2022年醫(yī)學(xué)專題-改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量

改良(gǎiliáng)Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量TheLowryMethodforProteinQuantitation基因(jīyīn)時(shí)代，為生命科學(xué)提供源動(dòng)力！第一頁(yè)，共八頁(yè)。目的與要求：掌握改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理及方法；了解標(biāo)準(zhǔn)曲線在物質(zhì)定量測(cè)定(cèdìng)中的應(yīng)用及繪圖要點(diǎn)?；驎r(shí)代，為生命科學(xué)提供(tígōng)源動(dòng)力！第二頁(yè)，共八頁(yè)。實(shí)驗(yàn)原理：在堿性條件下蛋白質(zhì)的肽鍵與Cu2+螯合，形成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物。（雙縮脲反應(yīng)BiuretReaction）蛋白質(zhì)分子中帶有酚基的酪氨酸極易使酚試劑中的磷鉬酸-磷鎢酸還原，生成鉬藍(lán)-鎢藍(lán)藍(lán)色化合物，藍(lán)色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。利用藍(lán)色深淺與蛋白質(zhì)濃度(nóngdù)成正比的關(guān)系可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)含量。（還原反應(yīng)）基因時(shí)代，為生命科學(xué)提供(tígōng)源動(dòng)力！第三頁(yè)，共八頁(yè)。試劑(mL)試管號(hào)

012345測(cè)定管蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.20mg/ml)00.100.200.400.600.801生理鹽水1.000.900.800.600.400.200試劑A0.900.900.900.900.900.900.90操作步驟基因時(shí)代，為生命科學(xué)提供(tígōng)源動(dòng)力！第四頁(yè)，共八頁(yè)?；靹蚝笾糜?7度水浴10分鐘。冷卻后各管加入試劑B0.1mL，室溫(shìwēn)放置10分鐘。各管接著加入試劑C3mL，立即混勻，置37度水浴10分鐘。冷卻后，以0號(hào)管為空白，在分光光度計(jì)上以波長(zhǎng)650nm比色讀取光密度值?；驎r(shí)代，為生命科學(xué)提供(tígōng)源動(dòng)力！第五頁(yè)，共八頁(yè)。結(jié)果與計(jì)算：

根據(jù)測(cè)定管光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清蛋白質(zhì)含量，再按血清稀釋(xīshì)倍數(shù)換算為g/L?；驎r(shí)代，為生命科學(xué)提供(tígōng)源動(dòng)力！第六頁(yè)，共八頁(yè)。注意事項(xiàng)：各管加酚試劑時(shí)必須快速，并立即搖勻，不應(yīng)出現(xiàn)混濁。移液管使用前要看清楚刻度和是否寫(xiě)著快、吹，如有則需要用洗耳球吹出剩余液體(yètǐ)。減量法可有效減少誤差。分光光度計(jì)使用前需預(yù)熱，絕對(duì)調(diào)零和空白管調(diào)節(jié)透光度為100%?；?jīyīn)時(shí)代，為生命科學(xué)提供源動(dòng)力！第七頁(yè)，共八頁(yè)。內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。基因時(shí)代，為生命科學(xué)提供源動(dòng)力。在堿性條件下蛋白質(zhì)的肽鍵與Cu2+螯合，形成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物。（雙縮脲反應(yīng)(fǎnyìng)BiuretReaction）。蛋白質(zhì)分子中帶有酚基的酪氨酸極易使酚試劑中的磷鉬酸-磷鎢酸還原，生成鉬藍(lán)-鎢藍(lán)藍(lán)色