細菌的診斷與防治

細菌感染的診斷

方法與防治原則第七章第1頁，共27頁。1安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室一、臨床標(biāo)本的采集原則：無菌采集嚴格無菌操作，避免標(biāo)本被污染。標(biāo)本分離病原菌時，應(yīng)注意某些特定部位的正常菌群。第一節(jié)細菌學(xué)診斷第2頁，共27頁。2安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室不同疾病、不同時期取不同部位標(biāo)本

如流腦病人取CSF、血液或出血瘀斑；傷寒病人在病程1～2周內(nèi)取血液，2～3周時取糞便。盡可能取病變明顯部位的材料

取局部病變標(biāo)本，不可使用消毒劑，必要時以無菌生理鹽水沖洗，拭干后取材。第3頁，共27頁。3安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室早期采集

采集時間最好是病程早期、急性期或癥狀典型時，且必須在抗菌藥物使用前，否則這份標(biāo)本在分離培養(yǎng)時要加入藥物拮抗劑。盡快送檢、冷藏運送一般標(biāo)本采集后最好在2h內(nèi)送檢，大多細菌可4℃冷藏運送、特殊（如：腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保溫立即送檢。糞便標(biāo)本中雜菌多，常置于甘油緩沖鹽水保存液中。第4頁，共27頁。4安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室生物安全

采取烈性傳染病或感染原因不明患者的臨床標(biāo)本，務(wù)必注意安全性。例如：接觸患者血液、體液和破損皮膚時應(yīng)戴上手套。第5頁，共27頁。5安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室（一）直接涂片染色鏡檢

形態(tài)和染色性上有特征的致病菌，直接涂片鏡檢后有助于初步診斷。如：痰中查抗酸性桿菌，膿液中找G+葡萄串狀球菌，糞便中查霍亂弧菌等。二、細菌學(xué)診斷方法第6頁，共27頁。6安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室原則上所有標(biāo)本均應(yīng)作分離培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)后進一步鑒定，根據(jù)不同要求選用不同培養(yǎng)基。分離培養(yǎng)比直接涂片鏡檢陽性率高，但需時較久；大多細菌16～20h，結(jié)核分枝桿菌需4～8w。

分離培養(yǎng)是微生物學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。（二）分離培養(yǎng)：第7頁，共27頁。7安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室各種細菌所具有的酶不完全相同，對營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力亦不一致，因而其代謝產(chǎn)物有別，藉此可對不同致病菌進行鑒別（如腸道桿菌）。（三）生化試驗：第8頁，共27頁。8安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室含特異抗體的免疫血清＋未知純種細菌進行血清學(xué)檢查，可確定致病菌的種和型。凝集試驗：玻片凝集試驗

免疫標(biāo)記技術(shù)：ELISA（四）血清學(xué)試驗：第9頁，共27頁。9安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室主要用于分離、鑒定致病菌，測定菌株產(chǎn)毒性等。常用動物：小鼠、豚鼠、家兔等。接種途徑：皮內(nèi)、皮下、腹腔、肌肉、靜脈、腦內(nèi)等。

動物試驗：第10頁，共27頁。10安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室測定標(biāo)本中致病菌對藥物的敏感程度；對指導(dǎo)臨床用藥及控制感染有重要意義。常用：紙碟法和試管稀釋法。

藥物敏感試驗：第11頁，共27頁。11安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室金黃色葡萄球菌的紙片藥敏試驗:金黃色葡萄球菌對青霉素、先鋒霉素和紅霉素很敏感，但對慶大霉素敏感性稍差些。大腸埃希菌的紙片藥敏試驗:大腸埃希菌對先鋒霉素和慶大霉素敏感，但對青霉素和紅霉素則無抑制作用。第12頁，共27頁。12安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室原理:

用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異性抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。標(biāo)本:

診斷最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本，當(dāng)后者的抗體效價比前者升高≥4倍方有意義。

第二節(jié)血清學(xué)診斷第13頁，共27頁。13安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室種類:凝集試驗：沉淀試驗：補體結(jié)合試驗：中和試驗：

肥達試驗、外斐試驗、顯微鏡凝集試驗等梅毒VDRL、RPR試驗等抗“O”試驗等Q熱柯克斯體抗體檢測等第14頁，共27頁。14安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室PCR：

RT-PCR、實時熒光定量PCRDNA探針技術(shù)：

原位雜交、Southern/Nouthern印跡法DNA芯片技術(shù)第三節(jié)分子生物學(xué)診斷第15頁，共27頁。15安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室致病菌檢驗程序第16頁，共27頁。16安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室第四節(jié)細菌感染的特異性防治自然免疫NaturalImmunization自然主動免疫：隱性或顯性感染自然被動免疫：通過胎盤或初乳獲得母體抗體人工免疫ArtificialImmunization人工主動免疫：接種疫苗或類毒素等人工被動免疫：注射抗毒素或丙種球蛋白等第17頁，共27頁。17安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室

人為地將疫苗或類毒素等免疫原接種于人體，使機體主動產(chǎn)生特異性免疫力的過程，是一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。常用人工主動免疫制劑有：一、人工主動免疫第18頁，共27頁。18安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室選用免疫原性強的細菌經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法殺死而成；如傷寒、百日咳、霍亂等滅活疫苗。

優(yōu)點：易于制備和保存。缺點：接種劑量大；維持時間短；接種次數(shù)多；注射的局部和全身性副反應(yīng)較大；不產(chǎn)生細胞或黏膜免疫應(yīng)答。（一）滅活疫苗：第19頁，共27頁。19安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室

用減毒或無毒力的活病原體制成；如：BCG

優(yōu)點：只需接種一次、接種劑量較小、副反應(yīng)輕微或無、免疫效果好且持久、能同時產(chǎn)生細胞免疫和體液免疫；以自然途徑接種，可形成局部粘膜免疫（SIgA）。

缺點：不易保存（冷藏且保存期短）、

回復(fù)毒力的危險性（毒力基因缺失活疫苗）（二）減毒活疫苗：第20頁，共27頁。20安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室死疫苗與活疫苗的區(qū)別第21頁，共27頁。21安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室

由微生物主要保護性抗原制成不含核酸，可以誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體的疫苗稱為亞單位疫苗。如：腦膜炎球菌的莢膜多糖，乙肝疫苗等。（三）亞單位疫苗：第22頁，共27頁。22安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室外毒素經(jīng)0.3～0.4%甲醛作用3～4周后，毒性消失仍保持免疫原性的制品。如：白百破三聯(lián)疫苗（DPT）是將白喉類毒素、百日咳死菌苗、破傷風(fēng)類毒素混合而成。類毒素：第23頁，共27頁。23安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室

是注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細胞因子等細胞免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫力的過程。

主要用于治療或緊急預(yù)防。

二、人工被動免疫第24頁，共27頁。24安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室人工被動免疫常用試劑有：1、抗毒素：

用細菌類毒素或外毒素多次免疫馬匹，分離血清提取其免疫球蛋白精制成抗毒素制劑；能中和外毒素。如：白喉抗毒素、TAT；使用此制劑前必須作皮試。２、胎盤球蛋白/丙種球蛋白第25頁，共27頁。25安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室區(qū)別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細胞因子等免疫出現(xiàn)時間慢，2~4周快，立即免疫維持時間長，數(shù)年~數(shù)月短，2~3周主要用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防人工主動免疫與人工被動免疫的區(qū)別第26頁，共27頁。26安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室內(nèi)容梗概細菌感染的診斷

方法與防治原則。安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室。第一節(jié)細菌學(xué)診斷。不同疾病、不同時期取不同部位標(biāo)本。傷寒病人在病程1～2周內(nèi)取血液，2～3周時取糞便。早期采集。采集時間最好是病程早期、急性期或癥狀典型時，且必須在抗菌藥物使用前，否則這份標(biāo)本在分離培養(yǎng)時要加入藥物拮抗劑。一般標(biāo)本采集后最好在2h內(nèi)送檢，大多細菌可4℃冷藏運送、特殊（如：腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保溫立即送檢。原則上所有標(biāo)本均應(yīng)作分離培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)后進一步鑒定，根據(jù)不同要求選用不同培養(yǎng)基。大多細菌16～20h，結(jié)核分枝桿菌需4～8w。（三）生化試驗：。含特異抗體的免疫血清＋未知純種細菌進行血清學(xué)檢查，可確定致病菌的種和型。動物試驗