線粒體的活體染色

關(guān)于線粒體的活體染色第1頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、觀察動(dòng)物活細(xì)胞內(nèi)線粒體的形態(tài)、數(shù)量與分布。2、掌握線粒體的活體染色原理及方法。3、小鼠肝臟細(xì)胞線粒體染色及觀察。第2頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五

線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場(chǎng)所。細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來(lái)提供的?；铙w染色是應(yīng)用無(wú)毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。詹納斯綠B（JanusgreenB）是線粒體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶系使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無(wú)色狀態(tài)。

二、實(shí)驗(yàn)原理：第3頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五

不同細(xì)胞中線粒體的形態(tài)和數(shù)目不同。在電子顯微鏡下，線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數(shù)目與細(xì)胞類型和細(xì)胞的生理狀態(tài)有關(guān)，線粒體多聚集在細(xì)胞生理功能旺盛的區(qū)域。

線粒體脊的數(shù)目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長(zhǎng)軸垂直排列，但也可見到與線粒體長(zhǎng)軸平行排列的脊。脊的橫切面呈囊狀或管狀。脊的數(shù)量與細(xì)胞呼吸機(jī)能的強(qiáng)度有很大關(guān)系。第4頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五三、實(shí)驗(yàn)用品1.器材：顯微鏡、手術(shù)器械、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙、小平皿。2.試劑：

Ringer液、1/5000詹納斯綠B、1%甲苯胺蘭。3.材料：人口腔上皮細(xì)胞、小白鼠肝細(xì)胞。第5頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五四、實(shí)驗(yàn)方法（一）人口腔上皮細(xì)胞的制備與觀察用牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞均勻地涂在載片上(不可反復(fù)涂沫)，滴一滴甲苯胺蘭染液，染色5分鐘，蓋上蓋片，吸去多余染液。顯微鏡下觀察可見覆蓋口腔表面的上皮細(xì)胞為扁平橢圓形，中央有橢圓形核，染成藍(lán)色。第6頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五（二）、線粒體的活體染色與觀察1、人口腔上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察1）取清潔載玻片放在37℃恒溫水浴鍋的金屬板上，滴兩滴1/5000詹納斯綠B染液。第7頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五2）實(shí)驗(yàn)者用牙簽寬頭在自己口腔頰粘膜處稍用力刮取上皮細(xì)胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色10—15分鐘（注意不可使染液干燥，必要時(shí)可再加滴染液），蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。3）在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細(xì)胞，換高倍鏡進(jìn)行觀察。可見扁平狀上皮細(xì)胞的核周圍胞質(zhì)中，分布著一些被染成藍(lán)綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即是線粒體。

第8頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五2、小白鼠肝細(xì)胞線粒體的活體染色觀察1)用脊椎脫臼法處死小白鼠，置于解剖盤中，剪開腹腔，取小白鼠肝邊緣較薄的肝組織塊，放入表面皿內(nèi)。用吸管吸取Ringer液，反復(fù)浸泡沖洗肝臟，洗去血液。

2)在干凈的平皿中，滴加1/5000詹納斯綠B溶液，再將肝組織塊移入染液，注意不可將組織塊完全淹沒，要使組織塊上面部分半露在染液外，這樣細(xì)胞內(nèi)的線粒體酶系可充分得到氧化，易被染色。當(dāng)組織塊邊緣被染成藍(lán)綠色即成(一般需染20～30min)。第9頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五3)吸去染液，滴加Ringer溶液，用眼科剪將組織塊著色部分剪碎，使細(xì)胞或細(xì)胞群散出。然后，用吸管吸取分離出的細(xì)胞懸液，滴一滴在載玻片上，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。4)在低倍鏡下選擇不重疊的肝細(xì)胞，在高倍鏡下觀察，可見具有l(wèi)～2個(gè)核的肝細(xì)胞質(zhì)中，有許多被染成藍(lán)綠色的線粒體，注意其形態(tài)和分布狀況。第10頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五

五、作業(yè)：1、繪口腔上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。

第11頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五口腔上皮細(xì)胞的線粒體分布第12頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)45分，星期五洋