細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究課件

細(xì)胞(xìbāo)自噬介紹與相關(guān)研究——崔龍萍第一頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究程序性死亡和非程序性死亡細(xì)胞凋亡(diāowánɡ)：稱為Ⅰ型程序性細(xì)胞死亡。細(xì)胞壞死：是細(xì)胞對(duì)外界損傷刺激的一種非程序性死亡方式。細(xì)胞自噬？細(xì)胞(xìbāo)死亡三者有什么(shénme)區(qū)別呢？第二頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究凋亡：細(xì)胞皺縮、體積縮小；部分細(xì)胞器、核糖體和核碎片被細(xì)胞膜包裹形成凋亡小體，從細(xì)胞表面出芽脫落，最后被具有吞噬功能的細(xì)胞吞噬；磷脂酰絲氨酸外翻；細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮、邊緣化、染色質(zhì)DNA斷裂。壞死：細(xì)胞脹大，胞膜破裂，細(xì)胞內(nèi)容物外溢，核變化較慢，DNA降解不充分，引起局部嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。自噬：部分細(xì)胞器腫大，在細(xì)胞質(zhì)中形成包裹細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物的雙層膜囊泡結(jié)構(gòu)，再與溶酶體結(jié)合(jiéhé)實(shí)現(xiàn)內(nèi)容物的降解。第三頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究研究檢測(cè)方法信號(hào)通路分子調(diào)控形成過(guò)程分類生物學(xué)意義概念自噬目錄第四頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬（autophagy）：又叫做Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡,是指細(xì)胞利用溶酶體降解、選擇性地清除自身受損、衰老或過(guò)剩的生物大分子和細(xì)胞器，釋放(shìfàng)出游離小分子供細(xì)胞回收利用的正常動(dòng)態(tài)生命過(guò)程。被認(rèn)為是機(jī)體的一種自我保護(hù)機(jī)制自噬概念(gàiniàn)第五頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究1、應(yīng)激功能是細(xì)胞在饑餓條件下的一種存活機(jī)制2、防御功能當(dāng)細(xì)胞受到致病性微生物感染時(shí)，可起到防御作用3、維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)在骨骼肌和心肌可幫助細(xì)胞漿成分進(jìn)行更新4、延長(zhǎng)壽命如果細(xì)胞自噬受損衰竭，細(xì)胞損傷就會(huì)堆積、累加，產(chǎn)生老化。長(zhǎng)期適當(dāng)減少熱量的攝入，可以延長(zhǎng)壽命。5、控制細(xì)胞死亡及癌癥決定(juédìng)細(xì)胞自噬導(dǎo)致細(xì)胞死亡，還是維持細(xì)胞存活的因子尚不完全清楚。所以，細(xì)胞自噬與細(xì)胞死亡之間的因果關(guān)系還沒(méi)有最后定論。生物學(xué)意義(yìyì)第六頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究1956年,Clark和Novikoff用電鏡在鼠腎組織中觀察到包含線粒體等胞質(zhì)結(jié)構(gòu)的膜性結(jié)構(gòu)。將其命名為致密小體，且在這個(gè)獨(dú)立的膜結(jié)構(gòu)中發(fā)現(xiàn)了溶酶體酶

1962年，Ashford和Porter在老鼠的肝細(xì)胞中，觀察到包含半消化的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的膜囊泡結(jié)構(gòu)，且在囊泡內(nèi)發(fā)現(xiàn)了胰高血糖素1963年，Duve將這種細(xì)胞中存在的包裹細(xì)胞質(zhì)的膜泡發(fā)生現(xiàn)象定義為自噬。并指出自噬發(fā)生在正常細(xì)胞內(nèi)且與溶酶體相關(guān)聯(lián)1997年，第一個(gè)酵母菌自噬基因被日本(rìběn)科學(xué)家克隆得到，命名為ATG11998年，第一個(gè)哺乳動(dòng)物自噬基因被美國(guó)科學(xué)家克隆得到，命名為Beclin12007年，召開(kāi)了第一次國(guó)際自噬會(huì)議2007-至今，隨著越來(lái)越多的自噬基因被克隆，對(duì)于自噬的研究報(bào)道也越來(lái)越多，尤其是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞自噬方面的研究自噬發(fā)展(fāzhǎn)第七頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究分子伴侶介導(dǎo)自噬（CMA,chaperone-mediatedautophagy）——CMA不涉及囊泡的運(yùn)輸，而是通過(guò)有著特異性肽鏈的細(xì)胞質(zhì)蛋白在分子伴侶復(fù)合物的作用下與溶酶體膜蛋白感受器Lamp2a結(jié)合后進(jìn)入溶酶體腔，然后被溶酶體酶消化。小/微自噬（Microautophagy）——溶酶體/液泡表面的膜直接吞沒(méi)某些細(xì)胞器或者蛋白，然后膜內(nèi)陷、脫離(tuōlí)，最終形成一個(gè)包含了細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物的內(nèi)部囊泡。大/巨/宏自噬（Macroautophagy）——是我們平常所說(shuō)的自噬，通過(guò)形成具有雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體包裹胞內(nèi)物質(zhì)，最后自噬體與溶酶體融合。包含杯狀體（Phagophore）、自噬體（Autophago-some）、自噬溶酶體（Autolysosome）的形成和囊泡內(nèi)含物的降解（Degradation）四個(gè)過(guò)程自噬分類(fēnlèi)第八頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究形成(xíngchéng)過(guò)程第九頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究

Atg1/ULK1激酶(jīméi)復(fù)合物

（自噬的誘導(dǎo)階段，受mTOR的調(diào)控）Atg1能與Atg13、Vac8、Atg17和Cvt9等蛋白形成Atg1復(fù)合物。營(yíng)養(yǎng)(yíngyǎng)條件充足時(shí)，Atg13過(guò)度磷酸化，與Atg1的結(jié)合受阻，然后Atg13與Vac8結(jié)合，Atg1與Cvt9結(jié)合后一起調(diào)控Cvt途徑。相反，營(yíng)養(yǎng)(yíngyǎng)不足時(shí)，Atg13部分去磷酸化形成Atg13-Atg1復(fù)合物，Atg17再與Atg1-Atg13復(fù)合物的Atg1結(jié)合形成復(fù)合物參與自噬。ULK1是Atg1在人類細(xì)胞中的同源物分子調(diào)控第十頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究?jī)蓷l泛素化系統(tǒng)

（自噬體的形成(xíngchéng)：囊泡的延伸和完成）

Atg12-Atg5?Atg16泛素激活酶E1（Atg7）的半胱氨酸殘基，在ATP的作用下，與Atg12碳末端的甘氨酸殘基之間形成(xíngchéng)硫酯鍵。泛素激活酶E2（Atg10）的半胱氨酸與Atg12碳末端的甘氨酸殘基形成新的硫脂鍵，釋放出Atg7。最終，Atg12碳末端的甘氨酸與Atg5的ε-賴氨酸氨基形成異肽鍵，釋放出Atg10，形成Atg12-Atg5復(fù)合物（不可逆）。Atg16碳末端的螺旋區(qū)寡聚化后與Atg12-Atg5復(fù)合物結(jié)合，形成一個(gè)350KDa大小的復(fù)合物（Atg12-Atg5?Atg16），Atg16僅僅與Atg5結(jié)合，并不結(jié)合Atg12。Atg12-Atg5?Atg16復(fù)合物對(duì)于隔離膜的延伸是必不可少的。分子調(diào)控第十一頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究Atg8/LC3-PE(磷脂酰乙醇胺)復(fù)合物半胱氨酸蛋白酶Atg4作用于Atg8，Atg8失去一個(gè)精氨酸殘基，暴露出碳末端的甘氨酸殘基后，在ATP的作用下，被Atg7（E1）激活，然后再與Atg3（E2）結(jié)合，形成Atg8復(fù)合物。最后，Atg8不再與其它蛋白結(jié)合，而是與PE結(jié)合形成Atg8-PE復(fù)合物。Atg8與PE的酯化反應(yīng)，使Atg8的構(gòu)象(ɡòuxiànɡ)發(fā)生變化，參與自噬的膜動(dòng)力學(xué)。Atg4可以破壞脂蛋白的連接，使Atg8-PE去結(jié)合，從而使胞漿中Atg8的量增加。Atg8-PE的結(jié)合與去結(jié)合之間的循環(huán)對(duì)于自噬的正常過(guò)程非常重要。LC3（微管相關(guān)蛋白）是Atg8在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源物，因此，LC3可用來(lái)作為檢測(cè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞自噬的標(biāo)志性蛋白。分子調(diào)控第十二頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究

Vps34/PI3K–Atg6/beclin1

(自噬體形成(xíngchéng)的早期階段有著重要的作用)Vps34與蛋白激酶Vps15結(jié)合形成穩(wěn)定的Vps34-Vps15復(fù)合物，定位于細(xì)胞質(zhì)膜上。Vps34-Vps15復(fù)合物存在兩種形式，涉及多種細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)途徑(tújìng)。Vps34-Vps15與Atg6和Atg14組成的I型復(fù)合物調(diào)控自噬。Vps34-Vps15與Atg6和Vps38組成參與PAS途徑(tújìng)的II型復(fù)合物。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，PI3K和beclin1分別是酵母菌Vps34和Atg6對(duì)應(yīng)的同源物。分子調(diào)控第十三頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究信號(hào)通路第十四頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究mTOR/TOR的介紹(jièshào)mTORC1信號(hào)(xìnhào)通路是多條信號(hào)(xìnhào)通路的匯聚點(diǎn)，通過(guò)對(duì)上、下游信號(hào)(xìnhào)的來(lái)傳導(dǎo)影響細(xì)胞自噬，是目前研究最多的信號(hào)(xìnhào)通路。信號(hào)通路mTORmLST8PRAS40RaptormTORC1mTORC2mTOR細(xì)胞生長(zhǎng)細(xì)胞凋亡細(xì)胞自噬細(xì)胞骨架蛋白構(gòu)建

細(xì)胞存活自噬第十五頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究PI3KⅠ/Akt/mTOR通路(tōnglù)激活的ClassⅠPI3K能在細(xì)胞中產(chǎn)生第二信使PIP3，PIP3在磷脂酰肌醇脂依賴性蛋白激酶1(PDK1)的協(xié)助(xiézhù)下，激活A(yù)KT。激活的AKT能夠抑制TSC1/2復(fù)合物，從而激活mTOR,抑制細(xì)胞自噬。胰島素樣生長(zhǎng)因子IGF1就是通過(guò)PI3K/Akt/mTORC1通路調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬水平的信號(hào)通路第十六頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究AMPK通路(tōnglù)AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)是能量代謝變化的感受器,在自噬發(fā)生的調(diào)控中也發(fā)揮著重要的作用。低ATP水平狀態(tài)下(如饑餓或缺氧)AMPK能感受AMP的水平變化而激活,從而磷酸化TSC2,加劇TSC1/2對(duì)Rheb的抑制,最終使mTOR的活性被抑制,誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬AMPK還可以通過(guò)直接磷酸化Raptor，使Raptor脫離mTORC1復(fù)合體，進(jìn)而抑制mTORCI的活性營(yíng)養(yǎng)缺乏會(huì)促進(jìn)AMPK與ULK1的PS結(jié)構(gòu)域結(jié)合，使ULK1的Ser/Thr豐富(fēngfù)區(qū)多位點(diǎn)磷酸化，從而激活ULK1，直接調(diào)節(jié)自噬。信號(hào)通路第十七頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究p53通路(tōnglù)p53在細(xì)胞核中：(1)p53能通過(guò)sestrin1/2蛋白激活A(yù)MPK-mTORC1信號(hào)(xìnhào)通路，從而抑制mTORC1，上調(diào)細(xì)胞自噬水平。(2)p53能通過(guò)激活DAPK1，磷酸化Beclin-1,促進(jìn)細(xì)胞自噬。(3)p53能通過(guò)激活抗凋亡蛋白BCL-2家族(Bad、PUMA、Bax、BNIP3)，解除Bcl-2/Bcl-xL與Beclin-1之間的抑制作用而上調(diào)細(xì)胞自噬(4)p53能激活DRAM1(損傷相關(guān)自噬調(diào)節(jié)因子)，通過(guò)編碼一種溶酶體蛋白，從而上調(diào)細(xì)胞的自噬水平p53在細(xì)胞質(zhì)中：p53缺失的癌細(xì)胞中，細(xì)胞自噬水平上調(diào)，且細(xì)胞質(zhì)中重新載入p53能下調(diào)細(xì)胞自噬水平。因此，p53在細(xì)胞質(zhì)中能夠發(fā)揮抑制細(xì)胞自噬水平的功能。信號(hào)通路p53是一種(yīzhǒnɡ)重要的抑癌基因，對(duì)自噬的調(diào)控作用是雙重的，取決于在細(xì)胞內(nèi)的定位，核內(nèi)p53促進(jìn)自噬，胞漿內(nèi)p53抑制自噬。第十八頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究AminoAcids通路(tōnglù)氨基酸代謝與mTORC1：氨基酸作為(zuòwéi)細(xì)胞自噬的終產(chǎn)物可負(fù)反饋調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬，同時(shí)外源性的支鏈氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)的攝入也能影響細(xì)胞自噬的水平。研究表明，當(dāng)亮氨酸濃度升高時(shí)，能激活mTORC1，抑制細(xì)胞自噬信號(hào)通路第十九頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究PI3KⅢ通路(tōnglù)Ⅲ型磷脂酞肌醇3磷酸激酶（PI3KⅢ)是一個(gè)正調(diào)控蛋白(dànbái)，它能夠磷酸化磷脂酞肌醇(PI),生成3-磷酸磷脂酞肌醇（PI3P)，而后PI3P利用胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)形成自噬體膜。PI3KⅢ也能與Beclin-1形成復(fù)合體，該復(fù)合物在自噬體形成的起始階段起重要作用。信號(hào)通路第二十頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究形態(tài)學(xué)方法透射電鏡（鏈接）Monodansylcadaverine(MDC)染色（鏈接）Autophagy的特異(tèyì)標(biāo)志物熒光定位（鏈接）LC3-II的檢測(cè)（鏈接）其它自噬調(diào)控物檢測(cè)方法第二十一頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究透射電鏡細(xì)胞的自噬現(xiàn)象最初(zuìchū)也是通過(guò)電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)的。自噬體：由包裹未吞噬降解的胞漿物質(zhì)、細(xì)胞器的雙層膜結(jié)構(gòu)組成。自噬溶酶體：由單層膜結(jié)構(gòu)組成，其中包裹著處于不同降解階段的胞漿成分。檢測(cè)方法第二十二頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究MDC

染色(rǎnsè)Monodansylcadaverine(MDC，單丹磺酰戊二胺)是一種熒光染料，被用作自噬泡的示蹤劑MDC陽(yáng)性信號(hào)主要聚集于核周區(qū)域，而自噬體卻均勻分布于胞漿內(nèi)。MDC是嗜酸性染色劑,可能顯示晚期內(nèi)吞體，兩性體和溶酶體陣,而自噬體多呈中性，故自噬前體和有的自噬體可不(kěbù)被著色,故MDC染色的特異性不高檢測(cè)方法第二十三頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究熒光(yíngguāng)定位

GFP-LC3

單熒光自噬指示體系：無(wú)自噬時(shí)，GFP-LC3融合蛋白彌散在胞漿中；自噬形成時(shí)，GFP-LC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個(gè)明亮的綠色熒光斑點(diǎn)，一個(gè)斑點(diǎn)相當(dāng)于一個(gè)自噬體，可以通過(guò)計(jì)數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)自噬活性的高低。但是綠色斑點(diǎn)增多并不一定代表自噬活性增強(qiáng)，也有可能是自噬溶酶體降解途徑受阻。mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬指示體系：GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是穩(wěn)定的熒光表達(dá)(biǎodá)基團(tuán)，不受外界影響。由于自噬小體進(jìn)入第二階段后，與溶酶體進(jìn)行融合，形成自噬溶酶體。自噬溶酶體由于溶酶體內(nèi)部的酸性環(huán)境，可以導(dǎo)致PH下降，GFP淬滅，因此，GFP的減弱可指示自噬溶酶體形成的順利程度，GFP越少，則從自噬小體到自噬溶酶體階段流通得越順暢。反之，自噬小體和溶酶體融合被抑制，自噬溶酶體進(jìn)程受阻。mRFP是一直穩(wěn)定表達(dá)的，因而可以通過(guò)GFP與mRFP的亮點(diǎn)比例來(lái)評(píng)價(jià)自噬流進(jìn)程。檢測(cè)方法第二十四頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究LC3-II的檢測(cè)(jiǎncè)（westernblot）

細(xì)胞中新合成的LC3經(jīng)過(guò)加工，成為胞漿可溶性LC3-I，后者經(jīng)泛素樣加工修飾過(guò)程，與自噬泡膜表面的磷脂酰乙醇胺（PE）結(jié)合，稱為L(zhǎng)C3-II。LC3-II含量的多少在某種程度上反映了細(xì)胞的自噬活性。利用WesternBlot檢測(cè)LC3-II/I比值(bǐzhí)的變化以評(píng)價(jià)自噬形成。

檢測(cè)方法第二十五頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究正常培養(yǎng)的細(xì)胞自噬活性很低，不適于觀察，因此，必須對(duì)自噬進(jìn)行人工干預(yù)和調(diào)節(jié)誘導(dǎo)自噬：雷帕霉素或者饑餓抑制自噬：3-MA（3-Methyladenine，3-甲基腺嘌呤，是磷脂酰肌醇3激酶的抑制劑，可特異性阻斷Autophagy中自噬泡與溶酶體的融合）、CQ(chloroquine,氯喹，CQ處理后的細(xì)胞，其溶酶體中的PH升高，導(dǎo)致(dǎozhì)酸性水解酶的活性喪失。影響自噬體與溶酶體的融合或自噬體與溶酶體融合成自噬溶酶體后就得不到及時(shí)的降解，來(lái)阻斷自噬過(guò)程，因此，LC3Ⅱ得不到釋放，就會(huì)出現(xiàn)LC3Ⅱ的累積。)研究(yánjiū)方法第二十六頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬與惡性腫瘤(èxìngzhǒngliú)癌癥早期，腫瘤抑制作用；進(jìn)展階段時(shí)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。在人乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌中觀察到高頻率的Beclin1單等位基因缺失。在人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中，Beclin1蛋白表達(dá)下降，幾乎檢測(cè)不到。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Beclin1促進(jìn)了細(xì)胞的自噬活性，降低了其成瘤能力，這些均提示自噬活性與抑制細(xì)胞增殖有關(guān)。（LiangXH,JacksonS,SeamanMetal.(1999)InductionofautophagyandinhibitionoftumorigenesisbyBeclin1.Nature402:672-676.）乳腺癌治療(zhìliáo)藥物它莫西芬可通過(guò)激活細(xì)胞自噬，由神經(jīng)酰胺介導(dǎo)上調(diào)Beclin1表達(dá)發(fā)揮作用。（

ScarlattiF,BauvyC,VentrutiAetal.(2004)Ceramide-mediatedmacroautophagyinvolvesinhibitionofproteinkinaseBandup-regulationofBeclin1.JBiolChem279(18):18384-18391.）自噬研究第二十七頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬與腫瘤(zhǒngliú)治療抑制自噬—增強(qiáng)腫瘤放化療敏感性大量研究顯示，自噬抑制劑可以增強(qiáng)惡性膠質(zhì)瘤、多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、結(jié)直腸癌及前列腺癌等多種腫瘤對(duì)放化療的敏感性。因此，自噬抑制劑與常規(guī)治療的聯(lián)合應(yīng)用可能是提高療效的潛在(qiánzài)手段。誘導(dǎo)自噬—促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡現(xiàn)有證據(jù)表明，在某些腫瘤中自噬性死亡可能是腫瘤細(xì)胞死亡的重要方式。比如：三氧化二砷(As203)可以通過(guò)上調(diào)Beclin1的表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞自噬性死亡，從而緩解淋巴細(xì)胞性白血病和多發(fā)性骨髓瘤的病情；促自噬類藥物替莫唑胺，可以選擇性地殺滅具有凋亡抗性的惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞。表明：誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞過(guò)度自噬，也可能是抗腫瘤治療的重要思路。自噬研究第二十八頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬與肌病LAMP-2（2型溶酶體相關(guān)膜蛋白）缺陷(quēxiàn)小鼠出現(xiàn)多組織廣泛的自噬性空泡，其中包括骨骼肌和心肌。心肌超微結(jié)構(gòu)的異常使其收縮功能嚴(yán)重受損。（

LuzhengXue,GrahamCFletcherandAvivaMTolkovsky.(1999)Autophagyisactivatedbyapoptoticsignalinginsympatheticneurons:analternativemechanismofdeathexecution.MolCellNeurosci14:180-198.）人LAMP-2缺陷導(dǎo)致的Danon氏病和相關(guān)肌病的典型特征是胞漿中自噬溶酶體的大量聚集。（SugieK,NoguchiS,NishinoIetal.(2005)AutophagicvacuoleswithsarcolemmalfeaturesdelineateDanondiseaseandrelatedmyopathies.JNeuropatholExpNeurol64(6):513-522.）自噬研究第二十九頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬與神經(jīng)(shénjīng)變性性疾病在該疾病的早期階段自噬起保護(hù)性作用，激活自噬可加速變性蛋白的清除來(lái)阻止疾病的進(jìn)一步發(fā)展。然而(ránér)，隨著疾病的進(jìn)展，蛋白質(zhì)聚積物越來(lái)越多，對(duì)溶酶體蛋白酶降解的敏感性下降，自噬的持續(xù)性激活最終引發(fā)自噬性細(xì)胞死亡，這樣自噬又促進(jìn)了神經(jīng)元的死亡。

（LarsenKE,SulzerD.Autophagyinneurons:areview.HistolHistopathol,2002,17(3):897-908）（WebbJL,RavikumarB,AtkinsJ,SkepperJN,RubinszteinDC.(2003)Alpha-synucleinisdegradedbybothautophagyandtheproteasome.JBiolChem278:25009-25013.）（RavikumarB,DudenRandRubinszteinDC.(2002)Aggregate-proneproteinswithpolyglutamineandpolyalanineexpansionsaredegradedbyautophayg.HumMolGenet11(9):1107-1117）自噬研究阿爾茨海默氏?。ˋlzheimer’s）、亨廷頓氏?。℉untington’s）和帕金森氏病（Parkinson’s）等神經(jīng)變性性疾病兩個(gè)最主要的特征是：胞漿中蛋白聚集物的存在和大的蛋白裂解體系(tǐxì)活性的改變。第三十頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬與病原體感染(gǎnrǎn)細(xì)胞自噬機(jī)制的激活在清除病原體感染中也起重要作用。在對(duì)C.neoformans（新型隱球菌）感染的小鼠巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄特點(diǎn)的研究中發(fā)現(xiàn)，與自噬相關(guān)的基因被誘導(dǎo)表達(dá)。巨噬細(xì)胞以膽固醇依賴方式激活自噬，清除胞內(nèi)病原菌L.pneumophila

（嗜肺軍團(tuán)菌）的感染。激活自噬不一定對(duì)病原體感染的細(xì)胞均起保護(hù)作用。例如激活Coxiella（柯克斯菌）感染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞的自噬機(jī)制，會(huì)為細(xì)菌最初的存活和擴(kuò)增提供有利條件。脊髓灰質(zhì)炎病毒和鼻病毒利用自噬機(jī)制促進(jìn)病毒的復(fù)制和擴(kuò)增。（據(jù)推測(cè)(tuīcè)其機(jī)制可能是自噬為病毒RNA復(fù)合物提供了膜性結(jié)構(gòu)的包裹，幫助病毒顆粒以非裂解方式從受感染的細(xì)胞中釋放出來(lái)）自噬研究第三十一頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬與衰老(shuāilǎo)KellerJN等人的綜述詳細(xì)探討了Autophagy與腦衰老的關(guān)系。（KellerJN,DimayugaE,ChenQ,ThorpeJ,GeeJ,DingQ.(2004)Autophagy,proteasomes,lipofuscin,andoxidativestressintheagingbrain.IntJBiochemCellBiol36(12):2376-2391.Review.

）有研究指出：周期性終生服用抗脂解藥物抑制胰島素的分泌與輕度節(jié)食共同發(fā)揮抗衰老作用，推測(cè)其機(jī)理可能為短暫的血漿低胰島素水平刺激了機(jī)體的抗衰老細(xì)胞(xìbāo)修復(fù)機(jī)制，這種機(jī)制就是細(xì)胞(xìbāo)的自噬。（DonatiA,CavalliniG,CarresiC,GoriZ,ParentiniI,BergaminiE.(2004)Anti-agingeffectsofanti-lipolyticdrugs.ExpGerontol39(7):1061-1067.）自噬研究第三十二頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究透射電鏡觀察(guānchá)自噬體Ａ：ＮＤＶ感染(gǎnrǎn)細(xì)胞；Ｂ：陰性對(duì)照細(xì)胞；Ｃ：雷帕霉素處理細(xì)胞新城疫病毒第三十三頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究GFP-LC3轉(zhuǎn)染細(xì)胞(xìbāo)檢測(cè)自噬體形成Ａ：陰性對(duì)照(duìzhào)細(xì)胞；Ｂ：雷帕霉素處理細(xì)胞；Ｃ：ＮＤＶ感染單個(gè)細(xì)胞；Ｄ：ＮＤＶ感染合胞體新城疫病毒第三十四頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究LC3轉(zhuǎn)化(zhuǎnhuà)的Western-blot檢測(cè)（1、4、7、10、13），（2、5、8、11、14），（3、6、9、12、15）：依次(yīcì)為第6、12、18、24、36小時(shí)的陰性對(duì)照組；雷帕霉素處理組；Ｈｅｒｔｓ／３３毒株感染組6h12h18h24h36h新城疫病毒第三十五頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究p62的Western-blot檢測(cè)(jiǎncè)１：陰性對(duì)照組；２～５：依次為NDV感染(gǎnrǎn)后第６、１２、２４、３６小時(shí)新城疫病毒第三十六頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究GFP-LC3和Lyso-tracker共定位(dìngwèi)NDVHerts/33毒株感染CEF之后(zhīhòu)誘導(dǎo)GFP-LC3和Lyso-trackerRed的共定位新城疫病毒第三十七頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究GFP-LC3和溶酶體(LAMP1)共定位(dìngwèi)新城疫病毒第三十八頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究透射電鏡：大量單層和雙層膜性結(jié)構(gòu)熒光定位：GFP-LC3質(zhì)粒在病毒感染后呈現(xiàn)顯著的點(diǎn)狀分布Westernblot：病毒感染后期發(fā)生明顯的LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的轉(zhuǎn)化；NDV感染后p62蛋白的降解激光共定位：GFP-LC3在病毒感染中后期發(fā)生向溶酶體的轉(zhuǎn)移以上表明(biǎomíng)NDV感染能夠誘導(dǎo)完整自噬流新城疫病毒第三十九頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究透射電鏡觀察(guānchá)自噬體豬圓環(huán)病毒第四十頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究激光(jīguāng)共聚焦

未感染的細(xì)胞(xìbāo)中eGFP-LC3呈彌散分布，而PCV2感染和雷帕霉素（rapamycin)處理組eGFP-LC3呈點(diǎn)狀聚集。豬圓環(huán)病毒第四十一頁(yè)，共五十三頁(yè)。細(xì)胞自噬介紹與相關(guān)研究自噬蛋白(dànbái)LC3的變化

與正常未感染細(xì)胞相比，PCV2感染后24、36和