花粉生活力測(cè)定(終)課件

實(shí)驗(yàn)五花粉發(fā)芽試驗(yàn)和

生活力的測(cè)定

指導(dǎo)教師：姜喜

2014.6.19學(xué)習(xí)和掌握果樹(shù)發(fā)芽試驗(yàn)和花粉生活力測(cè)定的技術(shù)?；ǚ垡?、實(shí)驗(yàn)?zāi)康墓麡?shù)雜交工作中，往往會(huì)遇到父母本花期不遇，必須采集花粉短暫貯藏，經(jīng)貯藏的花粉及其生活力如何，必須經(jīng)過(guò)測(cè)定，以保證雜交效果。正常條件下花粉在雌蕊上萌發(fā)的能力，就是花粉的生活力?；ǚ凵盍Φ母叩椭苯佑绊懼参锸诜?、受精乃至坐果。二、實(shí)驗(yàn)原理1、材料:

正在開(kāi)花的植株花粉2、器具:

蓋玻片載玻片培養(yǎng)皿滴管鑷子解剖針吸水紙水浴鍋恒溫箱天平燒杯玻棒電爐普通顯微鏡3、藥品:

蒸餾水硼酸蔗糖瓊脂聯(lián)苯胺α-奈酚碳酸鈉過(guò)氧化氫磷酸氫二鈉磷酸二氫鉀氯化三苯基四氮三、實(shí)驗(yàn)材料與用具配置培養(yǎng)基（1%瓊脂+0.01%硼酸+5%-20%蔗糖）

煮沸溶化用玻棒分裝與凹玻片中

播撒花粉置于培養(yǎng)皿中20-25℃恒溫培養(yǎng)數(shù)小時(shí)

保持濕度

鏡檢計(jì)數(shù)

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟（一）花粉發(fā)芽試驗(yàn)顯微鏡隔一定時(shí)間檢查一次隨機(jī)調(diào)查5個(gè)視野，若發(fā)現(xiàn)花粉已發(fā)芽時(shí)，就記錄花粉粒總數(shù)和發(fā)芽數(shù)，算出平均值，將觀察結(jié)果填入表內(nèi)?；ǚ郯l(fā)芽的標(biāo)準(zhǔn)：以花粉管伸長(zhǎng)超出花粉直徑為準(zhǔn)。若花粉發(fā)芽率在5%以下，為極弱，不能采用?；ǚ郯l(fā)芽率=發(fā)芽花粉總數(shù)/花粉總數(shù)*100★優(yōu)點(diǎn)：能夠統(tǒng)計(jì)出百分率，準(zhǔn)確度高★缺點(diǎn)：操作相對(duì)復(fù)雜，而且花粉發(fā)芽條件與實(shí)際不完全相符易受培養(yǎng)基配方的影響導(dǎo)致結(jié)果的偏差。【注意事項(xiàng)】1.不同種類(lèi)植物的花粉萌發(fā)所需溫度、蔗糖和硼酸濃度不同，應(yīng)依植物種類(lèi)而改變培養(yǎng)條件。2.此法也可用于觀察花粉管在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度以及不同蔗糖濃度，離體時(shí)間，環(huán)境條件等因素對(duì)花粉活力的影響。3.不是所有植物的花粉都能在此培養(yǎng)基上萌發(fā)，本法適用于易于萌發(fā)的植物花粉活力的測(cè)定。4h密集24h1過(guò)氧化物酶法：

具有生活力的花粉含有活躍的過(guò)氧化物酶。此酶能利用過(guò)氧化氫使各種多酚及芳香族胺發(fā)生氧化而產(chǎn)生顏色，依據(jù)顏色可知花粉有無(wú)活性。實(shí)驗(yàn)中甲液成分為聯(lián)苯胺，α-萘酚、碳酸鈉，乙液成分為過(guò)氧化氫。H2O2

+酚醌+H2O過(guò)氧化氫酶（無(wú)色）（紅色、玫瑰紅色）（二）花粉生活力的測(cè)定將適量花粉置于載玻片上先滴1滴甲液，再滴1滴乙液

充分反應(yīng)顯微鏡下鏡檢計(jì)數(shù)，紅色的為有活力的花粉★優(yōu)點(diǎn)：染色法用時(shí)短，見(jiàn)效快★優(yōu)點(diǎn)：顏色判斷易受個(gè)人因素影響，導(dǎo)致結(jié)果有較大差別。【注意事項(xiàng)】滴加甲液和乙液后，會(huì)產(chǎn)生大量的氣泡，待氣泡基本消失后方可觀察。統(tǒng)計(jì)生活力的方法同前。TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于檢驗(yàn)花粉呼吸過(guò)程中脫氫酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化狀是無(wú)色的，被氫還原時(shí)成紅色的TTF。有活力2TTC法：（1）取少量花粉放在載玻片上，并在花粉上滴上1~2滴配制液，用玻璃棒混合蓋上蓋玻片。（2）將載玻片置于恒溫箱中（35~40℃）約15~20分鐘。（3）在顯微鏡下觀察：凡具有生活力的花粉呈紅色，部分喪失生活力的呈淡紅色，無(wú)色的是死的和不育的花粉粒。（4）觀察和測(cè)定結(jié)果：每片觀察3個(gè)視野，并統(tǒng)計(jì)具有生活力的花粉的百分率。以碘－碘化鉀溶液（

0.3g

碘＋

1.3g

碘化鉀溶于

100ml

蒸餾水）染色后于顯微鏡下觀察。

有活力無(wú)活力3、碘－碘化鉀法請(qǐng)思考1、將培養(yǎng)基法和染色法兩種方法測(cè)得的結(jié)果列表記錄，并計(jì)算花粉的生活力。2、比較測(cè)定花粉生活力三種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。3、繪制一花粉粒發(fā)芽形態(tài)圖。五、結(jié)果與分析花粉發(fā)芽試驗(yàn)觀察記載表品種培養(yǎng)基配方視野1視野2視野3花粉總數(shù)(個(gè)）發(fā)芽數(shù)(個(gè)）萌發(fā)率(%)花粉總數(shù)(個(gè)）發(fā)芽數(shù)(個(gè)）萌發(fā)率(%)花粉總數(shù)(個(gè)）發(fā)芽數(shù)(個(gè)）萌發(fā)率(%)1

2

3

4

5

花粉活力測(cè)定觀察記載表品種染色方法視野1視野2視野3花粉總數(shù)(個(gè)）染色數(shù)(個(gè)）生活力(%)花粉總數(shù)(個(gè)）染色數(shù)(個(gè)）生活力(%)花粉總數(shù)(個(gè)）染色數(shù)(個(gè)）生活力(%)1