抗腫瘤的生物技術(shù)藥物

2007年全球醫(yī)藥市場(chǎng)達(dá)到6750億美元左右，增速為5-6%，其中生物制藥市場(chǎng)收入為450億美元，增速為13-14%。生物制藥占醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)8.8-10%，其中美國(guó)市場(chǎng)占62%，歐洲占25%，日本占7%。美國(guó)已產(chǎn)業(yè)化的基因工程藥物200種，占藥品總銷(xiāo)售額的10%。我國(guó)生物技術(shù)藥物研究和開(kāi)發(fā)起步較晚，已有20多種基因工程藥物和疫苗上市，正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的品種近100種。2005年我國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品總銷(xiāo)售額達(dá)到350億元。第一頁(yè)，共五十頁(yè)。至2008年底，F(xiàn)DA共批準(zhǔn)99種生物技術(shù)藥物上市2007年29/110種生物技術(shù)藥物的銷(xiāo)售額超過(guò)10億美元2007年銷(xiāo)售額超過(guò)40億美元的藥物有16種，基因工程藥物占據(jù)7種：1.治療非霍奇金淋巴瘤的anti-CD20抗體Rituxan2.治療乳腺癌的anti-EGFRII抗體Herceptin3.治療腫瘤放化療后出現(xiàn)的白細(xì)胞減少的G-CSF4.治療肺癌、乳腺癌和結(jié)直腸癌的anti-VEGF抗體Avastin5.治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的anti-TNFα抗體Enbrel、Remicade單克隆抗體藥物第二頁(yè)，共五十頁(yè)。TypeProductMarketerApprovedChimericRituxanNon-Hodgkin'slymphoma

Genentech

November1997

ChimericSimulectOrganrejectionprophylaxis

NovartisMay1998ChimericRemicadeRheumatoidarthritis,Crohn'sdiseaseohnson&JohnsonAugust1998CDR-graftedZenapax

OrganrejectionprophylaxisRocheDecember1997CDR-graftedSynagis

RespiratorysyncytialvirusMedimmuneJune1998CDR-graftedHerceptin

MetastaticbreastcancerGenentechSeptember1998CDR-graftedMylotarg

AcutemyeloidleukemiaAmericanHomeProductsMay2000MonoclonalAntibodiesontheMarket第三頁(yè)，共五十頁(yè)。TypeProductMarketerApprovedMurine

RadiolabeledZevalin

Non-Hodgkin'sLymphomaIDECPharmaceuticalsandScheringAGMarch2002PhageDisplayHumira

RheumatoidarthritisAbbottLaboratoriesDecember2002CDR-graftedXolair

ModeratetoseverepersistentasthmaGenentechandNovartisJune2003Murine

RadiolabeledBexxar

CD20positive,follicular,Non-Hodgkin'sLymphomaCorixaandGlaxoSmithKlineJune2003CDR-graftedRaptiva

Chronicmoderate-to-severepsoriasisGenentechandXomaOctober2003ChimericErbitux

ColorectalcancerImcloneandBristol-MyersSquibbFebruary2004CDR-grafted

Avastin（Bevacizumab）colonandrectumcancer

GenentechFebruary2004第四頁(yè)，共五十頁(yè)。1979-1980國(guó)內(nèi)個(gè)別單位開(kāi)始單抗的研制1984年以前基本是技術(shù)方法的建立和完善1985年以后單抗為基礎(chǔ)的診斷試劑用于研究和臨床

1987年以后單抗的體內(nèi)診斷和治療制劑被列入863計(jì)劃1992年我國(guó)第一個(gè)單抗衍生物被SDA批準(zhǔn)進(jìn)入臨床2005年第四軍醫(yī)大學(xué)研制的治療肝癌新藥——碘131

美妥昔單抗注射液，這是全球第一個(gè)專(zhuān)門(mén)用于治療原發(fā)性肝癌的單抗導(dǎo)向同位素藥物.

單克隆抗體技術(shù)在我國(guó)的發(fā)展.第五頁(yè)，共五十頁(yè)。由分化成熟的終末B細(xì)胞--漿細(xì)胞合成、分泌的一類(lèi)能與相應(yīng)抗原（antigen，Ag）特異性結(jié)合的具有免疫功能的糖蛋白。什么是抗體（Antibody，Ab）？Ag1234B抗體，Ab

一個(gè)

B細(xì)胞只能生產(chǎn)一種抗體，對(duì)付某一抗原決定基。第六頁(yè)，共五十頁(yè)。B1B2B3B4

多克隆抗體Ag2341B4B4B4

單克隆抗體第七頁(yè)，共五十頁(yè)。第八頁(yè)，共五十頁(yè)。在V區(qū)中，某些特定位置的氨基酸殘基的組成和排列順序高度可變，稱(chēng)為HVR，或互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）。VL區(qū)和VH區(qū)各存在個(gè)3CDRFR1~4為骨架區(qū)，穩(wěn)定HVR的結(jié)構(gòu)。Fab段：抗原結(jié)合片段Fc段：可結(jié)晶段FabFc第九頁(yè)，共五十頁(yè)。第十頁(yè)，共五十頁(yè)?？贵w的發(fā)展過(guò)程單克隆抗體基因工程抗體多克隆抗血清抗體庫(kù)第十一頁(yè)，共五十頁(yè)。傳統(tǒng)抗血清抗原免疫所有抗體混合123412341234多克隆抗體第十二頁(yè)，共五十頁(yè)。單克隆抗體1975年建立了單克隆抗體技術(shù)（淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)）。1984年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)。第十三頁(yè)，共五十頁(yè)。B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合第十四頁(yè)，共五十頁(yè)。B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤BBB瘤瘤瘤HAT選擇培養(yǎng)液（黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶）選擇培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶而死亡第十五頁(yè)，共五十頁(yè)。檢測(cè)到所需的X抗體分離單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)檢測(cè)到所需的X抗體第十六頁(yè)，共五十頁(yè)。注入小鼠腹腔擴(kuò)大培養(yǎng)體外培養(yǎng)大量單克隆抗體第十七頁(yè)，共五十頁(yè)。第十八頁(yè)，共五十頁(yè)。鼠單抗人單抗大鼠小鼠產(chǎn)量高、操作比小鼠麻煩少用易操作、多用HAMA反應(yīng)人人雜交瘤人B細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞融合人鼠雜交瘤人B細(xì)胞、鼠骨髓瘤細(xì)胞融合細(xì)胞雜交瘤技術(shù)第十九頁(yè)，共五十頁(yè)。單克隆抗體的不足：目前單克隆抗體均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體（humanantimouseantibody,HAMA)人體的排斥反應(yīng)人體內(nèi)半衰期只有5-6小時(shí)到達(dá)靶組織的藥量?jī)H有1％20第二十頁(yè)，共五十頁(yè)。基因工程抗體鼠單抗100%鼠源鼠/人嵌合單抗(66-75%人源)人源化單抗(90-95%人源)100%人源為了降低免疫原性，降低相對(duì)分子量，增加穿透力，開(kāi)發(fā)了新的基因工程抗體。恒定區(qū)人源化可變區(qū)人源化第二十一頁(yè)，共五十頁(yè)。Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL免疫球蛋白基因載體的構(gòu)建H鏈嵌合載體L鏈嵌合載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞啟動(dòng)子人-鼠嵌合抗體基因工程改造策略第二十二頁(yè)，共五十頁(yè)。鼠VH鼠VL人CL人CH抗體分泌細(xì)胞第二十三頁(yè)，共五十頁(yè)。CDR序列CDR序列鼠單克隆抗體人抗體人源化抗體CDR移植第二十四頁(yè)，共五十頁(yè)。小分子抗體第二十五頁(yè)，共五十頁(yè)。小分子抗體的優(yōu)點(diǎn)：分子質(zhì)量小，免疫原性低。易于進(jìn)入實(shí)體瘤周?chē)奈⒀h(huán)。無(wú)Fc片段，不易與具有Fc受體的非靶細(xì)胞結(jié)合，用于免疫診斷時(shí)成像清晰。構(gòu)建較簡(jiǎn)單，易于操作和改造?？稍诩?xì)菌中表達(dá)，易于大量生產(chǎn)。小分子抗體的缺點(diǎn)：與抗原結(jié)合活性相對(duì)較弱。半衰期短。第二十六頁(yè)，共五十頁(yè)?？贵w庫(kù)抗體庫(kù)技術(shù)：用基因克隆技術(shù)克隆全套抗體的重鏈和輕鏈的可變區(qū)基因，然后重組到特定的表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化特定的宿主細(xì)胞表達(dá)有功能的抗體分子，并通過(guò)親和篩選獲得特異性抗體可變區(qū)基因的技術(shù)。利用抗體庫(kù)技術(shù)篩選到的抗體可變區(qū)基因可被用于構(gòu)建基因工程抗體。第二十七頁(yè)，共五十頁(yè)。噬菌體抗體庫(kù)第二十八頁(yè)，共五十頁(yè)?？贵w庫(kù)的優(yōu)點(diǎn)：越過(guò)了細(xì)胞融合的步驟，省時(shí)省力。擴(kuò)大了篩選容量，易于獲得高親和力抗體。不需進(jìn)行人工體內(nèi)免疫。第二十九頁(yè)，共五十頁(yè)。單克隆抗體藥物：Trastuzumab商品名：赫賽汀英文名：Herceptin通用名：注射用曲妥珠單抗

(Trastuzumab)針對(duì)HER2的特異性單克隆抗體，用于治療HER2過(guò)度表達(dá)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌

重組DNA衍生的人源化單克隆抗體可單藥使用,不良反應(yīng)輕，耐受性好,可在門(mén)診治療療效顯著，中位緩解時(shí)間長(zhǎng)第三十頁(yè)，共五十頁(yè)。HER2人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體-2

HumanEpidermalgrowthFactorReceptor-2

分子量185kDa的糖蛋白:細(xì)胞外區(qū)（配體結(jié)合區(qū)）跨膜區(qū)（傳導(dǎo)信號(hào)）細(xì)胞內(nèi)區(qū)（激酶活性）HER2細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞外細(xì)胞膜第三十一頁(yè)，共五十頁(yè)。Cellmembrane基因轉(zhuǎn)錄提高細(xì)胞運(yùn)動(dòng)抑制凋亡細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖轉(zhuǎn)移化療耐藥腫瘤生長(zhǎng)EGFEGFREGFRTGFTGFEGFRHER2HER2HER3NRGNRGHER2HER4HER2HER2信號(hào)級(jí)聯(lián)放大核膜Intracellular第三十二頁(yè)，共五十頁(yè)。1=-

基因拷貝數(shù)2=-

mRNA

轉(zhuǎn)錄3=-

細(xì)胞表面受體蛋白表達(dá)4=-

細(xì)胞外受體功能域釋放A=HER2DNAB=HER2信使RNAC=HER2受體蛋白細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞膜1234CBAHER2陽(yáng)性：過(guò)度表達(dá)/擴(kuò)增HER2正常表達(dá)細(xì)胞(HER2–)(~2萬(wàn)個(gè)受體）HER2過(guò)表達(dá)的細(xì)胞(HER2+)(100–200萬(wàn)個(gè)受體）第三十三頁(yè)，共五十頁(yè)。正常HER2表達(dá)HER2基因擴(kuò)增導(dǎo)致HER2過(guò)表達(dá)HER2過(guò)表達(dá)導(dǎo)致腫瘤增殖促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖------腫瘤發(fā)生抑制細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)血管新生提高細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力,增強(qiáng)腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移作用第三十四頁(yè)，共五十頁(yè)。HER2在癌癥中過(guò)表達(dá)：30％以上的人類(lèi)腫瘤中存在HER2基因的擴(kuò)增/過(guò)度表達(dá)（如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌、胃癌和前列腺癌等。20％－30％的原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌有HER2基因的擴(kuò)增/過(guò)度表達(dá)。Herceptin即為一種針對(duì)HER2受體的人源化單克隆抗體，是乳腺癌治療領(lǐng)域的第一個(gè)分子靶向性藥物，具有高效、低毒、選擇性強(qiáng)的特點(diǎn)。2010年，歐洲和美國(guó)先后批準(zhǔn)化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療HER2陽(yáng)性胃及胃食管交界癌患者。第三十五頁(yè)，共五十頁(yè)。刺激刺激HER2タンパクがん細(xì)胞増殖刺激刺激HER2タンパク癌細(xì)胞増殖抑制Heceptin作用Heceptin癌細(xì)胞表面存在著Her-2蛋白，受刺激后促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖20～30％的癌細(xì)胞。Heceptin與Her-2結(jié)合阻斷和抑制細(xì)胞的增殖，用于

轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人的治療。第三十六頁(yè)，共五十頁(yè)。HER2檢測(cè)流程免疫組織化學(xué)原位雜交第三十七頁(yè)，共五十頁(yè)。440mg 凍干粉針劑20ml 無(wú)菌注射用水赫賽汀?用法用量所需溶液的體積=體重（Kg）劑量（4mg/Kg負(fù)荷量或2mg/Kg維持量）

21（mg/ml，配置好溶液的濃度）每周方案三周方案用法用量首劑

4mg/kg，90分鐘內(nèi)靜脈滴注，觀(guān)察2小時(shí)維持劑量

2mg/kg，每周一次，30分鐘靜脈滴注首劑

8mg/kg，90分鐘內(nèi)靜脈滴注，觀(guān)察2小時(shí)維持劑量

6mg/kg，每三周一次，30分鐘靜脈滴注療程建議轉(zhuǎn)移性乳腺癌至少6個(gè)月輔助治療一年第三十八頁(yè)，共五十頁(yè)。

曲妥珠單抗輔助治療可以選擇的方案第三十九頁(yè)，共五十頁(yè)。單克隆抗體藥物：Rituximab商品名：美羅華英文名：Mabthera通用名：利妥昔單抗(Rituximab)針對(duì)CD20的特異性單克隆抗體，通過(guò)基因重組技術(shù)生產(chǎn)的一種嵌合鼠/人的單克隆抗體,用于治療非霍奇淋巴瘤。第四十頁(yè)，共五十頁(yè)。非霍奇淋巴瘤（non-hodgkin’s

lymphoma，NHL）瘤細(xì)胞成分單一，大多起源于B淋巴細(xì)胞，部分來(lái)自T淋巴細(xì)胞，只有少數(shù)來(lái)自組織細(xì)胞。故目前多傾向于根據(jù)細(xì)胞形態(tài)結(jié)合免疫功能分類(lèi)：B細(xì)胞淋巴瘤（臨床多見(jiàn)）T細(xì)胞淋巴瘤CD20抗原在從前B細(xì)胞到活化B細(xì)胞的各個(gè)階段都表達(dá),但在正常造血干細(xì)胞、分化成熟的漿細(xì)胞及其他類(lèi)型造血細(xì)胞系卻未見(jiàn)表達(dá)，且CD20在超過(guò)90%的B細(xì)胞性NHL中均有表達(dá)。因此CD20成為腫瘤治療的一個(gè)較好的靶點(diǎn)。

第四十一頁(yè)，共五十頁(yè)。

Rituximab：通過(guò)ADCC，CDC促凋亡與化療藥物協(xié)同作用第四十二頁(yè)，共五十頁(yè)。淋巴瘤治療單克隆抗體Rituxi-CD20CD20第四十三頁(yè)，共五十頁(yè)。Epratuzumab：人源性IgG1抗CD22單抗60%－80％的B-NHL細(xì)胞表達(dá)CD22濾泡性淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤和邊緣區(qū)B細(xì)胞性淋巴瘤高表達(dá)CD22Anti-CD22與CD22結(jié)合后迅速內(nèi)在化抗CD22單抗其他針對(duì)B,T細(xì)胞的單抗第四十四頁(yè)，共五十頁(yè)。

復(fù)發(fā)濾泡性淋巴瘤劑量組總有效率（CR＋PR）中位TTP360mg/m243％23.7月480mg/m227％彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤240mg/m233％8.1月360mg/m215％480mg/m220％EpratuzumabI/II期臨床試驗(yàn)結(jié)果第四十五頁(yè)，共五十頁(yè)?？笴D30單抗CD30在霍奇金淋巴瘤的RS細(xì)胞和間變大細(xì)胞淋巴瘤高度表達(dá)，是治療淋巴瘤的理想靶點(diǎn)嵌合性CD30單抗SGN-30及人源化CD30單抗MDX-60治療耐藥性HD、ALCL和其他CD30+淋巴瘤的I/II期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中第四十六頁(yè)，共五十頁(yè)?？笴D40抗體CD40在惡性T和B淋巴細(xì)胞中表達(dá)，CD40被認(rèn)為與細(xì)胞的增殖及分化相關(guān)。SGN-40是一種人源化IgG1型抗CD40抗體，臨床前研究表明其對(duì)淋巴瘤細(xì)胞具有明顯的殺傷效應(yīng)。目前正在DLBCL中進(jìn)行兩