流式細胞儀BD-FACSCanto-II課件

流式細胞儀背景知識

1PPT課件流式細胞儀背景知識

1PPT課件總覽流式細胞術(shù)基本知識流式細胞儀的組成數(shù)據(jù)采集與分析2PPT課件總覽流式細胞術(shù)基本知識2PPT課件流式細胞技術(shù)是什么？流式細胞術(shù)在流動的狀態(tài)中檢測細胞或顆粒的各項特性特異性強，靈敏度高，速度快，并能實現(xiàn)多參數(shù)分析可檢測的樣本種類多樣：外周血，骨髓，細胞穿刺液，洗脫液，實體組織，培養(yǎng)細胞，微生物FlowCytometryFlow:FluidCyto:CellMetry:Measurement3PPT課件流式細胞技術(shù)是什么？流式細胞術(shù)FlowCytometry3流式細胞術(shù)檢測樣本0.4um40um4PPT課件流式細胞術(shù)檢測樣本0.4um40um4PPT課件流式細胞術(shù)檢測指標

流式細胞術(shù)提供的信息：

-相對細胞大小

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度

-染色過細胞的相對熒光強度5PPT課件流式細胞術(shù)檢測指標

5PPT課件細胞結(jié)構(gòu)細胞大小細胞粒度DNA含量與細胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細胞功能細胞表面/胞漿/核的特異性抗原細胞活性細胞內(nèi)細胞因子酶活性激素結(jié)合位點細胞受體細胞凋亡在上述信號基礎(chǔ)上的細胞分選流式細胞術(shù)的應用6PPT課件細胞結(jié)構(gòu)細胞功能在上述信號基礎(chǔ)上的細胞分選流式細胞術(shù)的應用6流式細胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細胞光學系統(tǒng)：產(chǎn)生和收集光學信號電子系統(tǒng)：光信號轉(zhuǎn)化為電信號，進行信號處理7PPT課件流式細胞儀組成7PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowsheathtankSampleFlowsheathinteriorreservoirwasteinteriorreservoirsheathfiltersampleinjectiontube(SIT)testtubeorplateflowcellinterrogationpointbubblefilterwastetank8PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowshe液流系統(tǒng)9PPT課件液流系統(tǒng)9PPT課件光學系統(tǒng)

激發(fā)光學系統(tǒng)包括:-激光器-透鏡和反射鏡，將激光引導到檢測區(qū)域收集光學系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號引導到對應的光學接收器10PPT課件光學系統(tǒng)

激發(fā)光學系統(tǒng)包括:10PPT課件11PPT課件11PPT課件12PPT課件12PPT課件光學系統(tǒng)13PPT課件光學系統(tǒng)13PPT課件14PPT課件14PPT課件光學系統(tǒng)-濾光片460500540460500540460500540SP500LP500BP500/50

Longpass Shortpass Bandpass15PPT課件光學系統(tǒng)-濾光片46050054046016PPT課件16PPT課件17PPT課件17PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage18PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltage電子系統(tǒng)19PPT課件電子系統(tǒng)19PPT課件電子系統(tǒng)20PPT課件電子系統(tǒng)20PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細胞單個流過流動室細胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光信號信號被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號存儲于電腦上液流系統(tǒng)光學系統(tǒng)電子系統(tǒng)21PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細胞液流系統(tǒng)電子系統(tǒng)21PPT課件回顧流式細胞儀的三大組成部分？濾光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？22PPT課件回顧流式細胞儀的三大組成部分？22PPT課件數(shù)據(jù)采集

三種數(shù)據(jù)：

-前向散射光FSC

-側(cè)向散射光SSC

-各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L423PPT課件數(shù)據(jù)采集

23PPT課件當使用激光光源時，在前向方向（和激光行進的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的強度是和細胞或其他檢測顆粒的大小、形狀密切相關(guān)的數(shù)據(jù)采集-前向散射光24PPT課件當使用激光光源時，在前向方向（和激光行進的方向相同）上可用前當激光光源被使用時，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，可以用90o

角的側(cè)向散射光檢測通道來采集側(cè)向散射光的強度和細胞或其他檢測顆粒的顆粒密度、內(nèi)部復雜程度密切相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光25PPT課件當激光光源被使用時，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，數(shù)據(jù)采集-側(cè)外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡對檢測的影響26PPT課件外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡26P細胞標記上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長的激發(fā)光來激發(fā)，同時發(fā)出特定波長的光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生的發(fā)射光將由特定的熒光通道來接收特定檢測是通過光學濾片和透鏡來控制的數(shù)據(jù)采集-熒光信號熒光強度是和細胞上標記上的熒光染料的量正相關(guān)27PPT課件數(shù)據(jù)采集-熒光信號熒光強度是和細胞上標記上的熒光染料的量正相數(shù)據(jù)采集28PPT課件數(shù)據(jù)采集28PPT課件電壓

信號放大方式：log、lin信號類型：A,W,H電壓的調(diào)節(jié):根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)29PPT課件電壓

信號放大方式：log、lin29PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個參數(shù)的組合作為閾值大多數(shù)樣本都可以設定FSC/SSC閾值以下的信號不存儲根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)目的是將不需要的雜質(zhì)信號，噪音信號，無用的細胞信號等扣除，使收集到的都是有用信號30PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個參數(shù)的組合作為閾值30PPT課件31PPT課件31PPT課件32PPT課件32PPT課件補償

補償方式：任意兩個通道之間，可以采用手動或自動補償。補償?shù)恼{(diào)節(jié):根據(jù)單染對照管來調(diào)節(jié)33PPT課件補償

補償方式：任意兩個通道之間，可以采用手動或自動補償。334PPT課件34PPT課件35PPT課件35PPT課件36PPT課件36PPT課件37PPT課件37PPT課件38PPT課件38PPT課件1.)Compensation-TooLittle;TooMuch39PPT課件1.)Compensation-TooLittle;2.)

BasicPrinciplesofCompensation-%Compensationisindependentoffluorescenceintensity40PPT課件2.)BasicPrinciplesofCompen3.)Compensation-

TooDim,TooBrightCompensationControlsSmallerrorsincompensationofadimcontrol(A)canresultinlargecompensationerrorswithbrightreagents(B&C).41PPT課件3.)Compensation-

數(shù)據(jù)分析流式數(shù)據(jù)直方圖散點圖等高線圖密度圖三維圖統(tǒng)計數(shù)據(jù)42PPT課件數(shù)據(jù)分析42PPT課件直方圖直方圖(DistributionHistogram)橫坐標代表熒光信號或散射光信號相對強度，單位是對數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標。縱坐標一般是細胞數(shù)。43PPT課件直方圖直方圖(DistributionHistogram)散點圖散點圖(DotPlot)X坐標為該細胞一參數(shù)相對含量，Y坐標為該細胞另一參數(shù)的含量，可以將細胞亞群分開。44PPT課件散點圖散點圖(DotPlot)44PPT課件等高線圖和密度圖45PPT課件等高線圖和密度圖45PPT課件三維圖46PPT課件三維圖46PPT課件統(tǒng)計數(shù)據(jù)Events百分比平均熒光強度熒光中位值CVSD……47PPT課件統(tǒng)計數(shù)據(jù)Events47PPT課件數(shù)據(jù)獲取與分析電壓閾值補償獲得數(shù)據(jù)畫圖設門統(tǒng)計48PPT課件數(shù)據(jù)獲取與分析電壓獲得數(shù)據(jù)畫圖48PPT課件Thanks!49PPT課件Thanks!49PPT課件流式細胞儀背景知識

50PPT課件流式細胞儀背景知識

1PPT課件總覽流式細胞術(shù)基本知識流式細胞儀的組成數(shù)據(jù)采集與分析51PPT課件總覽流式細胞術(shù)基本知識2PPT課件流式細胞技術(shù)是什么？流式細胞術(shù)在流動的狀態(tài)中檢測細胞或顆粒的各項特性特異性強，靈敏度高，速度快，并能實現(xiàn)多參數(shù)分析可檢測的樣本種類多樣：外周血，骨髓，細胞穿刺液，洗脫液，實體組織，培養(yǎng)細胞，微生物FlowCytometryFlow:FluidCyto:CellMetry:Measurement52PPT課件流式細胞技術(shù)是什么？流式細胞術(shù)FlowCytometry3流式細胞術(shù)檢測樣本0.4um40um53PPT課件流式細胞術(shù)檢測樣本0.4um40um4PPT課件流式細胞術(shù)檢測指標

流式細胞術(shù)提供的信息：

-相對細胞大小

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度

-染色過細胞的相對熒光強度54PPT課件流式細胞術(shù)檢測指標

5PPT課件細胞結(jié)構(gòu)細胞大小細胞粒度DNA含量與細胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細胞功能細胞表面/胞漿/核的特異性抗原細胞活性細胞內(nèi)細胞因子酶活性激素結(jié)合位點細胞受體細胞凋亡在上述信號基礎(chǔ)上的細胞分選流式細胞術(shù)的應用55PPT課件細胞結(jié)構(gòu)細胞功能在上述信號基礎(chǔ)上的細胞分選流式細胞術(shù)的應用6流式細胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細胞光學系統(tǒng)：產(chǎn)生和收集光學信號電子系統(tǒng)：光信號轉(zhuǎn)化為電信號，進行信號處理56PPT課件流式細胞儀組成7PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowsheathtankSampleFlowsheathinteriorreservoirwasteinteriorreservoirsheathfiltersampleinjectiontube(SIT)testtubeorplateflowcellinterrogationpointbubblefilterwastetank57PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowshe液流系統(tǒng)58PPT課件液流系統(tǒng)9PPT課件光學系統(tǒng)

激發(fā)光學系統(tǒng)包括:-激光器-透鏡和反射鏡，將激光引導到檢測區(qū)域收集光學系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號引導到對應的光學接收器59PPT課件光學系統(tǒng)

激發(fā)光學系統(tǒng)包括:10PPT課件60PPT課件11PPT課件61PPT課件12PPT課件光學系統(tǒng)62PPT課件光學系統(tǒng)13PPT課件63PPT課件14PPT課件光學系統(tǒng)-濾光片460500540460500540460500540SP500LP500BP500/50

Longpass Shortpass Bandpass64PPT課件光學系統(tǒng)-濾光片46050054046065PPT課件16PPT課件66PPT課件17PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage67PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltage電子系統(tǒng)68PPT課件電子系統(tǒng)19PPT課件電子系統(tǒng)69PPT課件電子系統(tǒng)20PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細胞單個流過流動室細胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光信號信號被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號存儲于電腦上液流系統(tǒng)光學系統(tǒng)電子系統(tǒng)70PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細胞液流系統(tǒng)電子系統(tǒng)21PPT課件回顧流式細胞儀的三大組成部分？濾光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？71PPT課件回顧流式細胞儀的三大組成部分？22PPT課件數(shù)據(jù)采集

三種數(shù)據(jù)：

-前向散射光FSC

-側(cè)向散射光SSC

-各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L472PPT課件數(shù)據(jù)采集

23PPT課件當使用激光光源時，在前向方向（和激光行進的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的強度是和細胞或其他檢測顆粒的大小、形狀密切相關(guān)的數(shù)據(jù)采集-前向散射光73PPT課件當使用激光光源時，在前向方向（和激光行進的方向相同）上可用前當激光光源被使用時，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，可以用90o

角的側(cè)向散射光檢測通道來采集側(cè)向散射光的強度和細胞或其他檢測顆粒的顆粒密度、內(nèi)部復雜程度密切相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光74PPT課件當激光光源被使用時，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，數(shù)據(jù)采集-側(cè)外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡對檢測的影響75PPT課件外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡26P細胞標記上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長的激發(fā)光來激發(fā)，同時發(fā)出特定波長的光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生的發(fā)射光將由特定的熒光通道來接收特定檢測是通過光學濾片和透鏡來控制的數(shù)據(jù)采集-熒光信號熒光強度是和細胞上標記上的熒光染料的量正相關(guān)76PPT課件數(shù)據(jù)采集-熒光信號熒光強度是和細胞上標記上的熒光染料的量正相數(shù)據(jù)采集77PPT課件數(shù)據(jù)采集28PPT課件電壓

信號放大方式：log、lin信號類型：A,W,H電壓的調(diào)節(jié):根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)78PPT課件電壓

信號放大方式：log、lin29PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個參數(shù)的組合作為閾值大多數(shù)樣本都可以設定FSC/SSC閾值以下的信號不存儲根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)目的是將不需要的雜質(zhì)信號，噪音信號，無用的細胞信號等扣除，使收集到的都是有用信號79PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個參數(shù)的組合作為閾值30PPT課件80PPT課件31PPT課件81PPT課件32PPT課件補償

補償方式：任意兩個通道之間，可以采用手動或自動補償。補償?shù)恼{(diào)節(jié):根據(jù)單染對照管來調(diào)節(jié)82PPT課件補償

補償方式：任意兩個通道之間，可以采用手動或自動補償。383PPT課件34PPT課件84PPT課件35PPT課件85PPT課件36PPT課件86PPT課件37PPT課件87PPT課件38PPT課件1.)Compensation-TooLittle;TooMuch88PPT課件1.)Compensation-TooLittle;2.)

BasicPrinciplesofCompensation-%Compensationisindependentoffluorescenceintensity89PPT課件2.)BasicPrinciplesofC