基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)培訓(xùn)課件

1、基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診斷 用分子生物學技術(shù)對生物體的DNA序列及其產(chǎn)物（RNA和蛋白質(zhì)）進行定性、定量分析，為疾病診斷提供依據(jù)。基因診斷的前提 已明確疾病表型與基因型的關(guān)系 2基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診斷基因診斷的前提2基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 基因診斷包括定性和定量分析DNA、RNA或蛋白質(zhì)水平變化，如病毒基因及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在體內(nèi)從無到有、癌基因表達水平從低到高；基因結(jié)構(gòu)變化，如點突變引起基因失活、染色體轉(zhuǎn)位引起基因異常激活或滅活。3基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 基因診斷包括定性和定量分析3基因診療和基因治療專業(yè)知識 基因診斷的特點

2、 高特異性 高靈敏性 早期診斷性 應(yīng)用廣泛性4基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 基因診斷的特點4基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診斷的基本技術(shù)流程樣品抽提DNARNAcDNAPCR擴增分子雜交反轉(zhuǎn)錄合成寡核苷酸引物制備和標記探針雜交信號檢測5基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診斷的基本技術(shù)流程樣品抽提DNARNAcDNAPCR擴增基因診斷中常用的分子生物學技術(shù)核酸分子雜交（Nucleic acid hybridization） 聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR) 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP） 限制性片段長度多態(tài)性（RFLP） DNA序列測定（DNA sequencing） 生物芯片（biochips） W

3、estern免疫印跡（Western blotting） 免疫組織化學診斷 6基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診斷中常用的分子生物學技術(shù)核酸分子雜交（Nucleic PCR在基因診斷中的應(yīng)用RT-PCR熒光定量PCR多重-PCRPCR-ASO（等位基因特異性寡核苷酸探針法）PCR-SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析）PCR-RFLP（限制性片段長度多態(tài)性分析）7基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)PCR在基因診斷中的應(yīng)用RT-PCR7基因診療和基因治療專業(yè) 多重PCR 多重PCR示意圖 A：普通PCR；B：多重PCR8基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 多重PCR 多重PCR示意圖 A：普通PCR；PCR-

4、ASO(等位基因特異性寡核苷酸探針法）N：正常基因；H：雜合子基因；M：突變基因ASO1ASO2NHM9基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)PCR-ASO(等位基因特異性寡核苷酸探針法）N：正?；?； 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（single-strand conformation polymorphism, SSCP） DNA的突變造成DNA片段中堿基序列不同，變性為單鏈后在中性聚丙烯酰胺凝膠中的構(gòu)象不同（單鏈構(gòu)象多態(tài)性），利用遷移率的差別可使各種序列不同的單鏈分離開來。10基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（single-strand conPCR-SSCP分析原理示意11基因診療和基因

5、治療專業(yè)知識培訓(xùn)PCR-SSCP分析原理示意11基因診療和基因治療專業(yè)知識培 限制性片段長度多態(tài)性分析 （restriction fragment length polymorphism, RFLP） 由于DNA變異產(chǎn)生新的酶切位點或原有的酶切位點消失，在用限制性核酸內(nèi)切酶消化時產(chǎn)生不同長度或不同數(shù)量的片段。 可借助核酸分子雜交或PCR進行檢測。12基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 限制性片段長度多態(tài)性分析 （restrictionABCDEFGDEFBGCAGAATTCCTTAAGEFBG C +DAEcoR 限制性內(nèi)切酶位點的變化13基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)ABCDEFGDEFBGCA

6、GAATTCCTTAAGEF左側(cè)：正常；右側(cè)突變 序列分析用于基因診斷研究14基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)左側(cè)：正常；右側(cè)突變 序列分析用于基因診斷研究14基因診療和生物芯片（biochips）基因芯片（gene chips）蛋白質(zhì)芯片(protein chip)15基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)生物芯片（biochips）基因芯片（gene chips）基因診斷中常用的分子生物學方法比較 方法 優(yōu)點與問題 解決方案核酸分子雜交結(jié)果可靠但操作繁瑣選擇合適的探針 PCR靈敏度、特異性高設(shè)計合適的引物 SSCP操作簡便、檢出率不高選擇合適的片段 RFLP結(jié)果可靠但限制較多選擇合適的限制酶 DNA

7、測序可自動化，但不適宜廣泛使用與PCR配合使用生物芯片效率高，成本高，不適宜廣泛使用選擇合適的芯片16基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診斷中常用的分子生物學方法比較 方法 優(yōu)點與問遺傳病的基因診斷Gene Diagnosis of Hereditary Diseases17基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)遺傳病的基因診斷Gene Diagnosis of He（一）鐮狀細胞貧血病一、血紅蛋白病1.鐮狀紅細胞貧血患者基因診斷- ASO雜交法2.HBS的限制性內(nèi)切酶譜分析3.HBS的PCR-RFLP分析 18基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)（一）鐮狀細胞貧血病一、血紅蛋白病1.鐮狀紅細胞貧血患者基因

8、正常的（N）的ASO探針： 5-ACT CCT GAG GAG AAG TCT GC-3 突變的（M）的ASO探針： 5-ACT CCT GTG GAG GAAG TCT GC-31.鐮狀紅細胞貧血患者基因診斷ASO雜交法19基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)正常的（N）的ASO探針：1.鐮狀紅細胞貧血患者基因診斷A斑點雜交結(jié)果 N：正常；M突變鐮狀紅細胞貧血患者ASO雜交法檢測N-ASOM-ASO正常 突變 突變純合子 雜合子 純合子20基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)斑點雜交結(jié)果 N：正常；M突變鐮狀紅細胞貧血患者ASO雜交法53正?；?.15kb(CCT GAG G)53突變基因1.35kb

9、(CCT GTG G)鐮狀紅細胞貧病的限制性內(nèi)切酶譜分析Mst酶切位點（CCTNAGG）2. HBS的限制性內(nèi)切酶譜分析目 錄21基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)53正常基因1.15kb(CCT GAG G)530.2kb1.15kb1.35kb正常人突變攜帶者患者鐮狀紅細胞貧血病的限制性內(nèi)切酶譜分析目 錄22基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)0.2kb1.15kb1.35kb正常人突變攜帶者患者鐮狀紅3. HBS的PCR-RFLP分析 正常人的擴增產(chǎn)物經(jīng) Mst 消化可生成54bp和56bp兩個片段，而鐮狀細胞貧血癥患者的DNA片段不被酶切，仍為110bp，雜合子可見三條帶正常人雜合體患者Mark

10、er23基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)3. HBS的PCR-RFLP分析 正常人的擴增產(chǎn)物經(jīng) 傳染病的基因診斷 Gene Diagnosis of Infectious Diseases24基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)傳染病的基因診斷 Gene Diagnosis of 一、病毒性疾病甲型肝炎病毒（HAV） HAV系RNA病毒，利用RT-PCR技術(shù)可從糞便中檢測出甲型肝炎病毒的基因組RNA。 乙型肝炎病毒（HBV） 設(shè)計保守區(qū)序列引物，擴增各型HBV DNA片段；設(shè)計位于可變區(qū)的引物擴增某一亞型HBV DNA，以便分型。丙型肝炎病毒（HCV） HCV為正鏈RNA病毒，先反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再進

11、行巢式PCR檢測HCV。 25基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 一、病毒性疾病甲型肝炎病毒（HAV）25基因診療和基因治療二、細菌引起的疾病結(jié)核分枝桿菌 先設(shè)計一對特異性引物，用PCR技術(shù)擴增出一383 bp序列，再用探針雜交，靈敏度可達到100個細菌水平。幽門螺桿菌（HP） 主要采用PCR技術(shù)：檢測HP染色體DNA特異片段；檢測HP尿素酶A基因；用PCR-RFLP鑒別HP菌株。26基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)二、細菌引起的疾病結(jié)核分枝桿菌 26基因診療和基因治療專業(yè)知腫瘤的基因診斷Gene Diagnosis of Malignant Tumors27基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)腫瘤的基因

12、診斷Gene Diagnosis of Mali一、原癌基因與抑癌基因的檢測 二、常見腫瘤的基因診斷 乳腺癌 結(jié)腸癌 28基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)一、原癌基因與抑癌基因的檢測 28基因診療和基因治療專業(yè)知識一、原癌基因與抑癌基因的檢測1原癌基因的檢測 ras 基因家族由H-ras、K-ras和N-ras組成。最常見的突變是第12、13、59或第61位密碼子的點突變。 胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌以K-ras突變?yōu)橹?，如?2位密碼子突變，由編碼甘氨酸的GGT突變?yōu)門GT、GTT或GAT，少數(shù)突變?yōu)镚CT。 急性淋巴細胞白血病，慢性淋巴細胞白血病等以N-ras突變?yōu)橹?；泌尿系統(tǒng)腫瘤則以H-ras突

13、變?yōu)橹鳌?9基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)一、原癌基因與抑癌基因的檢測1原癌基因的檢測29基因診療和 PCR及PCR-SSCP分析：擴增ras 基因第12位密碼子點突變部位，再用SSCP技術(shù)進行分析，或者直接測序確定患者ras原癌基因的點突變。 核苷酸雜交技術(shù)（如ASO）：檢測ras基因第12位密碼子點突變。2. ras原癌基因突變常用的檢測方法30基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) PCR及PCR-SSCP分析：擴增ras 基因第13抑癌基因p53的檢測 p53基因以密碼子第175位、第248位、第249位、第273位及 第282位點突變率最高。在結(jié)直腸癌、乳腺癌、小細胞肺癌，都可見異常的p53

14、基因蛋白。p53的基因診斷方法有 （1）PCR-SSCP分析技術(shù) （2）DNA序列分析 （3）PCR-RFLP分析31基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)3抑癌基因p53的檢測 p53基因以密碼子第175位、第2基因治療Gene Therapy32基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因治療Gene Therapy32基因診療和基因治療專業(yè) 基因治療 指將目的基因通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)（病毒載體介導(dǎo)或者非病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)）導(dǎo)入靶細胞內(nèi)，目的基因表達產(chǎn)物對疾病起治療作用。 33基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 基因治療33基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因治療分類體細胞(somatic cell)基因治療

15、生殖細胞(germline)基因治療只限于某一體細胞的基因的改變只限于某個體的當代對缺陷的生殖細胞進行矯正當代及子代34基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因治療分類體細胞(somatic cell)基因治療只限于 一、基因治療的策略35基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 一、基因治療的策略35基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) （一）基因置換（gene replacement） 定義：指將特定的目的基因?qū)胩囟毎?，通過定位重組，導(dǎo)入的正?；?，以置換基因組內(nèi)原有的缺陷基因。 目的：將缺陷基因的異常序列進行橋正。 對缺陷基因的缺陷部位進行精確的原位修復(fù)，不涉及基因組的任何改變。 36基因診療和基因治療專

16、業(yè)知識培訓(xùn) （一）基因置換（gene replacement） 轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的載體與基因組DNA具有相同的序列。帶有目的基因的載體就能找到同源重組的位點，進行部分基因序列的交換。基因同源重組技術(shù)又稱為基因打靶（gene targeting)基因同源重組技術(shù)37基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的載體與基因組DNA具有相同的序列。帶有目的基因的載（二） 基因添加（gene augmentation） 定義: 通過導(dǎo)入外源基因使靶細胞表達其本身 不表達的基因。類型:在有缺陷基因的細胞中導(dǎo)入相應(yīng)的正?；?，而細胞內(nèi)的缺陷基因并未除去，通過導(dǎo)入正?；虻谋磉_產(chǎn)物，補償缺陷基因的功能；向靶細胞中導(dǎo)入靶細

17、胞本來不表達的基因，利用其表達產(chǎn)物達到治療疾病的目的。38基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)（二） 基因添加（gene augmentation） 定義（三）基因干預(yù)（gene interference） 定義： 采用特定的方式抑制某個基因的表達，或者通過破壞某個基因的結(jié)構(gòu)而使之不能表達，以達到治療疾病的目的。39基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)（三）基因干預(yù)（gene interference）39基定義：將“自殺”基因?qū)胨拗骷毎校@種基因編碼的酶能使無毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為細胞毒性代謝物，誘導(dǎo)靶細胞產(chǎn)生“自殺”效應(yīng)，從而達到清除腫瘤細胞的目的。應(yīng)用：是惡性腫瘤基因治療的主要方法之一。（四）自殺

18、基因治療(Suicide Gene Therapy)40基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)定義：將“自殺”基因?qū)胨拗骷毎校@種基因編碼的酶能使無毒自殺基因的作用機制 41基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)自殺基因的作用機制 41基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) （五）基因免疫治療 通過將抗癌免疫增強的細胞因子或MHC基因?qū)肽[瘤組織，以增強腫瘤微環(huán)境中的抗癌免疫反應(yīng)。 42基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) （五）基因免疫治療 通過將抗癌免疫增強二、基因轉(zhuǎn)移技術(shù) 43基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)二、基因轉(zhuǎn)移技術(shù) 43基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因治療的兩種途徑載體目的基因in vivoex viv

19、o靶細胞44基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因治療的兩種途徑載體目的基因in vivoex vivo靶 基因轉(zhuǎn)移(gene transfer)技術(shù) 1.病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 2.非病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移45基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 基因轉(zhuǎn)移(gene transfer)技術(shù) 反轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)及生活周期（1）反轉(zhuǎn)錄病毒 46基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)反轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)及生活周期（1）反轉(zhuǎn)錄病毒 46基 反轉(zhuǎn)錄病毒載體的特點 1）反轉(zhuǎn)錄病毒包膜上糖蛋白，能夠被許多哺乳動物細胞膜上的特異性受體識別，從而使反轉(zhuǎn)錄病毒攜帶的遺傳物質(zhì)高效地進入靶細胞。 2)前病毒通過LTR高效整合至靶細胞基因組中，有利

20、于外源基因在靶細胞中的永久表達。 3) 病毒顆粒以出芽的方式分泌至輔助細胞培養(yǎng)的上清液中，易于分離制備。 47基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 反轉(zhuǎn)錄病毒載體的特點 1）反轉(zhuǎn)錄病毒包膜上 反轉(zhuǎn)錄病毒載體的主要缺點 1）隨機整合，有插入突變、激活癌基因的潛在危險； 2）反轉(zhuǎn)錄病毒載體的容量較小，只能容納7kb以下的外源基因。48基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 反轉(zhuǎn)錄病毒載體的主要缺點 48基因診療 （2）腺病毒(adenovirus)載體 腺病毒是雙鏈DNA病毒。它通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞內(nèi)，然后腺病毒基因組轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)，保持在染色體外，不整合進入宿主細胞基因組中。 49基因診療和基因治療

21、專業(yè)知識培訓(xùn) （2）腺病毒(adenovirus)載體49基因診療和50基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)50基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)腺病毒的優(yōu)點基因?qū)胄矢撸瑢θ祟惏踩?；宿主范圍廣；基因轉(zhuǎn)導(dǎo)與細胞分裂無關(guān)；腺病毒載體容量較大，可插入7.5 kb外源基因。51基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)腺病毒的優(yōu)點基因?qū)胄矢?，對人類安全；宿主范圍廣；基因轉(zhuǎn)導(dǎo) 腺病毒載體缺點宿主的免疫反應(yīng)導(dǎo)致腺病毒載體表達短暫。靶向性差。 不能整合到靶細胞的基因組DNA中。分裂增殖快的細胞，導(dǎo)入的重組病毒載體，隨分裂而丟失的機會增多，表達時間相對較短。52基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 腺病毒載體缺點宿主的免疫反應(yīng)導(dǎo)

22、致腺病毒載體表達短暫。靶向（3）腺病毒相關(guān)病毒載體 單鏈線狀DNA缺陷型病毒。其基因組DNA小于5kb，無包膜，外形為裸露的20面體顆粒。AAV不能獨立復(fù)制，只有在輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒等）存在時，才能進行復(fù)制和溶細胞性感染，否則只能建立溶源性潛伏感染。AAV Virus Particles53基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)（3）腺病毒相關(guān)病毒載體 AAV Virus Pa腺病毒相關(guān)病毒載體（AAV）的特點以潛伏感染為主；病毒基因組與細胞共存；若細胞受刺激，表達應(yīng)激基因，使AAV病毒復(fù)制；產(chǎn)生子代病毒并釋放，又感染新的細胞，建立新的潛伏狀態(tài)。54基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)腺病毒相

23、關(guān)病毒載體（AAV）的特點以潛伏感染為主；54基因診 AAV載體的缺陷 AAV載體容量小，目前最多只能容納5 kb外源DNA片段；感染效率比反轉(zhuǎn)錄病毒載體低,在40%-80%的成人中存在過感染;可能會引起免疫排斥。55基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) AAV載體的缺陷 AAV載體常用基因治療載體整合致病性感染細胞克隆容量反轉(zhuǎn)錄病毒 載體隨機整合，效率高可能致病分裂細胞7kb腺病毒載體不整合，可能丟失不致病分裂細胞、非分裂細胞腺相關(guān)病毒載體定點整合(19號染色體特定區(qū)域)不致病分裂細胞、非分裂細胞5kb7.5kb56基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)常用基因治療載體整合致病性感染細胞克隆容量反轉(zhuǎn)錄病毒

24、 2.非病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng) （1）脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù) 基本原理: 利用陽離子脂質(zhì)體單體與DNA混合后，可以自動形成包埋外源DNA的脂質(zhì)體，與細胞一起孵育，即可通過細胞內(nèi)吞作用將外源DNA轉(zhuǎn)移至細胞內(nèi)，并進行表達。 脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)使用方便、成本低廉。57基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 2.非病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)57基因診療和基因治療專業(yè) 脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移示意圖58基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移示意圖58基因診療和基因治療 （2）受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)移技術(shù) 多聚陽離子與細胞配體偶聯(lián)，通過電荷相互作用與帶負電荷的DNA結(jié)合，將DNA包圍，配體暴露于表面。

25、 該復(fù)合物可被帶有特異性受體的靶細胞吞飲，從而將外源DNA導(dǎo)入靶細胞。59基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) （2）受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)移技術(shù) 多聚陽離子與細胞配體偶聯(lián)受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)移技術(shù)示意圖60基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)移技術(shù)示意圖60基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)培訓(xùn)課件 基因直接注射法的優(yōu)點排除病毒載體可能潛在的致癌性或其他副作用；導(dǎo)入的基因不需整合即可表達，避免了反轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入整合后，一旦發(fā)生副作用不易中止或逆轉(zhuǎn)的缺點；基因直接注射法可反復(fù)使用，而病毒載體則可能誘導(dǎo)體內(nèi)免疫應(yīng)答，致使反復(fù)治療效果下降。 62基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn) 基因直接注射法的

26、優(yōu)點排除病毒載體可能潛在的三、基因干預(yù) （gene interference） 63基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)63基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)（一）反義RNA（antisense RNA） 利用反義RNA對體外培養(yǎng)的細胞進行基因表達調(diào)控，通常采用的方法有兩種： （1）體外合成反義RNA，直接作用于培養(yǎng)細胞，細胞吸收RNA后，發(fā)揮作用。 （2）構(gòu)建一些能轉(zhuǎn)錄反義RNA的重組質(zhì)粒，將這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細胞中，轉(zhuǎn)錄出反義RNA而發(fā)揮作用。64基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)（一）反義RNA（antisense RNA） 64基因診療（二）干擾RNA RNA干擾（RNA interference，RNA

27、i）是一種由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象。在此過程中，與雙鏈RNA有同源序列的mRNA被降解，從而抑制該基因的表達。65基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)（二）干擾RNA RNA干擾（RNA inteRNA干擾的機制 RNA干擾過程主要有2個步驟： （1）小干擾性RNA（siRNA）（2）siRNA與細胞內(nèi)的某些酶和蛋白質(zhì)形成復(fù)合體，稱為RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNA-induced silencing complex, RISC)。 該復(fù)合體可識別與siRNA有同源序列的mRNA，并在特異的位點將該mRNA切斷 長雙鏈RNA被細胞內(nèi)的雙鏈RNA特異性核酸酶Dicer切成21-23個堿基對的短雙鏈

28、RNA，稱為小干擾性RNA（small interfering RNA，siRNA）66基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)RNA干擾的機制RNA干擾過程主要有2個步驟：（1）小干擾性RNA干擾機制示意圖 67基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)RNA干擾機制示意圖 67基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)1. 體外化學合成; 2.用質(zhì)粒載體或病毒載體可在細胞內(nèi)穩(wěn)定地生成。siRNA的產(chǎn)生68基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)1. 體外化學合成; siRNA的產(chǎn)生68基因診療和基因治療四、基因治療的應(yīng)用研究 69基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)四、基因治療的應(yīng)用研究 69基因診療和基因治療專業(yè)知識培訓(xùn)腺苷脫氨酶(ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶 (PNP)缺乏癥 珠蛋白生成障礙性貧血和血紅蛋白病 血友病和其他血漿蛋白缺乏癥