新版GMP培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案

1、新版GMP培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案新版GMP培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案新版GMP培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案V:1.0精細整理，僅供參考 新版GMP培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案日期：20 xx年X月 培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案 文件編號：VMP-VV-501-00起 草 人： 審 核 人： 批 準 人： 批準日期： 年 月 日驗證立項申請表 申請部門質量部申請日期 年 月 日驗證對象培養(yǎng)基要求完成日期 年 月 日驗證原因微生物驗證驗證類別微生物驗證為了確認所采用細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)和控制菌檢查的培養(yǎng)基是否符合微生物限度檢查法的規(guī)定要求，以保證檢驗結果的準確、可靠及檢驗方法的完整性。 申請部門負責人簽名：

2、 日期：質量部意見 簽名： 日期：驗證方案編號VMP-VV-501-00驗證報告編號VMP-VV-501REP-00負責人意見 簽名： 日期：驗證小組成員部門姓名職務備注：驗證方案審批表審批程序部門負責人簽名日期備注起草 審核批準負責人備注1.概述 通過驗證以確認所采用的培養(yǎng)基適合于細菌、霉菌及酵母菌的測定及控制菌的檢查，根據(jù)特性制訂檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進行試驗，根據(jù)驗證結果判斷是否符合驗證標準。若符合，按驗證的方法和條件進行微生物限度檢查；若不符合，重新建立制訂檢驗方法和檢驗條件，再進行驗證，直至驗證結果符合設立的驗證標準。2.驗證目的及范圍為了確認所采用細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)和

3、控制菌檢查的培養(yǎng)基是否符合微生物限度檢查法的規(guī)定要求，以保證檢驗結果的準確、可靠及檢驗方法的完整性。3.驗證風險評估對于本次驗證的執(zhí)行進行了如下的風險分析：嚴重程度 S可能性 P可檢測 D風險優(yōu)先級 RPN = SPD1低1低1高RPN7低可以接受，無需采取措施2中2中2中16RPN8中一定程度上接受，但應按風險優(yōu)先級采取措施盡可能降低3高3高3低RPN16或嚴重程度4高不能接受，盡快采取措施降低4關鍵4極高4極低步驟/單元危害S可能原因/程序失敗P現(xiàn)行控制DRPN需采取措施SPDRPN培訓驗證部分項目出現(xiàn)偏差或漂移3方案培訓不到位，方案的執(zhí)行者不熟悉方案內(nèi)容2嚴格執(zhí)行經(jīng)批準的驗證報告進行培訓

4、，并考核合格318確認按照批準的方案培訓，培訓者均熟練掌握所培訓內(nèi)容。1122檢驗過程操作不當未達到設定標準，驗證失敗。3未遵循培養(yǎng)基適用性檢查檢查操作規(guī)程，未嚴格遵循方案規(guī)定方法。2制定培養(yǎng)基適用性檢查檢查操作規(guī)程，并對規(guī)程及設立的驗證方法培訓，按規(guī)程及方案要求進行操作。318確認培養(yǎng)基適用性檢查檢查操作規(guī)程已制定并批準，確認人員已培訓；確認操作規(guī)程適用性。11224.驗證前準備驗證人員培訓：驗證報告起草人有責任在方案批準后（且在驗證實施前）對本次驗證相關人員進行培訓。培訓人員記錄見附件1。將所有的平皿和稀釋劑都應該嚴格按照相關的滅菌程序消毒，以確保其對試驗的結果沒有影響。儀器與器具：恒溫培

5、養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、凈化工作臺、無菌培養(yǎng)皿、無菌移液管。 5.驗證內(nèi)容測試環(huán)境條件要求所有檢查在環(huán)境潔凈度C級下的局部A級潔凈度的單向流空氣區(qū)域內(nèi)隔離系統(tǒng)內(nèi)進行，其全過程嚴格遵守無菌操作，能防止微生物污染。計數(shù)培養(yǎng)基驗證用菌種及培養(yǎng)基：來源： 食品藥品檢驗所 菌落計數(shù)用菌種菌種名稱內(nèi)控編號大腸埃希菌(Escherichia coli) CMCC（B）44 102E-金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC（B）26 003S-枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) CMCC（B）63 501B-白色念珠菌(Candida albicans

6、) CMCC (F) 98 001 C-黑曲霉(Aspergillus niger)CMCC(F) 98 003A-注：編號由菌種首字母-傳代代數(shù)-配制日期組成。培養(yǎng)基及其制備方法：取市售的脫水培養(yǎng)基，分別按照規(guī)定方法進行配制后灌裝于潔凈的三角燒瓶中，然后加塞滅菌，在實驗前加溫熔化備用。培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基批號配制日期有效期至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂對照培養(yǎng)基菌液制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)液1ml，加無菌氯化鈉溶液至10ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-610

7、-7，使菌數(shù)約為50100cfu/ml，做活菌計數(shù)備用。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)2448小時，取此培養(yǎng)液1ml，加無菌氯化鈉溶液至10ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-610-7，使菌數(shù)約為50100cfu/ml，做活菌計數(shù)備用。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2328培養(yǎng)57天的用35ml 含%（ml/ml）聚山梨酯80的%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾絲的無菌毛細吸管）至無菌試管中，取1ml加含%（ml/ml）聚山梨酯80的%無菌氯化鈉溶液至10ml，采用10倍遞增稀釋法，

8、稀釋至10-410-6,制成每1ml含孢子數(shù)50100cfu的孢子懸液備用。驗證方法：試驗組：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)48小時，計數(shù)、觀察菌落情況；取白色念珠菌、黑曲霉各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置2328培養(yǎng)72小時，計數(shù)、觀察菌落情況。測定結果見附件2。對照組：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固

9、，置3035培養(yǎng)48小時，計數(shù)、觀察菌落情況；取白色念珠菌、黑曲霉各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注玫瑰紅鈉瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置2328培養(yǎng)72小時，計數(shù)、觀察菌落情況。測定結果見附件2。菌回收率計算： 試驗組的菌回收率（%）=（試驗組平均菌落數(shù)/ 對照組平均菌落數(shù)）100%判定標準：菌回收率均應不低于70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。結論：對計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查的驗證結果進行評價和總結?？刂凭囵B(yǎng)基適用性檢查：驗證用菌種：來源： 食品藥品檢驗所 驗證用菌種菌種名稱內(nèi)控編號大腸埃希菌(Escherichia coli) CMCC（B）44

10、 102E-金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC（B）26 003S-培養(yǎng)基及其制備方法：取市售的脫水培養(yǎng)基，分別按照規(guī)定的方法進行配制后灌裝于潔凈的三角燒瓶中，然后加塞滅菌。在實驗前加溫熔化備用。培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基批號配制日期有效期至膽鹽乳糖培養(yǎng)基MUG培養(yǎng)基乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基膽鹽乳糖對照培養(yǎng)基MUG對照培養(yǎng)基乳糖膽鹽發(fā)酵對照培養(yǎng)基菌液制備：接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)液1ml加無菌氯化鈉溶液至10ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-410-6，使細菌數(shù)約為5001000cfu/m

11、l。驗證方法：促生長能力培養(yǎng)基：取大腸埃希菌各，分別涂布于膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基和乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基及其對照培養(yǎng)基上，在3035培養(yǎng)18小時，觀察菌落情況。測定結果見附件3。抑制能力培養(yǎng)基：取金黃色葡萄球菌各，分別涂布于膽鹽乳糖培養(yǎng)基和乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基及其對照培養(yǎng)基上，在3035培養(yǎng)18小時，觀察菌落情況。測定結果見附件3。指示能力培養(yǎng)基：取大腸埃希菌各，分別涂布于乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基及其對照培養(yǎng)基上，在3035培養(yǎng)18小時，觀察菌落情況。測定結果見附件3。判定標準：促生長能力培養(yǎng)基：試驗培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基生長的菌落大小、形態(tài)特征應一致。抑制能力培養(yǎng)基：試驗菌均不得生長。指示能力培養(yǎng)基：

12、試驗培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應情況等應一致。結論：對控制菌培養(yǎng)基適用性檢查的驗證結果進行評價和總結。變更和偏差處理： 驗證過程中如果出現(xiàn)偏差和變更，應立即通知驗小組對偏差和變更進行詳細記錄，分析偏差產(chǎn)生的根本原因并提出解決方法。所有偏差和變更得到有效處理后，驗證方可進入下一步驟。偏差處理單和變更單經(jīng)過批準后其原件必須附在驗證報告中。見附件4。驗證結果評定及結論： 質量部負責收集各項驗證試驗結果，起草驗證報告，報驗證委員會。 驗證委員會負責對驗證結果進行綜合評審，做出驗證結論，發(fā)放驗證證書，確認培養(yǎng)基適用性檢查情況。見附件5。8.擬定再驗證周期： 驗證小組根據(jù)驗證情況

13、，擬定再驗證周期，報驗證領導小組審批。9.會審及批準 會 審： 批 準：附件1培訓人員記錄表部 門培訓人員簽名簽到日期培訓師簽名日 期附件2 營養(yǎng)瓊脂計數(shù)培養(yǎng)基 結果試驗菌營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂對照回收率菌落觀察情況菌落數(shù)菌落數(shù)大腸埃希菌1122平均平均金黃色葡萄球菌1122平均平均枯草芽孢桿菌1122平均平均 結果試驗菌玫瑰紅鈉瓊脂玫瑰紅鈉瓊脂對照回收率菌落觀察情況菌落數(shù)菌落數(shù)白色念珠菌1122平均平均黑曲霉1122平均平均驗證結果評定操作人日期復核人日期附件3 控制菌檢查用培養(yǎng)基 項目結果促生長能力抑制能力指示能力膽鹽乳糖培養(yǎng)基膽鹽乳糖對照培養(yǎng)基MUG培養(yǎng)基MUG對照培養(yǎng)基乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基乳糖膽鹽發(fā)酵對照培養(yǎng)基驗證結果評定操作人日期復核人日期附件4偏差處理與變更記錄驗證項目名稱驗證項目編號偏差說明：可能的原因：偏差分類：重大 小理由：采取措施：（如需要另附文件）結果：（如需要另附文件）建議（如需要另附文件）接受偏差不接受偏差理由：（如需要另附文件）批準人： 日期：附件5 驗證證書根據(jù)藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范（2010年版）要求，對 驗證。經(jīng)本公司有關部門進行驗證審查，結果符合驗證要求，批準使用。特發(fā)此證。驗證項目名稱： 驗證方案編碼： 驗證完成日期： 驗證證書根據(jù)藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范（2010年版）要求，對 驗證。經(jīng)本公司有關部門進行驗證審查，結果符