免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件

1、免疫分析技術(shù)之ELISA王娟聰明出于勤奮，天才在于積累免疫分析技術(shù)之ELISA王娟聰明出于勤奮，天才在于積累弟度分祈技術(shù)之 ELISA廣東省功能蛋白質(zhì)組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室王娟弟度分祈技術(shù)之 ELISA免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞水平分子水平基因水平體外(或體內(nèi))測(cè)定測(cè)定各類免疫球蛋白、測(cè)定免疫應(yīng)答相關(guān)基各類細(xì)胞及其亞群的補(bǔ)體、細(xì)胞因子及其因的表達(dá)與調(diào)控、免數(shù)量和效應(yīng),從而受體、黏附分子的表疫分子的遺傳多態(tài)性解機(jī)體的細(xì)胞免疫水達(dá)水平和生物活性及基因型別分析從而了解機(jī)體免疫因子間的相互關(guān)系免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)ELISA概念酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)( Enzyme Linked ImmunoSorbent assay, ELIS

2、A),是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques)上發(fā)展起來(lái)的種新型免疫測(cè)定技術(shù),基礎(chǔ)是:抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。ELISA概念酶免疫測(cè)定類型均相酶免疫測(cè)定酶免疫測(cè)定非均相酶免疫測(cè)定液相酶免疫測(cè)定這種固相酶免疫測(cè)定方法在1971年最初建立時(shí)稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定,簡(jiǎn)稱 JELISA酶免疫測(cè)定類型1.1抗原抗體反應(yīng)1.1.1可逆性抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡,其反應(yīng)式為Ag+AbAg:Ab抗體的親和力( affinity),

3、可以用平衡常數(shù)K表示K=AgAb/AAb,AgAb的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合兩者結(jié)合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性1.1抗原抗體反應(yīng)1.1.2特異性抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點(diǎn)之間?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型互補(bǔ)關(guān)系,具有高度的特異性。測(cè)定某一特定的物質(zhì),而不需先分離待檢物1.1.2特異性113敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/m水平酶反應(yīng)測(cè)定法的敏感度約為5-10g/ml免疫測(cè)定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿標(biāo)記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍,達(dá)ng/m水平例如,HBsA9,其敏感度可達(dá)01ng

4、/113敏感性1.2免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣1.2免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用基本原理使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi),最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的

5、比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析由于酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度?；驹鞥LISA的類型ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑(1)固相的抗原或抗體,即免疫吸附劑( immunosorbent);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為結(jié)合物”( conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法ELISA的類型免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之E

6、LISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析

7、技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件

8、免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共10

9、6張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELIS

10、A共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件免疫分析技術(shù)之ELISA共106張課件謝謝！21、要知道對(duì)好事的稱頌過(guò)于夸大，也會(huì)招來(lái)人們的反感輕蔑和嫉妒。培根22、業(yè)精于勤，荒于嬉；行成