空氣消毒效果鑒定試驗(yàn)

空氣消毒效果鑒定試驗(yàn)2.1.3.1

目的

檢測(cè)消毒器械或消毒劑對(duì)空氣中細(xì)菌的殺滅和(或)清除作用，以驗(yàn)證其對(duì)空氣的消毒效果。其他方法對(duì)空氣的消毒效果，亦可參照本試驗(yàn)的有關(guān)原則進(jìn)行。2.1.3.2

試驗(yàn)設(shè)備和器材(1)試驗(yàn)菌為白色葡萄球菌8032，其菌懸液的制備方法見(jiàn)2.1.1.2。(2)采樣液[用于液體撞擊式采樣器采樣。非化學(xué)因子殺菌試驗(yàn)時(shí)，用含抗泡沫劑（辛醇或橄欖油）的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；消毒劑殺菌試驗(yàn)時(shí)，用含相應(yīng)中和劑的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（同樣加入辛醇或橄欖油）]。(3)中和劑(按2.1.1.5方法鑒定合格者)。(4)磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。(5)普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基。(6)普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。消毒劑殺菌試驗(yàn)時(shí)，尚需在其中加入相應(yīng)的中和劑。(7)相鄰的一對(duì)氣霧柜或氣霧室，一個(gè)用于消毒試驗(yàn)，一個(gè)用于試驗(yàn)對(duì)照。一對(duì)氣霧柜或氣霧室所處環(huán)境(包括溫度、濕度、光照、密閉性、和通風(fēng)條件等)應(yīng)一致。柜(或室)宜以鋁合金和玻璃構(gòu)建。應(yīng)安裝溫度和濕度調(diào)節(jié)裝置以及通風(fēng)機(jī)過(guò)濾除菌或其它消毒裝置和相應(yīng)管道，此外，還應(yīng)開(kāi)設(shè)供噴霧染菌、給消毒劑、采樣等的袖套操作和樣本傳遞等窗口。(8)噴霧染菌裝置，包括空氣壓縮機(jī)、壓力表、氣體流量計(jì)和氣溶膠噴霧器等。噴出細(xì)菌氣溶膠微粒的直徑90%以上應(yīng)在1μm～10μm之間。(9)空氣微生物采樣裝置，包括六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器、液體撞擊式采樣器、抽氣設(shè)備、氣體流量計(jì)等。(10)環(huán)境監(jiān)測(cè)器材，如溫度計(jì)、濕度計(jì)等。2.1.3.3

試驗(yàn)階段空氣消毒試驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)與現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。三個(gè)階段試驗(yàn)的特點(diǎn)見(jiàn)表2-5。2.1.3.4

實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)與模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)操作程序(1)取試驗(yàn)菌菌懸液，用無(wú)菌脫脂棉過(guò)濾后，再用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基稀釋成所需濃度。(2)同時(shí)調(diào)節(jié)兩個(gè)氣霧柜(或室)的溫度、相對(duì)濕度至試驗(yàn)要求的溫度和相對(duì)濕度。(3)將使用的器材一次放入氣霧柜(或室)內(nèi)，將門(mén)關(guān)閉。此后，一切操作和儀器設(shè)備的操縱均在柜(或室)外通過(guò)帶有密封袖套的窗口或搖控器進(jìn)行。直至試驗(yàn)結(jié)束，始可將門(mén)打開(kāi)。(4)按設(shè)定的壓力、氣體流量及噴霧時(shí)間噴霧染菌。邊噴霧染菌，邊用風(fēng)扇攪拌。噴霧染菌完畢，繼續(xù)攪拌5min，而后靜置5min。（5）同時(shí)對(duì)對(duì)照組和試驗(yàn)組氣霧柜(或室)分別進(jìn)行消毒前采樣，作為對(duì)照組試驗(yàn)開(kāi)始前和試驗(yàn)組消毒處理前的陽(yáng)性對(duì)照(即污染菌量)。氣霧柜(或室)內(nèi)空氣中各陽(yáng)性對(duì)照菌數(shù)應(yīng)達(dá)5′104cfu/m3～5′106cfu/m3。表2-5

各階段空氣消毒試驗(yàn)的特點(diǎn)項(xiàng)

目

實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)

模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)

現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)

目

的

測(cè)定最低有效劑量

測(cè)定最低有效劑量

驗(yàn)證實(shí)用消毒效果

試驗(yàn)柜(室)

≥1m3柜

10m3～20m3室

≥20m3房間

采樣器

液體撞擊式

六級(jí)篩孔空氣撞擊式

六級(jí)篩孔空氣撞擊式

菌

株

白色葡萄球菌

白色葡萄球菌

空氣中自然菌

試驗(yàn)菌霧粒

<10μm

<10μm

不

定

溫

度

20℃～25℃

20℃～25℃

自然條件

相對(duì)濕度

50%～70%

50%～70%

自然條件

中和劑

加于采樣液中

加于采樣培養(yǎng)基中

加于采樣培養(yǎng)基中

對(duì)

照

需有自然消亡對(duì)照

需有自然消亡對(duì)照

不需自然消亡對(duì)照結(jié)果計(jì)算

殺滅率

殺滅率

消亡率

在模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)時(shí)，用六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器采樣，采樣時(shí)，將六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器放在柜室中央1m高處(采樣方法按采樣器使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行)。在實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)時(shí)，用液體撞擊式采樣器采樣，采樣器置柜內(nèi)中央處。

(6)按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)規(guī)定的方法，在試驗(yàn)組氣霧柜(或室)內(nèi)進(jìn)行消毒。對(duì)照組氣霧柜室同時(shí)作相應(yīng)(不含消毒劑)處理。

(7)作用至規(guī)定時(shí)間，對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照氣霧柜(或室)按前述方法同時(shí)進(jìn)行采樣。繼續(xù)作用至第二個(gè)預(yù)定消毒時(shí)間，再次按前述方法進(jìn)行采樣。如此按作用時(shí)間分段采樣，直至規(guī)定的最終作用時(shí)間為止。

(8)在實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)階段，用液體撞擊式采樣器采集的樣本，按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，觀察最后結(jié)果。

(9)在模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)階段，用六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器采樣時(shí)，采樣平板直接放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，觀察最后結(jié)果，計(jì)數(shù)生長(zhǎng)菌落數(shù)。

(10)全程試驗(yàn)完畢，對(duì)氣霧柜（室）表面和空氣中殘留的細(xì)菌做最終消毒后，打開(kāi)通風(fēng)機(jī)，過(guò)濾除菌排風(fēng)，排除柜(或室)內(nèi)滯留的污染空氣，為下一次試驗(yàn)作好準(zhǔn)備。

(11)在完成試驗(yàn)組與陽(yáng)性對(duì)照組采樣和樣本接種后，應(yīng)將未用的同批培養(yǎng)基、采樣液和PBS等(各取1份～2份)，與上述兩組樣本同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)或接種后培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照。若陰性對(duì)照組有菌生長(zhǎng)，說(shuō)明所用培養(yǎng)基或試劑有污染，試驗(yàn)無(wú)效，更換無(wú)菌器材重新進(jìn)行。

(12)同一條件試驗(yàn)重復(fù)3次，每次均分別計(jì)算其殺滅率。3次結(jié)果的殺滅率均≥99.90%時(shí)，可判為消毒合格。殺滅率的計(jì)算方法如下:

Nt:空氣中細(xì)菌的自然消亡率;

V0與Vt:分別為對(duì)照組試驗(yàn)開(kāi)始前和試驗(yàn)過(guò)程中不同時(shí)間的空氣含菌量;Kt:消毒處理對(duì)空氣中細(xì)菌的殺滅率;V0'與Vt':分別為試驗(yàn)組消毒處理前、和消毒過(guò)程中不同時(shí)間的空氣含菌量。消毒前后空氣中的含菌量按下列公式計(jì)算：[舉例:用某消毒劑對(duì)氣霧柜內(nèi)空氣消毒10min，試驗(yàn)組消毒前空氣含菌量為100000cfu/m3，消毒后為50cfu/m3;對(duì)照組處理前空氣含菌量為90000cfu/m3，處理后為50000cfu/m3。該消毒劑作用10min對(duì)空氣中微生物的殺滅率按下法計(jì)算:

①細(xì)菌在空氣中10min的自然消亡率為：

②對(duì)空氣中微生物的殺滅率為:

該次試驗(yàn)，消毒劑作用10min，可將空氣中細(xì)菌殺滅99.91%。2.1.3.5

現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)

(1)根據(jù)使用時(shí)的實(shí)際情況，選擇有代表性的房間并在室內(nèi)無(wú)人情況下進(jìn)行消毒效果觀察。觀察時(shí)，在消毒處理前用六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器進(jìn)行空氣中自然菌采樣，作為消毒前樣本(陽(yáng)性對(duì)照)。消毒處理后，再作一次采樣，作為消毒后的試驗(yàn)樣本。

(2)采樣時(shí)，采樣器置室內(nèi)中央1.0m高處。房間大于10m2者，每增加10m2增設(shè)一個(gè)采樣點(diǎn)。

(3)因現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)環(huán)境條件變化較多，難以統(tǒng)一，無(wú)法測(cè)定準(zhǔn)確的自然沉降率，故只按所得消亡率(自然衰亡和消毒處理中殺菌的綜合效果)做出驗(yàn)證結(jié)論。消亡率的計(jì)算按下式進(jìn)行:[舉例:一無(wú)人手術(shù)室，消毒前采樣，空氣中的平均含菌量為5000cfu/m3。用某消毒劑噴霧對(duì)室內(nèi)空氣消毒30min后采樣，含菌量減至50cfu/m3。該消毒劑處理30min后，室內(nèi)空氣中自然菌的消亡率可按下法計(jì)算:

該消毒劑作用30min，可使房間內(nèi)空氣中自然菌的消亡率達(dá)99.00%。

(4)試驗(yàn)采樣完成后，應(yīng)將未用的同批培養(yǎng)基，與上述試驗(yàn)樣本同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)或接種后培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照組若有菌生長(zhǎng)，說(shuō)明所用培養(yǎng)基有污染，試驗(yàn)無(wú)效，更換后重新進(jìn)行。

(5)試驗(yàn)重復(fù)3次或以上。計(jì)算出每次的消亡率。除有特殊要求者外，對(duì)無(wú)人室內(nèi)進(jìn)行的空氣消毒，每次的自然菌消亡率均≥90%者為合格。2.1.3.6

注意事項(xiàng)

(1)試驗(yàn)中，因控制統(tǒng)一的條件較難，故每次均需同時(shí)設(shè)置試驗(yàn)組與對(duì)照組。兩組條件盡量保持一致。消毒前、后及不同次數(shù)間的環(huán)境條件亦應(yīng)盡量保持一致。

(2)注意記錄試驗(yàn)過(guò)程中的溫度和相對(duì)濕度，以便分析對(duì)比。

(3)所采樣本應(yīng)盡快進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，以免影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

(4)每次試驗(yàn)完畢，氣霧柜、氣霧室應(yīng)充分通風(fēng)。必要時(shí)消毒沖洗，間隔4h后始可做第