抗生素類藥物分析課件

在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動(dòng)有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱β–內(nèi)酰胺類氨基糖苷類四環(huán)素類大環(huán)內(nèi)酯類多烯大環(huán)類多肽類1.抗生素（antibiotics）2.分類一、概述在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活

化學(xué)純度較低活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差3.來源4.抗生素的特點(diǎn)化學(xué)合成半合成生物合成（發(fā)酵）生產(chǎn)工藝復(fù)雜發(fā)酵過程不易控制，易受污染原因一、概述化學(xué)純度較低3.來源4.抗生素的特鑒別：物理化學(xué)方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)等含量/效價(jià)測定：

微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)；

理化方法：

準(zhǔn)確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質(zhì)量分析一、概述5.抗生素質(zhì)量分析一、概述1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類1.化學(xué)結(jié)構(gòu)包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6酸性較強(qiáng)（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個(gè)手性碳旋光性青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結(jié)構(gòu)UV（共軛）干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定穩(wěn)定性(內(nèi)酰胺)2、主要理化性質(zhì)降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素二、β–內(nèi)酰胺類酸性較強(qiáng)（pKa2.5-2.8）酸性(羧基)有多個(gè)手性碳旋1）羥肟酸鐵反應(yīng)：

β–內(nèi)酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應(yīng)

α-氨基藍(lán)紫色3）雙縮脲反應(yīng)

β–內(nèi)酰胺類紫紅色4）光譜法（UV、NMR）5）色譜法（HPLC、TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應(yīng)3、鑒別二、β–內(nèi)酰胺類1）羥肟酸鐵反應(yīng)：NH2OH·HClFe3+茚三酮堿性酒石酸二、β–內(nèi)酰胺類4、檢查聚合物有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體吸光度殘留溶劑結(jié)晶性二、β–內(nèi)酰胺類4、檢查聚合物5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）二、β–內(nèi)酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應(yīng)，但其堿性降解產(chǎn)物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余5、含量測定二、β–內(nèi)酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）反應(yīng)分兩步進(jìn)行：水解反應(yīng)(按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行)氧化-還原反應(yīng)(無定量關(guān)系，受溫度、pH值和時(shí)間等因素影響，應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定)5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）反5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）因樣品中雜質(zhì)會(huì)消耗碘，故應(yīng)作空白試驗(yàn)。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿?？瞻自囼?yàn):空白試驗(yàn)與經(jīng)典空白試驗(yàn)不同：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）因5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）含量％＝×

×對照品％V樣空-V樣W對V對空-

V對W樣靈敏度高：樣品:碘=1:8反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高1份含量V對、V對空V樣、V樣空加試劑次序、反應(yīng)時(shí)間、滴定速度相同特點(diǎn)：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）含5、含量測定

-----------電位配位滴定法（汞量法）原理：青霉素不與汞鹽反應(yīng)，其堿性降解產(chǎn)物可與Hg2+絡(luò)和。Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+方法說明：

a、空白試驗(yàn)與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb、與碘量法相比，汞量法不需對照試驗(yàn)5、含量測定-----------電位配位滴定法（汞量法）原5、含量測定

-----------其他常用方法酸堿滴定法：應(yīng)用廣泛硫醇汞鹽法HPLC法：應(yīng)用廣泛咪唑HgCl2（λmax324～345nm）青霉素青霉烯酸硫醇汞鹽5、含量測定-----------其他常用方法酸堿滴定法：應(yīng)1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷；分子結(jié)構(gòu)中都含有多羥基；均為堿性抗生素；鏈霉素1.化學(xué)結(jié)構(gòu)三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖臨床應(yīng)用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個(gè)手性碳旋光性(糖)水溶性溶解度(氨基、羥基)強(qiáng)酸、堿條件均可水解穩(wěn)定性(苷)2、主要理化性質(zhì)三、氨基糖苷類臨床應(yīng)用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個(gè)手性碳旋光性(糖)3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應(yīng)：具羥基胺類，α-氨基酸性質(zhì)鏈霉素+

水和茚三酮藍(lán)紫色鏈霉素N-甲基葡萄糖胺N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應(yīng)：紅色水解對二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮OH-3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應(yīng)：具羥基胺類，α-氨基酸OH-重排Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-水解坂口（Sakaguchi）反應(yīng)：(鏈霉胍特有）麥芽酚（Maltol)反應(yīng)：(鏈霉糖特有）三、氨基糖苷類-------鑒別鏈霉素麥芽酚紫紅色鏈霉素鏈霉胍

橙紅硫酸鹽反應(yīng)或α-萘酚OH-Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-坂口（Sak4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產(chǎn)生BP:薄層色譜法（雜質(zhì)對照品法）要求：NC2≥2000，C2a峰和C2峰的分離度應(yīng)符合要求，重復(fù)進(jìn)樣RSD<2.0%三、氨基糖苷類鏈霉素中鏈霉素B的檢查慶大霉素C組分測定（系統(tǒng)適用性試驗(yàn)）色譜柱：ODS流動(dòng)相：

H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時(shí)調(diào)節(jié)甲醇的含量。檢測波長：

330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產(chǎn)生B4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法、HPLC法等4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法四、四環(huán)素類1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)四、四環(huán)素類1.化學(xué)結(jié)構(gòu)四、四環(huán)素類-OH：酸性N(CH3)2：堿性與酸、堿均可成鹽臨床多用鹽酸鹽兩性旋光性易發(fā)生異構(gòu)化，降解等反應(yīng)，性質(zhì)不穩(wěn)定穩(wěn)定性酚羥基、烯醇基與Ca2+、Mg2+絡(luò)合顯色與金屬離子絡(luò)合2、主要理化性質(zhì)UV和熒光四、四環(huán)素類-OH：酸性兩性旋光性易發(fā)生異構(gòu)化，降解等反應(yīng)四、四環(huán)素類

2.

主要理化性質(zhì)堿性C環(huán)開環(huán)，形成內(nèi)酯異四環(huán)素弱酸性（pH2-6）A環(huán)C-4異構(gòu)化差向四環(huán)素酸性（pH<2）C環(huán)脫水脫水四環(huán)素四、四環(huán)素類2.主要理化性質(zhì)堿性四、四環(huán)素類AApH2.0~6.0差向異構(gòu)體DDDCBBCBC脫水四環(huán)素類四、四環(huán)素類AApH2.0~6.0差向異構(gòu)體DDDCBBCB異四環(huán)素OH-四、四環(huán)素類異四環(huán)素OH-四、四環(huán)素類四、四環(huán)素類

3.

鑒別1）濃硫酸反應(yīng)2）FeCl3反應(yīng)：（酚羥基）顯紅色~褐色3）TLC、HPLC4）熒光：（含共軛雙鍵）紫外燈照射下產(chǎn)生不同顏色熒光HPLC法

4.

檢查TLC、HPLC法雜質(zhì)吸收度（降解產(chǎn)物顏色較深）殘留溶劑

5.

含量四、四環(huán)素類3.鑒別1）濃硫酸反應(yīng)HPLC法五、高分子雜質(zhì)的檢查內(nèi)源性：藥物自身聚合物來源于生產(chǎn)過程、貯存過程、使用不當(dāng)外源性：蛋白、多肽、多糖及其與藥物的結(jié)合物來源于發(fā)酵過程臨床應(yīng)用其硫酸鹽高分子雜質(zhì)凝膠色譜法：葡聚糖凝膠SephadexG-10雜質(zhì)控制方法五、高分子雜質(zhì)的檢查內(nèi)源性：藥物自身聚合物高分子雜質(zhì)凝膠感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請及時(shí)聯(lián)系我們刪除，謝謝配合！感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動(dòng)有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱β–內(nèi)酰胺類氨基糖苷類四環(huán)素類大環(huán)內(nèi)酯類多烯大環(huán)類多肽類1.抗生素（antibiotics）2.分類一、概述在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活

化學(xué)純度較低活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差3.來源4.抗生素的特點(diǎn)化學(xué)合成半合成生物合成（發(fā)酵）生產(chǎn)工藝復(fù)雜發(fā)酵過程不易控制，易受污染原因一、概述化學(xué)純度較低3.來源4.抗生素的特鑒別：物理化學(xué)方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)等含量/效價(jià)測定：

微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)；

理化方法：

準(zhǔn)確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質(zhì)量分析一、概述5.抗生素質(zhì)量分析一、概述1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類1.化學(xué)結(jié)構(gòu)包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6酸性較強(qiáng)（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個(gè)手性碳旋光性青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結(jié)構(gòu)UV（共軛）干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定穩(wěn)定性(內(nèi)酰胺)2、主要理化性質(zhì)降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素二、β–內(nèi)酰胺類酸性較強(qiáng)（pKa2.5-2.8）酸性(羧基)有多個(gè)手性碳旋1）羥肟酸鐵反應(yīng)：

β–內(nèi)酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應(yīng)

α-氨基藍(lán)紫色3）雙縮脲反應(yīng)

β–內(nèi)酰胺類紫紅色4）光譜法（UV、NMR）5）色譜法（HPLC、TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應(yīng)3、鑒別二、β–內(nèi)酰胺類1）羥肟酸鐵反應(yīng)：NH2OH·HClFe3+茚三酮堿性酒石酸二、β–內(nèi)酰胺類4、檢查聚合物有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體吸光度殘留溶劑結(jié)晶性二、β–內(nèi)酰胺類4、檢查聚合物5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）二、β–內(nèi)酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應(yīng)，但其堿性降解產(chǎn)物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余5、含量測定二、β–內(nèi)酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）反應(yīng)分兩步進(jìn)行：水解反應(yīng)(按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行)氧化-還原反應(yīng)(無定量關(guān)系，受溫度、pH值和時(shí)間等因素影響，應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定)5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）反5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）因樣品中雜質(zhì)會(huì)消耗碘，故應(yīng)作空白試驗(yàn)。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。空白試驗(yàn):空白試驗(yàn)與經(jīng)典空白試驗(yàn)不同：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）因5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）含量％＝×

×對照品％V樣空-V樣W對V對空-

V對W樣靈敏度高：樣品:碘=1:8反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高1份含量V對、V對空V樣、V樣空加試劑次序、反應(yīng)時(shí)間、滴定速度相同特點(diǎn)：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）含5、含量測定

-----------電位配位滴定法（汞量法）原理：青霉素不與汞鹽反應(yīng)，其堿性降解產(chǎn)物可與Hg2+絡(luò)和。Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+方法說明：

a、空白試驗(yàn)與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb、與碘量法相比，汞量法不需對照試驗(yàn)5、含量測定-----------電位配位滴定法（汞量法）原5、含量測定

-----------其他常用方法酸堿滴定法：應(yīng)用廣泛硫醇汞鹽法HPLC法：應(yīng)用廣泛咪唑HgCl2（λmax324～345nm）青霉素青霉烯酸硫醇汞鹽5、含量測定-----------其他常用方法酸堿滴定法：應(yīng)1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷；分子結(jié)構(gòu)中都含有多羥基；均為堿性抗生素；鏈霉素1.化學(xué)結(jié)構(gòu)三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖臨床應(yīng)用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個(gè)手性碳旋光性(糖)水溶性溶解度(氨基、羥基)強(qiáng)酸、堿條件均可水解穩(wěn)定性(苷)2、主要理化性質(zhì)三、氨基糖苷類臨床應(yīng)用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個(gè)手性碳旋光性(糖)3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應(yīng)：具羥基胺類，α-氨基酸性質(zhì)鏈霉素+

水和茚三酮藍(lán)紫色鏈霉素N-甲基葡萄糖胺N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應(yīng)：紅色水解對二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮OH-3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應(yīng)：具羥基胺類，α-氨基酸OH-重排Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-水解坂口（Sakaguchi）反應(yīng)：(鏈霉胍特有）麥芽酚（Maltol)反應(yīng)：(鏈霉糖特有）三、氨基糖苷類-------鑒別鏈霉素麥芽酚紫紅色鏈霉素鏈霉胍

橙紅硫酸鹽反應(yīng)或α-萘酚OH-Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-坂口（Sak4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產(chǎn)生BP:薄層色譜法（雜質(zhì)對照品法）要求：NC2≥2000，C2a峰和C2峰的分離度應(yīng)符合要求，重復(fù)進(jìn)樣RSD<2.0%三、氨基糖苷類鏈霉素中鏈霉素B的檢查慶大霉素C組分測定（系統(tǒng)適用性試驗(yàn)）色譜柱：ODS流動(dòng)相：

H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時(shí)調(diào)節(jié)甲醇的含量。檢測波長：

330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產(chǎn)生B4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法、HPLC法等4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法四、四環(huán)素類1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)四、四環(huán)素類1.化學(xué)結(jié)構(gòu)四、四環(huán)素類-OH：酸性N(CH3)2：堿性與酸、堿均可成鹽