動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(三佰)課件

1、細(xì)胞工程 細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，通過 或細(xì)胞器水平上的操作，按照人們的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的一門綜合科學(xué)技術(shù)。按操作對(duì)象分植物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程研究的水平研究的目的細(xì)胞水平一、概念動(dòng)物細(xì)胞工程：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)選修3 現(xiàn)代生物科技專題教學(xué)目標(biāo)重點(diǎn)難點(diǎn)問題探討教學(xué)過程知識(shí)結(jié)構(gòu)教學(xué)反饋課后習(xí)題教學(xué)參考2.1 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)問題討論燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來治療該病人？取該

2、患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后再移植情景導(dǎo)入暢想動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織或器官，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。原理：細(xì)胞增殖概念結(jié)果：獲得細(xì)胞群1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等。）3、溫度和PH 36.5 +0.5度 ；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害 溫?zé)岬柠}水：滿足細(xì)胞對(duì)水分、溫度和無機(jī)鹽的要求，同時(shí)，無機(jī)鹽離子對(duì)維持

3、細(xì)胞生存所必需的滲透壓平衡，離子平衡，PH恒定都起著重要作用。動(dòng)物血清：提供基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂質(zhì)、核酸衍生物等，它們都是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的物質(zhì)，還可以提供激素和各種生長(zhǎng)因子，如：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素、血小板生長(zhǎng)因子等。雞胚浸出液：與動(dòng)物血清相似，含有多種促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 培養(yǎng)器皿動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)同學(xué)們閱讀課本后，簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程？ 注意關(guān)鍵詞: 細(xì)胞貼壁 接觸抑制 原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng)培養(yǎng)過程思考題1、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官做動(dòng)物培養(yǎng)材料？2、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？3、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？4、胰蛋白

4、酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？這些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間的成份是蛋白質(zhì)思考題5、細(xì)胞膜的主要成份是什么？6、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？7、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問題呢？8、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？蛋白質(zhì)和磷脂能注意時(shí)間的控制不能，因?yàn)閮傻淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近思考題11、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？12、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能有些為何能一直傳下去？上述過程中，在

5、第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過程：細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培

6、養(yǎng)。解答概念原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。解答概念原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)時(shí)間機(jī)體取出后立即培養(yǎng)將原代細(xì)胞分瓶繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)代數(shù)110代 10代以后遺傳物質(zhì)是否改變不改變改變，并有癌細(xì)胞特點(diǎn)細(xì)胞名稱細(xì)胞懸浮液細(xì)胞株、細(xì)胞系（1）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：酶、生長(zhǎng)因子、病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（2）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。（3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)和藥物。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用知識(shí)小結(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念細(xì)胞培養(yǎng)的過程細(xì)胞培養(yǎng)的條件細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用教學(xué)參考 1.進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？ 細(xì)胞間的成分主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶適宜的PH約為2，當(dāng)PH6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性，而胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境PH為7.2-8.4，多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜PH為7.2-7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性。胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶適宜用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的消化。 2.胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？ 胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白質(zhì)外，長(zhǎng)時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞