗原抗原排斥抗原抗體Y抗原抗原抗原YYYYYYYYYYYYYYYYY 顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)

8、合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。第二節(jié) 凝集反應(yīng)第19頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 分類直接凝集反應(yīng)- 顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。細胞性抗原：細菌和紅細胞第20頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四凝集原(agglutinogen)：凝集反應(yīng)中的抗原。凝集素(agglutinin)：凝集參與反應(yīng)的抗體第21頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四顆粒性抗原凝集素 直接凝集反應(yīng)第22頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四1、玻片凝集反應(yīng): 已知抗原

9、+未知抗體凝集團塊 混濁?2、試管凝集反應(yīng)： 定量抗原+系列稀釋抗體不同程度的凝集反應(yīng)YES NO確定抗體的滴度第23頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。試管凝集試驗第24頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四第25頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四鮮血者紅細胞受血者血清O型(抗A、抗B)A型(抗B)B型(抗A)AB型(無)O型-A型+-+-B型+-AB型+- 注:“+”表示有凝集反應(yīng), “-”表示無凝集反應(yīng)第26頁，共38頁，2022年，5月20日，9點4

10、6分，星期四間接凝集反應(yīng)(indirect agglutination): 將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.第27頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒 間接凝集試驗示意圖第28頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 載體種類及其處理方法紅細胞： 新鮮紅細胞吸附蛋白質(zhì)的能力差。一般先醛化后應(yīng)用。聚苯乙烯膠乳顆粒： 可物理吸附蛋白質(zhì)；常制備帶有化學(xué)活性基團的顆粒第29頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四1.正向間接凝集試驗2.

11、反向間接凝集試驗3.間接凝集抑制試驗間接凝集反應(yīng)的類型第30頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四用抗原致敏載體-檢測抗體正向間接凝集試驗第31頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四反向間接凝集試驗用抗體致敏載體-檢測抗原第32頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接凝集抑制試驗用抗原致敏載體-檢測抗原第33頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接血凝試驗第34頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接乳膠凝集試驗概念金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集試驗第35頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用抗原的檢測 反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分?？贵w的檢測檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體。 第36頁，共38頁，2022年，