病毒與細(xì)胞的相互作用

關(guān)于病毒與細(xì)胞的相互作用第1頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第四章病毒與細(xì)胞間的相互作用第一節(jié)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)第二節(jié)病毒與細(xì)胞的相互作用第2頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第一節(jié)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)病毒是嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒必須使用細(xì)胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動(dòng)物（動(dòng)物接種）、雞胚（雞胚接種）或離體細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)（細(xì)胞培養(yǎng)）。第3頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五一、動(dòng)物接種接種后通常以動(dòng)物發(fā)病、死亡作為感染的指標(biāo)。按病毒侵襲部位不同選擇適當(dāng)?shù)慕臃N途徑。嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。第4頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五動(dòng)物接種的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：（1）不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備；（2）技術(shù)簡單；（3）易成功缺點(diǎn)：（1）個(gè)體差異大（2）價(jià)格昂貴（3）數(shù)量有限（4）需要隔離畜舍第5頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五二、雞胚接種一種比較經(jīng)濟(jì)簡便的方法。卵殼殼膜第6頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五接種途徑

絨毛尿囊膜接種9-13日齡

尿囊腔接種9-10日齡卵黃囊接種6-8日齡羊膜腔接種10日齡腦內(nèi)接種10日齡第7頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五

1氣室2卵殼3卵黃囊4卵白5尿囊腔

6絨毛尿囊7胚胎8羊水腔9胚胎外腔第8頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第9頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第10頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五雞胚接種的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：技術(shù)簡單、來源充沛、價(jià)格低廉、數(shù)量可大，不需特殊設(shè)備

缺點(diǎn)：很多病毒不能適應(yīng)，主要是哺乳動(dòng)物的病毒。第11頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五

細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)是指利用機(jī)械、酶或化學(xué)方法使動(dòng)物組織或傳代細(xì)胞分散成單個(gè)乃至2～4個(gè)細(xì)胞團(tuán)懸液進(jìn)行培養(yǎng)。

三、細(xì)胞培養(yǎng)第12頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五每個(gè)細(xì)胞生理特性基本一致，對(duì)病毒易感性相等無個(gè)體差異，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好可嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作細(xì)胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征應(yīng)用空斑技術(shù)可進(jìn)行病毒的克隆化優(yōu)點(diǎn)：第13頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五根據(jù)細(xì)胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型：原代細(xì)胞：動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細(xì)胞分散而得到的細(xì)胞。二倍體細(xì)胞：將長成單層的原代細(xì)胞消化分散成單個(gè)細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細(xì)胞一樣，保持其二倍染色體數(shù)目的細(xì)胞，稱為二倍體細(xì)胞。傳代細(xì)胞：能在體外持續(xù)增殖傳代的細(xì)胞，大多數(shù)由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而成。（一）細(xì)胞的類型第14頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五（二）細(xì)胞培養(yǎng)的方法靜置培養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)室常用。細(xì)胞懸液裝瓶，5%CO2溫箱靜置培養(yǎng)，細(xì)胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)：大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。細(xì)胞在玻瓶內(nèi)生長時(shí)，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細(xì)胞貼附于玻瓶四周，長成單層。懸浮培養(yǎng)微載體培養(yǎng)：懸浮、微載體第15頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第二節(jié)病毒與細(xì)胞的相互作用殺細(xì)胞感染非殺細(xì)胞感染

引致持續(xù)感染，對(duì)細(xì)胞代謝無影響。RNA干擾產(chǎn)生干擾素

第16頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五生產(chǎn)性感染（productive）：病毒感染后能產(chǎn)生完整的子代病毒顆粒。宿主細(xì)胞感染病毒發(fā)生的變化可能是細(xì)胞死亡或細(xì)胞轉(zhuǎn)化。非生產(chǎn)性感染（nonproductive）或稱頓挫感染（abortiveinfection）:病毒感染后不形成完整的病毒顆粒。持續(xù)性感染（persistentinfection）:持續(xù)長時(shí)間的感染，感染過程中不形成感染性的病毒顆粒。第17頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第18頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五病毒在宿主易感細(xì)胞內(nèi)增殖造成細(xì)胞損傷與死亡，這種感染稱為殺細(xì)胞性變化。

一、病毒引致的殺細(xì)胞變化殺細(xì)胞變化第19頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五由病毒感染導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。CPE能在光學(xué)顯微鏡下觀察。①細(xì)胞圓縮，如痘病毒和呼腸孤病毒等；②細(xì)胞聚合，如腺病毒；③細(xì)胞融合形成合胞體，如副粘病毒和皰疹病毒；④有些病毒能形成包涵體。（一）細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)第20頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五CPE觀察第21頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五CPE觀察第22頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五CPE觀察第23頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五正常細(xì)胞CPECPE觀察第24頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五正常單層A72細(xì)胞接種CCV后出現(xiàn)細(xì)胞拉網(wǎng)的的單層A72細(xì)胞CPE觀察第25頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五CPE觀察正常單層A72細(xì)胞接種犬冠狀病毒（CCV）后形成合胞體的的單層A72細(xì)胞第26頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五合胞體（syncytia）是病毒感染后導(dǎo)致感染細(xì)胞及相鄰細(xì)胞細(xì)胞膜融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細(xì)胞的相鄰細(xì)胞膜消失，成為多核巨細(xì)胞?？梢允共《緩母腥镜募?xì)胞直接進(jìn)入相鄰的正常細(xì)胞，有利于病毒在細(xì)胞間的擴(kuò)散。第27頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五病毒引致的細(xì)胞凋亡和壞死細(xì)胞死亡（celldeath）:病毒的繁殖、產(chǎn)物等直接引起細(xì)胞的死亡。細(xì)胞凋亡（cellapoptosis）是病毒感染引起細(xì)胞的生理性死亡，即程序性死亡。由于病毒的殺細(xì)胞感染導(dǎo)致的死亡，總是發(fā)生在病毒復(fù)制完成之后。病毒抗凋亡，以延長細(xì)胞生命，直至完成子代病毒的復(fù)制周期。細(xì)胞總是在子代病毒產(chǎn)出之前自行死亡；是宿主細(xì)胞的重要防御機(jī)制?？杉霸缜宄腥静《镜募?xì)胞，延緩病毒在體內(nèi)蔓延。第28頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第29頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五病毒感染抗體依賴的增強(qiáng)作用（antibody-dependentenhancementofviralinfection,ADEsyncytia）:在病毒感染過程中，宿主產(chǎn)生的抗體與病毒結(jié)合，非但未能阻斷病毒吸附宿主細(xì)胞，反而增強(qiáng)了病毒對(duì)細(xì)胞的感染，提高了病毒的滴度。第30頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五能夠使半數(shù)組織細(xì)胞在一定條件下發(fā)生細(xì)胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%組織細(xì)胞感染量（TCID50）第31頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五（二）空斑試驗(yàn)

plaqueassay細(xì)胞單層接種病毒后再覆蓋一層含營養(yǎng)液的瓊脂層。這樣病毒自然感染釋放后不能懸浮于液體中，只能感染鄰近與之接觸的細(xì)胞，以致感染區(qū)由原始病灶向四周擴(kuò)大，形成類似細(xì)菌的菌落，此即空斑試驗(yàn)。第32頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第33頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第34頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第35頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第36頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五空斑是由一個(gè)感染性病毒粒子復(fù)制形成的，類似于細(xì)菌的菌落，稱為空斑形成單位（PFU）。病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU來表示。

CELLS第37頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五第38頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五空斑試驗(yàn)的用途：1.測定病毒數(shù)量2.純化病毒

單個(gè)空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆。3.鑒定病毒

不同病毒的空斑具有不同的特征。第39頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五（三）包涵體（inclusionbody)定義：是某些病毒感染細(xì)胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，在普通光學(xué)顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)，稱為包涵體，又稱為內(nèi)基氏小體（Negribody）。第40頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五包涵體的性質(zhì)病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的Negri氏體大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體細(xì)胞變性的產(chǎn)物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體第41頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五狂犬病毒包涵體（Negribody）第42頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五定義：細(xì)胞利用內(nèi)源或外源的小分子雙股RNA片段，特異性地降解同源基因的mRNA，從而導(dǎo)致靶基因轉(zhuǎn)錄后基因沉默（posttranslationalgenesilence,PTGS）的現(xiàn)象。

二、RNA干擾（RNAinterference,RNAi）第43頁，共46頁，2022年，5月20日，12點(diǎn)37分，星期五定義：由病毒或誘生劑刺激機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生的具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的糖蛋白。

種類：