課題2-土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)-課件2

課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)課題2引言：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。思考1：為何細菌能將尿素分解成氨？土壤中的細菌能合成催化分解尿素的脲酶CO(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O引言：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。思考3：①怎樣從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌？②怎樣統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌？思考2：土壤中有哪些細菌能分解尿素？芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。（一）篩選菌株方法：——使用以尿素為唯一N源的選擇培養(yǎng)基篩選。一、基礎知識：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4分離分解尿素細菌的選擇培養(yǎng)基配方將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000ml。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO41、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。（二）統(tǒng)計菌落數(shù)目方法：（1）不能區(qū)分死菌與活菌；（2）不適于對運動細菌的計數(shù)；（3）個體小的細菌在顯微鏡下難以統(tǒng)計計數(shù)；缺點：1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定2.間接計數(shù)法：——稀釋涂布平板統(tǒng)計。2.間接計數(shù)法：——稀釋涂布平板統(tǒng)計。（2）同一稀釋度下，應涂布三個或三個以上的涂布平板。（1）分離不同微生物要有不同的稀釋度：細菌一般為104，105，106

。放線菌一般為103，104，105。真菌一般為102，103，104。（3）培養(yǎng)時，還應設置一個空白平板和三個涂布平板一起培養(yǎng)。目的：前者是為了檢測培養(yǎng)基是否被污染或者滅菌是否徹底；后者是為了增強實驗的說服力與準確性。（2）同一稀釋度下，應涂布三個或三個以上的涂布平板。（1）分（4）統(tǒng)計計數(shù)時：為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進行計數(shù)，并要計算出某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mＬ)；M代表稀釋倍數(shù)。（5）每克樣品中的菌落數(shù)的計算公式：（4）統(tǒng)計計數(shù)時：為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30————統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。因為當兩個或多個活菌重疊生長時，平板上只觀察到一個菌落。（6）稀釋涂布平板統(tǒng)計法的特點：——統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。因為當兩個或多個活菌重二.實驗操作

1、土壤取樣

選擇肥沃、濕潤的土壤，先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好信封中?！羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。2、制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。二.實驗操作◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行◆應采用104，105，106三種不同的稀釋度3、樣品的稀釋◆應在火焰旁稱取土壤10g。◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行◆應采用104、取樣涂布4、取樣涂布◆如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大，表明稀釋操作不精確，需要重新實驗?！敉幌♂尪认拢瑧坎既齻€或三個以上的平板。◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等?！羧绻玫搅?個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則5、微生物的培養(yǎng)與觀察（1）培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。（2）在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。5、微生物的培養(yǎng)與觀察（1）培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫三.結果分析與評價：四.課外延伸

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，可以用來檢測某種細菌能否分解尿素。——如果指示劑變紅，則說明培養(yǎng)基的PH升高，那該細菌就能夠分解尿素。三.結果分析與評價：——如果指示劑變紅，則說明培養(yǎng)基的PH升課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)課題2引言：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。思考1：為何細菌能將尿素分解成氨？土壤中的細菌能合成催化分解尿素的脲酶CO(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O引言：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。思考3：①怎樣從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌？②怎樣統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌？思考2：土壤中有哪些細菌能分解尿素？芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。（一）篩選菌株方法：——使用以尿素為唯一N源的選擇培養(yǎng)基篩選。一、基礎知識：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4分離分解尿素細菌的選擇培養(yǎng)基配方將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000ml。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO41、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。（二）統(tǒng)計菌落數(shù)目方法：（1）不能區(qū)分死菌與活菌；（2）不適于對運動細菌的計數(shù)；（3）個體小的細菌在顯微鏡下難以統(tǒng)計計數(shù)；缺點：1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定2.間接計數(shù)法：——稀釋涂布平板統(tǒng)計。2.間接計數(shù)法：——稀釋涂布平板統(tǒng)計。（2）同一稀釋度下，應涂布三個或三個以上的涂布平板。（1）分離不同微生物要有不同的稀釋度：細菌一般為104，105，106

。放線菌一般為103，104，105。真菌一般為102，103，104。（3）培養(yǎng)時，還應設置一個空白平板和三個涂布平板一起培養(yǎng)。目的：前者是為了檢測培養(yǎng)基是否被污染或者滅菌是否徹底；后者是為了增強實驗的說服力與準確性。（2）同一稀釋度下，應涂布三個或三個以上的涂布平板。（1）分（4）統(tǒng)計計數(shù)時：為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進行計數(shù)，并要計算出某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mＬ)；M代表稀釋倍數(shù)。（5）每克樣品中的菌落數(shù)的計算公式：（4）統(tǒng)計計數(shù)時：為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30————統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。因為當兩個或多個活菌重疊生長時，平板上只觀察到一個菌落。（6）稀釋涂布平板統(tǒng)計法的特點：——統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。因為當兩個或多個活菌重二.實驗操作

1、土壤取樣

選擇肥沃、濕潤的土壤，先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好信封中?！羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。2、制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。二.實驗操作◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行◆應采用104，105，106三種不同的稀釋度3、樣品的稀釋◆應在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中，每一步都要在火焰旁進行◆應采用104、取樣涂布4、取樣涂布◆如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大，表明稀釋操作不精確，需要重新實驗?！敉幌♂尪认拢瑧坎既齻€或三個以上的平板?！魧嶒灂r要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。◆如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則5、微生物的培養(yǎng)與觀察（1）培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。（2）在菌落計數(shù)時，每