分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)

3/3分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

一、基礎(chǔ)知識(shí)

1.尿素是一種重要的氮肥，農(nóng)作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通過土壤中的細(xì)菌將尿素分解為氨和CO2，這是因?yàn)榧?xì)菌能合成脲酶。

2．科學(xué)家能從熱泉中把耐熱細(xì)菌篩選出來是因?yàn)闊崛母邷貤l件淘汰了絕大多數(shù)微生物，這樣也適用于實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選，原理是人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、PH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。

3.在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法。除此之外，顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法。

4.采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于1個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

5．統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)來表示。

6．設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。7．對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了被測試條件外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。滿足該條件的稱為對(duì)照組，未滿足該條件的稱為實(shí)驗(yàn)組。

二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。2．根據(jù)圖示2－7填寫以下實(shí)驗(yàn)流程：

3．土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性的潮濕土壤中，約70％～90％為細(xì)菌。4．分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同。

5．培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度和時(shí)間。細(xì)菌一般在30～37℃培養(yǎng)1～2d，放線菌一般在25～28℃培養(yǎng)5～7d，霉菌一般在25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。6．菌落的特征包括形狀、大小、隆起程度、顏色等方面。

7．實(shí)驗(yàn)過程

1）取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。

2）應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g。將稱好的土樣倒入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，塞好棉塞。3）在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行。

4）實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度等。

5）為了提高效率，在操作時(shí)更加有條不紊，應(yīng)當(dāng)事先制訂計(jì)劃。

三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

1．對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助生物化學(xué)的方法。

2．在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨。氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，PH升高。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基pH變化來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。3．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。

鞏固練習(xí)

1．從土壤中分離能分解尿素的細(xì)菌，可以利用選擇培養(yǎng)基，其成分中一定有（A）

①尿素②有機(jī)氮化合物③無機(jī)鹽④有機(jī)碳化合物⑤水⑥無機(jī)碳化合物

A（1）（3）（4）（5）B（2）（3）（4）（5）C（1）（3）（5）（6）D（2）（3）（5）（6）

2．可用于菌落數(shù)目統(tǒng)計(jì)的培養(yǎng)基是（A）

A固體培養(yǎng)基B液體培養(yǎng)基C半固體培養(yǎng)基D天然培養(yǎng)基

3．產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是（C）

A一個(gè)細(xì)菌液體培養(yǎng)基B許多細(xì)菌液體培養(yǎng)基

C一個(gè)細(xì)菌固體培養(yǎng)基D許多細(xì)菌固體培養(yǎng)基

4．要從多種細(xì)菌中分離某種細(xì)菌，培養(yǎng)基要用（B）A加入青霉素的培養(yǎng)基B固體培養(yǎng)基

C液體培養(yǎng)基D加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基

5．右表資料表明在各種培養(yǎng)基中細(xì)菌的生長，SCM為簡單培養(yǎng)，UYZ代表

加入培養(yǎng)基的不同物質(zhì)，問哪一種物質(zhì)細(xì)菌不能合成（C）

A.U

6培養(yǎng)基中濃度過高抑制微生物生長的原因是（B）

A含熱量太多B會(huì)使微生物失水

C導(dǎo)致微生物休眠D培養(yǎng)基中的碳源和氮源比例失衡

7．不同種類的細(xì)菌菌落表現(xiàn)為不同的特征，下列屬于菌落特征的是①菌落

大?、诰湫螤睥蔷涞穆∑鸪潭娶芫涞念伾菥涞耐该鞫龋―）

A（1）（2）（3）B（2）（3）（4）C（1）（3）（4）D（1）（2）（3）（4）（5）

8．某同學(xué)在１０、100、1000倍稀釋液的平均菌落數(shù)為2760、295、46,則菌落總數(shù)為(C)

A27600

B29500

C46000

D37750

9.下列氮肥能被植物直接吸收的是(1)硝酸鹽(2)尿素(3)磷酸二氫氨(4)氨(B)

A(1)(2)(3)(4)B(1)(3)(4)C(2)(3)(4)D(1)(3)

10．將某種細(xì)菌接種到徹底滅菌的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過一段時(shí)間后能得到（D）

A無一定形態(tài)的群體

B菌絲C單個(gè)細(xì)菌D菌落

11.實(shí)驗(yàn)測定鏈霉素對(duì)3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂平板上畫3條等長的平行線(3條線均與圖中的鏈霉素帶接觸)，將平板置于37℃條件下恒溫培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖所示。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，以下敘述不．正確的是(D)

A．鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長

B．鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)霍亂菌更有效

C．鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)傷寒菌更有效

D．鏈霉素可以用于治療傷寒病人

12.測定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，而測定真菌的數(shù)量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是(C)

A．細(xì)菌個(gè)體小，真菌個(gè)體大B．細(xì)菌易稀釋，真菌不易稀釋

C．細(xì)菌在土壤中數(shù)量比真菌多D．隨機(jī)的，沒有原因

13.用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是(C)

A．未接種的選擇培養(yǎng)基B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

C．接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D．接種了的選擇培養(yǎng)基

14.下列能選擇出分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基是(A)

A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水

B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂、水

C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、瓊脂、水

D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水

15.在涂布平板操作時(shí)錯(cuò)誤的是(A)

A．將涂布器在酒精燈火焰上灼燒，直到燒紅B．取少量菌液滴加在培養(yǎng)基表面C．將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃盡后，冷卻8=s～10s再用

D．涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻

16.在尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找，下列不．屬于厭氧細(xì)菌生存環(huán)境的是(C)

A．土壤深層B．人或動(dòng)物體內(nèi)寄生C．真空D．池塘淤泥

17.下列是關(guān)于檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是(D)

A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板

B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各mL，分別涂布于各組平板上

C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)