【微生物】大腸菌群檢驗及注意事項

【微生物】大腸菌群檢驗及注意事項！大腸菌群介紹細菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在 37℃能分解乳糖產(chǎn)酸氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。有一些腸道致病菌存在（如沙門氏菌、志賀氏菌等），的危險性。前已被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作中。大腸菌群檢驗方法由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌，即：需氧及兼性厭氧、在 37℃分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進行。目前國內(nèi)采用的食品大腸菌群檢測方法主要有國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局頒布的準方法在檢測程序上略有不同。但兩種方法都是采用推測、驗證兩大步驟。：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管LST肉湯?！媾囵B(yǎng)察是否產(chǎn)氣。證實試驗：將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽（BGLB）℃培養(yǎng)BGLB產(chǎn)氣為陽性。查MPN表，報告)樣品中大腸菌群的MPN值。為方便大家使用和觀看，為大家總結(jié) MPN 法檢驗大腸菌群的流如下：乳糖發(fā)酵試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管LST 發(fā)酵管。36±1℃培48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。證實試驗：挑取LST產(chǎn)氣的發(fā)酵管，接種BGLB36±148±2h，觀察產(chǎn)氣情況。報告：根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查 MPN表，報告每ml（g）大腸菌群的MPN值。具體操作參見GB4789.3、SN/T0169-2010 《進出食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢測方法》MPN列復(fù)雜的運算，估算出具有共同特性的一類微生物在食品中存在的概率。MPN檢索表：MPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Number)的稱。這種方法，對樣品進行連續(xù)系列進行稀釋，加入培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，從規(guī)定的反應(yīng)呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPN檢索表只給了三個稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加 10倍。注國家標準和行業(yè)標準中所附MPN表所用稀釋度是不同的，而且結(jié)果報告單位也不相同。抑菌劑：的生長。標準中LST 肉湯利用十二烷基硫酸鈉作為抑菌劑，BGLB肉湯利用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。株有時也產(chǎn)生一些抑制作用。有些抑菌劑用量甚因此抑菌劑的添加應(yīng)嚴格按照標準方法進行。有哪些注意事項呢？檢樣時注意無菌操作；稀釋時采用的稀釋液可以用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水，接種時可采用九管法，設(shè)置三個梯度，分別為0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL度的試管應(yīng)充分混勻；每次實驗需要有陰性對照；使用小倒管培養(yǎng)基配制時，為排凈氣泡，滅菌時倒管中的氣體是否排完全；高壓滅菌后，等高壓滅菌鍋的壓力表達到 0，出培養(yǎng)基放到冰箱冷卻，效果會比較好；在實際工作中，大腸菌群的產(chǎn)氣量不同，有時倒管中充滿氣體，有時倒管中只有非常少的氣體（似小米粒的氣泡），氣泡沿管壁快速上浮，應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生。為了幫助大家更直觀