生物采樣課件

1、醫(yī)院環(huán)境微生物采樣方法、檢驗(yàn)技術(shù)與注意事項(xiàng) 環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)：包括對(duì)空氣、物體表面和醫(yī)護(hù)人員手的監(jiān)測(cè)。 醫(yī)院應(yīng)每月對(duì)手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房室（ICU）、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒病房、血液透析室、供應(yīng)室無(wú)菌區(qū)、治療室、換藥室等重點(diǎn)部門(mén)進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)。當(dāng)有醫(yī)院感染流行，懷疑與醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)因素有關(guān)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。 空氣微生物采樣及檢驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑采樣及檢驗(yàn)方法無(wú)菌物品微生物采樣及檢驗(yàn)方法內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)空氣微生物采樣方法一、沉降法 二、浮游菌測(cè)定法沉降平皿法的空氣采樣（1）選擇有代表性的采樣點(diǎn)，在1.5米高處放置含營(yíng)養(yǎng)瓊脂的平皿。

2、室內(nèi)面積不超過(guò)30m2，在對(duì)角線(xiàn)上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1m；室內(nèi)面積超過(guò)30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點(diǎn)，周?chē)?點(diǎn)距墻1m。（2）打開(kāi)皿蓋（將皿蓋置于平皿底下，不可仰放，以防污染），將有培養(yǎng)基的平皿，暴露于空氣5分鐘（視空氣清潔程度而定），采樣畢，合上皿蓋，記錄采樣時(shí)間。（3）將已采集的培養(yǎng)基在6h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，置于37溫箱培養(yǎng)48小時(shí)。（4）記錄5個(gè)平皿的菌落總數(shù)。 結(jié)果判定類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)10cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格；類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)200cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格；類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)500cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格。 本院空氣培養(yǎng)菌落數(shù)表示方法

3、一般科室：Ncfu/直徑9cm平皿.5min手術(shù)室、產(chǎn)房和人流室：Ncfu/直徑9cm平皿.15minN代表每個(gè)平皿的菌落數(shù)注意事項(xiàng) 采樣前，關(guān)好門(mén)、窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止10min后再進(jìn)行采樣。缺點(diǎn)1、平板沉降法屬重心沉降，此法只能采集10m左右的粒子，而且不能作精確定量。因?yàn)榫蛦蝹€(gè)細(xì)菌而言，最大只有幾個(gè)m，小到1 m以下，所以它只能采集到附著于各種塵埃和氣溶膠表面的細(xì)菌，難以采集到懸浮的細(xì)菌，而經(jīng)空氣感染更多的是由于懸浮于空氣中的細(xì)菌所致。缺點(diǎn)2、采樣時(shí)受周?chē)鷼饬?、粒?jīng)大小和粒子沉降速度等因素影響，不能準(zhǔn)確的反應(yīng)空氣細(xì)菌的分布水平。3、奧梅良斯基公式規(guī)定：假如100cm2的平皿在空氣

4、中暴露5min即相當(dāng)于10L空氣中的細(xì)菌數(shù)，此值是一假定值，無(wú)法定量，所以公式中的矯正數(shù)也是很不準(zhǔn)確的。撞擊式空氣微生物采樣法 采樣器分別置于室內(nèi)對(duì)角和中央共3個(gè)點(diǎn)。設(shè)置采樣時(shí)間為每點(diǎn)2min，空氣流量為25lmin，細(xì)菌培養(yǎng)方法同沉降法。計(jì)算公式細(xì)菌數(shù)(cfu/m3)=n/FT1000 F為采氣流量（Lmin）； T為采樣時(shí)間（min）； n為平均菌落數(shù)（CfU平皿）。FA-1型多級(jí)撞擊式空氣微生物采樣器整個(gè)儀器是由采樣器以及抽氣泵、流量計(jì)、玻璃平皿所組成。 采樣器是6層有微小孔眼的鋁合金圓盤(pán)。圓盤(pán)下放瓊脂平皿，每圓盤(pán)間有密封膠圈，在通過(guò)三個(gè)彈簧卡子把圓盤(pán)牢固地聯(lián)在一起。每個(gè)圓盤(pán)上有400個(gè)

5、成環(huán)行排列、逐層減小、尺寸精確的小孔，標(biāo)準(zhǔn)采樣流量為1立方呎（28.3L/min）。FA-2型撞擊式空氣微生物采樣器 該采樣器是依據(jù)安德森采樣器而設(shè)計(jì)制造的，它模擬人體呼吸道的解剖結(jié)構(gòu)及其空氣動(dòng)力學(xué)特征，采用慣性撞擊原理，將懸浮在空氣中的微生物粒子，按大小等級(jí)分別收集在采樣介質(zhì)表面上，然后供培養(yǎng)及做進(jìn)一步的微生物分析，求出空氣微生物粒子數(shù)量及其大小分布的特征。浮游菌測(cè)定法撞擊式空氣微生物采樣法離心式空氣微生物采樣法洗刷空氣微生物采樣法（薄膜過(guò)濾器法）過(guò)濾空氣微生物采樣法溫差空氣微生物采樣法靜電或沖擊空氣微生物采樣菌落計(jì)算菌落形成單位CFU/m3=瓊脂培養(yǎng)基條上的菌落數(shù)40采樣時(shí)間（min）瓊脂

6、培養(yǎng)基的表面積為341cm2。 浮游菌測(cè)定法撞擊式空氣微生物采樣法離心式空氣微生物采樣法洗刷空氣微生物采樣法（薄膜過(guò)濾器法）過(guò)濾空氣微生物采樣法（玻璃纖維）溫差空氣微生物采樣法（熱敏電阻）沖擊空氣微生物采樣第一次國(guó)際空氣生物學(xué)會(huì)議上，沖擊法（AGI）采樣器被推薦為標(biāo)準(zhǔn)采樣器。沖擊法（AGI）根據(jù)沖擊原理當(dāng)氣流以足夠的線(xiàn)速度沖擊采樣器中液體及附近表面時(shí)氣溶膠粒子可捕獲在液體中。所測(cè)定的細(xì)菌濃度較為準(zhǔn)確。AGI沖擊法捕獲率約為撞擊法4倍，平皿沉降法的3倍大容量采樣器大容量采樣器的采樣流量為7001000升/分，主要是為了采集空氣中含量較少的病原體微生物（如某些病毒等），以及潔凈環(huán)境（如制藥車(chē)間、病

7、房等）微生物氣溶膠粒子，這些環(huán)境中氣溶膠粒子濃度很低，甚至在幾立方米的空氣中才有幾個(gè)粒子。提高采樣的流量，增大對(duì)低濃度病原微生物氣溶膠粒子，特別是一些病毒粒子的捕獲機(jī)會(huì)，以追蹤空氣傳播的來(lái)源?？諝庵袘腋∥⑸餃y(cè)定方法機(jī)理測(cè)定方法主要測(cè)定目的主要設(shè)備沉降菌落法一般微生物和特殊微生物的污染平板瓊脂培養(yǎng)基撞擊狹縫法針孔法多孔板法離心法懸浮微生物一般污染懸浮微生物一般污染狹縫采樣器針孔采樣器篩式采樣器設(shè)備本身撞擊洗刷撞擊式薄膜過(guò)濾器法懸浮微生物一般污染撞擊式采樣器微孔濾膜過(guò)濾器過(guò)濾玻璃纖維玻璃纖維過(guò)濾器溫差溫差法熱敏電阻靜電或沖擊大容量法設(shè)備本身浮游菌測(cè)定法優(yōu)點(diǎn)1、能夠采集浮游在空氣中的微生物粒子，這

8、種粒子可隨人們呼吸運(yùn)動(dòng)進(jìn)入呼吸道內(nèi)，因而具有衛(wèi)生學(xué)意義。2、采樣效率高，采樣量準(zhǔn)確，采樣時(shí)不受粒經(jīng)大小、沉降速度和氣流影響，能準(zhǔn)確的表示出空氣中細(xì)菌的實(shí)際含量?？諝馕⑸锊蓸蛹皺z驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑采樣及檢驗(yàn)方法無(wú)菌物品微生物采樣及檢驗(yàn)方法內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)采樣時(shí)間選擇消毒處理后4h內(nèi)進(jìn)行采樣 采樣方法 用5cm5cm滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積100cm2，連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭于1支；在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗

9、脫液試管內(nèi)，立即送檢。 門(mén)把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。 檢驗(yàn)方法 采樣結(jié)果計(jì)算方法： 細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)=平板上菌落數(shù)稀釋倍數(shù)/采樣面積(cm2) 將采樣管用力振打80次以上，按照污染程度作相應(yīng)的稀釋后用無(wú)菌吸管分別吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿、蛋白胨水和肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，加人已熔化的45-48的營(yíng)養(yǎng)瓊脂18-20ml于滅菌平皿中，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。結(jié)果判定 、類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)5cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)10cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。lV類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)15cfu/Cm2，并未

10、檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門(mén)氏菌。 致病菌：金黃色葡萄球菌，乙型溶血性鏈球菌和沙門(mén)氏菌戳印法 在檢驗(yàn)時(shí)，只需在現(xiàn)場(chǎng)打開(kāi)皿蓋，將略突出于培養(yǎng)皿口平面的培養(yǎng)基輕輕往被檢物品表面一按，蓋上皿蓋，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一定時(shí)間后計(jì)菌落數(shù)。此數(shù)值即為10cm2被檢物品表面上的細(xì)菌數(shù)，無(wú)需任何換算即可同消毒標(biāo)準(zhǔn)和公共場(chǎng)所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)加以比較。十分快捷、方便，甚至沒(méi)有無(wú)菌室和專(zhuān)門(mén)檢驗(yàn)人員也可順利完成操作。是目前最理想的用于公共場(chǎng)所物品表面細(xì)菌污染程度監(jiān)測(cè)的方法?？諝馕⑸锊蓸蛹皺z驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑采樣及

11、檢驗(yàn)方法無(wú)菌物品微生物采樣及檢驗(yàn)方法內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)手的采樣方法被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。檢驗(yàn)方法同物體表面采樣后的檢驗(yàn)方法一、棉簽采樣法二、指壓法取一塊普通血瓊脂平板，把待檢查手的十個(gè)手指的指腹部分別按壓在平板表面。然后把平板放入37溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h，計(jì)算菌落數(shù)。三、洗脫法該法較其它兩種方法采菌量多，但操作較復(fù)雜。取滅菌生理鹽水200ml300ml，倒入適當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，將待檢查的手浸

12、入生理鹽水中，反復(fù)沖洗1min2min。然后將沖洗后的水用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾，過(guò)濾完畢，將濾膜貼于普通瓊脂培養(yǎng)基上，37培養(yǎng)24h，計(jì)算菌落數(shù)。皮膚粘膜采樣方法 用5cm5crn滅菌現(xiàn)格板，放在被檢皮膚處；用沒(méi)有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。 檢驗(yàn)方法同物體表面采樣的檢驗(yàn)方法結(jié)果判定 、類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)5Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)10Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒

13、合格。lV類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)15Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門(mén)氏菌及其它致病菌。 致病菌：金黃色葡萄球菌，大腸桿菌（手術(shù)室，產(chǎn)房，人流室等還不可檢出銅綠假單胞菌）空氣微生物采樣及檢驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑采樣及檢驗(yàn)方法無(wú)菌物品微生物采樣及檢驗(yàn)方法內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)采樣量及保存液種類(lèi)在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌吸管吸取1ml被檢樣液，加入9ml稀釋液中混均。醇類(lèi)與酚類(lèi)消毒劑，稀釋液用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯即可；含氯消毒劑、含碘消毒劑、過(guò)氧化物消毒劑，需在肉湯中加入01硫代硫酸鈉；

14、洗必泰、季銨鹽類(lèi)消毒劑，需在肉湯中加3（W/V）吐溫80和0.3%卵磷脂；醛類(lèi)消毒劑，需在肉湯中加入0.3甘氨酸；含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入3（ W/V）吐溫80，以中和被檢藥液的殘效作用。本院用于稀釋消毒劑的中和劑肉湯培養(yǎng)基含有上述所需成分。檢驗(yàn)方法同物體表面采樣的檢驗(yàn)方法結(jié)果分析采樣結(jié)果計(jì)算： 消毒液染菌量（cfu/ml)=每個(gè)平板上菌落數(shù)10平板上有菌生長(zhǎng)，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個(gè)平板的落數(shù)在10個(gè)以下，仍可用于消毒處理（但個(gè)能用于滅菌），若每個(gè)平板菌落數(shù)超過(guò)10個(gè)，說(shuō)明每毫升被檢樣液含菌量己超過(guò)100個(gè)，即不宜再用?？諝馕⑸锊蓸蛹皺z驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及

15、檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑采樣及檢驗(yàn)方法無(wú)菌物品微生物采樣及檢驗(yàn)方法內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)無(wú)菌物品采樣方法無(wú)菌物品包括消毒滅菌后的手術(shù)器械，治療器械，一次性使用的棉簽，手套等。采樣方法：用浸泡有無(wú)菌生理鹽水的棉簽在無(wú)菌物品上橫豎來(lái)回涂擦，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。檢測(cè)方法：同物體表表面采樣后的檢測(cè)方法。結(jié)果分析：無(wú)菌物品不能檢出微生物，否則說(shuō)明消毒不合格，如一次性物品檢出微生物，說(shuō)明已受污染或已過(guò)期?？諝馕⑸锊蓸蛹皺z驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑采樣及檢驗(yàn)方法無(wú)菌物品微生物采樣及檢驗(yàn)方法內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)采樣時(shí)間： 在消毒滅菌后、使用前進(jìn)行采樣。內(nèi)窺鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)采樣方法：