免疫組化染色中“雜音”染色片的種類及解決辦法

免疫組化染色中“雜音”染色片的種類及解決方法免疫組化除正常的真實的陽性信號外經常會遇到不正常的背景著色，這些非正常的著色稱為“雜音”染色產生的緣由也多種多樣，為了便于說明，筆者將其歸納為下面幾種。1、全片著色全片著色是指整個切片全都染上了顏色，著色的強度可深可淺，有：每次使用抗體前應當對其工作濃度進展測試，使每一抗體個體化，找到適合自己試驗室的抱負工作濃度，既使是即用型的抗體也應如此，不能只簡潔的按說明書進展染色。(Polymer)敏感性很高，要求一抗孵育的時間不是傳統的130DAB變質和顯色時間太長：DAB最好現用現配，如有沉渣應進展過濾后再用。配制好的DAB不應存放時間太長，由于在沒有酶DAB產生反響而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種好似節(jié)約的方法是不行取的。DAB的顯色最好在顯微鏡下監(jiān)控，到達抱負的染色顯色時間過長。法是操作要認真認真，承受DAKO筆或PAPPen在組織四周畫圈，可以有效的避開液體流失，也能提高操作速度。24小時)：緣由上4度冰箱過夜，對結果無明顯影響，假設放在室溫，特別是炎熱的夏天，會消滅背景著色，因此，不行存放時間太長。用使用過的抗體作比較。2指組織一半著色一半無著色一遍，是否有的組織未被試劑完全掩蓋，如有這種狀況而不是用吸頭或試劑瓶口將試劑引流開使之將組織全部掩蓋。另外，染片盒不平，切片傾斜，雖然開頭試劑已全部掩蓋了組織，但后來試劑流向一邊，局部組織未被試劑掩蓋。對于這種問題，只要留心或想DAKOPAP)筆在組織四周畫圈時，劃線太靠近或畫到了組織上劑不能到達靠近劃線四周的組織。還有氣泡也可引起陰陽清楚的著此，氣泡中心的組織不著色。解決方法是滴加試劑時手法要輕泡時用牙簽捅破。3、切片邊緣著色生的緣由：(1)組織邊緣與玻片粘貼不牢，邊緣組織松脫漂移在液體，(APES4微米，組織的(2)切片上滴加的試致染色深。解決方法：試劑要充分掩蓋組織，應超出組織邊緣2mm。用DAKO筆畫圈時，為了避開油劑的影響，畫圈應距組織邊緣3-4mm。4、灶片狀著色有：(1滲入后不易洗盡，顯色過深所致。解決方法是45度左右的斜度，利于水流走和蒸發(fā)。(2)壞死組織灶，組織壞死后細胞破壞、酶的釋放、蛋白游離、分解，簡潔的肽鏈殘段(如Fc段)可能與一抗或/和二抗結合導致最終著色。(3)制作APES膠片時，膠的濃度太高，枯燥后在玻片上留下白色小點，5%鹽酸酒精(5ml+95%酒精95ml)浸泡玻片41小時、蒸餾水洗玻片152%APES(2mlAPES+98ml丙酮)浸泡玻片5(1-2假設制片過程中，因丙酮漸漸揮發(fā)而膠變濃時可適當參與一些丙酮。5、細胞漿著色胞漿著色是全部“雜音”染色中最具有哄騙性的著色，著色區(qū)局限在細胞內，間質無著色，看上去與真實的免疫反響著色幾乎一樣，很難區(qū)分。胞漿里含有較多的蛋白質，因此，很多非特異性的染色除Fc源性生物素暴露，內源性生物素暴露的強度在不同的組織有所不同，從弱陽性(+)到強陽性(+++)，內源性生物素在組織中的分布形式，既生物素暴露的強弱與修復液有關，其強度增加依次為：檸檬酸、非生物素檢測系統Polymer兩步法(EliVision、EnVision)可避開生物素干擾。7、細胞核著色不適當的組織處理可以消滅細胞核著色PH值和修復時間不當或修復過程中修復液留下得太少，未沒過組織等。解決方法是嚴格依據操作常規(guī)進展工作。6、間質著色蛋白質因蛋白疏水基團相互作用形成非特異性的連接而著色前的血清封閉這一步就是為了避開非特異型的結合疫球蛋白經常滲出到組織間質，很簡潔與抗體結合，造成間質著色