蛋白質(zhì)與氨基酸課件

蛋白質(zhì)與氨基酸主要介紹氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能以及蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。還介紹了一些基本技術(shù)如氨基酸的分離、純化，多肽的人工合成，蛋白質(zhì)的分離、純化、鑒定等。蛋白質(zhì)與氨基酸主要介紹氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能以一、蛋白質(zhì)的重要性和一般組成

（一）重要性

有些蛋白質(zhì)是生物體的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，

有些蛋白質(zhì)是生物體的功能物質(zhì)。

近年來的研究還指出蛋白質(zhì)在遺傳信息的控制，細(xì)胞膜的通透性以及高等動(dòng)物的記憶等方面起了重要作用。

總而言之，一切重要的生理活動(dòng)都離不開蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)是生命現(xiàn)象的最基本的物質(zhì)基礎(chǔ)。

幾年前，在歐洲乃至全世界引起恐慌的瘋牛病，其致病元兇就是蛋白粒子（prion），這種只有蛋白質(zhì)而沒有核酸的病原體，可引起人或動(dòng)物的瘋牛病，這一發(fā)現(xiàn)又一次說明了蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。一、蛋白質(zhì)的重要性和一般組成（一）重要性有些蛋白質(zhì)是生物（二）一般組成

元素組成：所有蛋白質(zhì)都含有C、H、O、N

四種元素，大多數(shù)蛋白質(zhì)還含有少量的S，有些蛋白質(zhì)還含有一些其它元素，如P、Fe、Cu、Mo、I等。

各種蛋白質(zhì)的含氮量都很接近，都在16%左右，因此可通過測定生物樣品中的含氮量計(jì)算出樣品中蛋白質(zhì)的含量，1克氮就相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì)。

（二）一般組成元素組成：所有蛋白質(zhì)都含有C、H、

蛋白質(zhì)水解：用H+，OH-或酶將蛋白質(zhì)徹底水解，可以得到許多種氨基酸的混合物，說明氨基酸是蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位。蛋白質(zhì)水解：用H+，OH-或酶將蛋白質(zhì)徹底水解，可以二、蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位——氨基酸（aminoacid,aa或AA）

（一）氨基酸的通式、分類、結(jié)構(gòu)和代號1、氨基酸的通式或二、蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位——氨基酸（amino（一）氨基酸2、氨基酸的分類、結(jié)構(gòu)、代號氨基酸有兩種分類方法(1)按側(cè)鏈R基的結(jié)構(gòu)2、氨基酸的分類、結(jié)構(gòu)、代號氨基酸有兩種分類方法(1)按側(cè)(2)按側(cè)鏈R基的極性(2)按側(cè)鏈R基的極性中性氨基酸氨基酸的結(jié)構(gòu)、代號:中性氨基酸氨基酸的結(jié)構(gòu)、代號:蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件（二）氨基酸的構(gòu)型、旋光性和光吸收

構(gòu)型：組成蛋白質(zhì)的氨基酸除Gly以外都有手性碳原子，在三維空間上就有兩種不同的排列方式，它們互為鏡影，這兩種不同的構(gòu)型分別稱為D-型和L-型。（二）氨基酸的構(gòu)型、旋光性和光吸收構(gòu)型：組成蛋白質(zhì)以丙氨酸為例：以丙氨酸為例：

如含兩個(gè)手性碳原子，則有４種立體異構(gòu)體，分別稱為Ｄ-,Ｌ-，Ｄ別-和Ｌ別-氨基酸。L-蘇氨酸(L-threonine)D-蘇氨酸(D-threonine)L-別-蘇氨酸(L-allo-threonine)D-別-蘇氨酸(D-allo-threonine)如含兩個(gè)手性碳原子，則有４種立體異構(gòu)體，分別稱為Ｄ-蛋白質(zhì)中的氨基酸都是L-型。

(Gly除外)蛋白質(zhì)中的氨基酸都是L-型。(Gly除外)旋光性：

組成蛋白質(zhì)的氨基酸除Gly以外，都有手性碳原子，

所以都有旋光性，能使偏振光的偏振面的向左或向右旋轉(zhuǎn)，向左旋轉(zhuǎn)的稱左旋，用“一”號表示，向右旋轉(zhuǎn)的稱右旋，用“＋”號表示。旋光度，比旋光度消旋外消旋內(nèi)消旋旋光性：組成蛋白質(zhì)的氨基酸除Gly以外，都有手性碳原蛋白質(zhì)與氨基酸課件光吸收：

組成蛋白質(zhì)的氨基酸中，Trp、Tyr和Phe對紫外光有一定的吸收，這是因?yàn)樗鼈兎肿又泻斜江h(huán)，是苯環(huán)的共軛雙鍵造成的，這三個(gè)氨基酸的光吸收都在280nm附近。光吸收：組成蛋白質(zhì)的氨基酸中，Trp、Tyr和Ph蛋白質(zhì)與氨基酸課件（三）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點(diǎn)

1、氨基酸的兩性離子形式兩性離子(dipolarion)（三）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點(diǎn)1、氨基酸的兩性離子形式兩2、氨基酸的兩性解離和等電點(diǎn)Br?nsted的酸堿理論，即廣義酸堿理論。HAA-+H+酸堿質(zhì)子2、氨基酸的兩性解離和等電點(diǎn)Br?nsted的酸堿理論，即

氨基酸在水中的兩性離子既能像酸一樣放出質(zhì)子，也能像堿一樣接受質(zhì)子，氨基酸具有酸堿性質(zhì)，是一類兩性電解質(zhì)。Asanacid（protondonor）：Asabase（protonacceptor）：氨基酸在水中的兩性離子既能像酸一樣放出質(zhì)子，也能像堿不同pH時(shí)氨基酸以不同的離子化形式存在：

正離子兩性離子負(fù)離子

氨基酸所帶靜電荷為“零”時(shí)，溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點(diǎn)（isoelectricpoint），以pI表示。不同pH時(shí)氨基酸以不同的離子化形式存在：正離子兩性離子負(fù)離

實(shí)驗(yàn)證明在等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸主要以兩性離子形式存在，但也有少量的而且數(shù)量相等的正、負(fù)離子形式，還有極少量的中性分子。當(dāng)溶液的pH=pI時(shí)，氨基酸主要從兩性離子形式存在。

pH<pI時(shí)，氨基酸主要以正離子形式存在。

pH>pI時(shí)，氨基酸主要以負(fù)離子形式存在。

實(shí)驗(yàn)證明在等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸主要以兩性離子形式存在，但3．氨基酸的酸堿滴定曲線Henderson-Hasselbalch方程pH=pKa+lg[質(zhì)子受體][質(zhì)子供體]酸堿滴定曲線3．氨基酸的酸堿滴定曲線Henderson-Hasselb蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件4．等電點(diǎn)的計(jì)算中性氨基酸：以Gly為例K1=[Gly±][H+][Gly+]K2=[Gly-][H+][Gly±]pI時(shí)，[Gly+]=[Gly-][Gly±][H+]K1=[Gly±]K2[H+][H+]2=K1K2pH=（pK1+pK2）/2pI=（pK1+pK2）/2pI=（2.34+9.60）/2=5.97Gly4．等電點(diǎn)的計(jì)算中性氨基酸：以Gly為例K1=[Gly±酸性氨基酸，以Asp為例：酸性氨基酸，以Asp為例：堿性氨基酸，以Lys為例：堿性氨基酸，以Lys為例：（四）氨基酸的化學(xué)性質(zhì)

（四）氨基酸的化學(xué)性質(zhì)1．α-氨基參加的反應(yīng)

（1）成鹽作用1．α-氨基參加的反應(yīng)（1）成鹽作用（2）與HNO2的反應(yīng)（2）與HNO2的反應(yīng)（3）與甲醛的反應(yīng)（3）與甲醛的反應(yīng)蛋白質(zhì)與氨基酸課件甲醛滴定要注意幾點(diǎn)甲醛滴定的優(yōu)缺點(diǎn)甲醛滴定要注意幾點(diǎn)甲醛滴定的優(yōu)缺點(diǎn)（4）?；磻?yīng)酰氯：芐氧酰氯（Cbz-Cl）:對甲苯磺酰氯(Tos-Cl):叔丁氧酰氯(Boc-Cl):酸酐：鄰苯二甲酸酐：（R’＝?；?）?；磻?yīng)酰氯：芐氧酰氯（Cbz-Cl）:對甲苯磺酰Cbz-ClCbz-氨基酸Cbz-ClCbz-氨基酸氨基酸與5一二甲氨基萘-1-磺酰氯（dansylchloride,DNS）的反應(yīng)氨基酸與5一二甲氨基萘-1-磺酰氯（dansylchlo（5）烴基化反應(yīng)①與2、4一二硝基氟苯的反應(yīng)2，4一二硝基氟苯（R’＝烴基）（5）烴基化反應(yīng)①與2、4一二硝基氟苯的反應(yīng)2，4一二DNFBDNP-氨基酸（黃色）DNFBDNP-氨基酸（黃色）②與苯異硫氰酸（酯）的反應(yīng)PITCPTC-氨基酸PTH-氨基酸②與苯異硫氰酸（酯）的反應(yīng)PITCPTC-氨基酸PTH-2．α-羧基參加的反應(yīng)

（1）成鹽和成酯反應(yīng)2．α-羧基參加的反應(yīng)（1）成鹽和成酯反應(yīng)?；被釋ο趸椒吁；被釋?硝基苯酯（活化酯）（式中Y＝酰基）?；被釋ο趸椒吁；被釋?硝基苯酯（活化酯）（式中Y（2）成酰氯反應(yīng)（2）成酰氯反應(yīng)（3）成酰胺反應(yīng)體外：體內(nèi)：Asp+NH4ATP酶Asn+（3）成酰胺反應(yīng)體外：體內(nèi)：Asp+NH4ATP酶As（4）脫羧基反應(yīng)（4）脫羧基反應(yīng)（5）疊氮反應(yīng)（5）疊氮反應(yīng)3.α-氨基和α-羧基共同參加的反應(yīng)

（1）茚三酮反應(yīng)注意幾點(diǎn)：3.α-氨基和α-羧基共同參加的反應(yīng)（1）茚三酮反應(yīng)注意（2）成肽鍵（2）成肽鍵4．側(cè)鏈R基參加的反應(yīng)

（1）-S-S-和-SH的氧化還原反應(yīng)R-SH：HS-CH2CH2OH巰基乙醇（mercaptoethanol）HS-CH2COOH巰基乙酸（mercaptoaceticacid）HS-CH2(CHOH)2-CH2SH二硫蘇糖醇（dithiothreitol,DTT）4．側(cè)鏈R基參加的反應(yīng)（1）-S-S-和-SH的氧化還原反

半胱氨酸的-SH很活潑，很容易在空氣中重新氧化形成二硫鍵，一般可用鹵代化物對-SH進(jìn)行保護(hù)。

半胱氨酸的-SH很活潑，很容易在空氣中重新氧化形成二（2）苯環(huán)的黃色反應(yīng)phe+少量濃H2SO4+濃HNO3

黃色TyrorTrp+濃HNO3

黃色（2）苯環(huán)的黃色反應(yīng)phe+少量濃H2SO4+濃HNO3（3）酚基的Millon反應(yīng)（米倫氏反應(yīng)）HgNO3

Tyr+ Hg(NO3)2

紅色HNO3

（3）酚基的Millon反應(yīng)（米倫氏反應(yīng)）HgNO3Ty（4）pauly反應(yīng)His+重氮苯磺酸紅色（棕紅色）Tyr+重氮苯磺酸橘黃色（4）pauly反應(yīng)His+重氮苯磺酸（5）Folin一酚反應(yīng)+磷鉬酸Tyr磷鎢酸orTrp藍(lán)色（鉬藍(lán)與鎢藍(lán)混合物）（5）Folin一酚反應(yīng)+磷鉬酸Tyr磷鎢酸orTrp（6）紫外吸收：Trp、Tyr、（phe）（7）熒光： Trp、Tyr、（phe）（6）紫外吸收：Trp、Tyr、（phe）（7）熒光： T氨基酸化學(xué)性質(zhì)總結(jié)氨基酸化學(xué)性質(zhì)總結(jié)（五）氨基酸分析

1．分配層析法：分配系數(shù)Kd=CACBCA：一種物質(zhì)在A相（流動(dòng)相）中的濃度CB：一種物質(zhì)在B相（固定相）中的濃度

原理：主要根據(jù)被分析的樣品（如aa混合物）在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的目的，（五）氨基酸分析1．分配層析法：分配系數(shù)Kd=CACB（1）逆流分溶（逆流分配）（1）逆流分溶（逆流分配）蛋白質(zhì)與氨基酸課件（2）紙層析

單向紙層析圖Rf值

（2）紙層析單向紙層析圖Rf值雙向紙層析圖雙向紙層析圖（3）聚酰胺薄膜層析（3）聚酰胺薄膜層析（4）薄層層析（4）薄層層析2．離子交換層析法

原理：分離氨基酸時(shí)，用離子交換樹脂作為支持物，利用離子交換樹脂上的活性基團(tuán)與溶液中的離子進(jìn)行交換反應(yīng)，由于各種離子交換能力不同，與樹脂結(jié)合的牢固程度就不同，在洗脫過程中，各種離子以不同的速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的目的。

這種分離主要與各種離子所帶電荷有關(guān)，在電荷相同時(shí)，與極性，非極性有關(guān)。2．離子交換層析法原理：分離氨基酸時(shí)，用離子交換樹離子交換樹脂：

化學(xué)本質(zhì)：是一種人工合成的聚苯乙烯一苯二乙烯組成的具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子聚合物。外觀：離子交換樹脂：化學(xué)本質(zhì)：是一種人工合成的聚苯乙烯一陽離子交換樹脂：活性基團(tuán)是酸性的，如磺酸基-SO3H

（強(qiáng)酸型），羧基-COOH（弱酸型）陰離子交換樹脂：活性基團(tuán)是堿性的，如季胺基-N+(CH3)3OH-

陽離子交換樹脂：活性基團(tuán)是酸性的，如磺酸基-SO3H陰離子蛋白質(zhì)與氨基酸課件茚三酮顯色：儀器靈敏度10-9molOPA（鄰苯二甲醛），熒光胺：靈敏度10-12mol。茚三酮顯色：儀器靈敏度10-9molOPA（鄰苯二甲醛），3．高效液相層析（highperformanceliguidchromatography,HPLC）HPLC的特點(diǎn):3．高效液相層析（highperformanceligu（1）反相層析（reversephasechromatography）（2）離子交換層析（3）凝膠過濾HPLC可使氨基酸分析的靈敏度達(dá)到10-12mol水平。HPLC：（1）反相層析（reversephasechromato（六）氨基酸的制備

1．蛋白質(zhì)水解（1）酸水解（2）堿水解（3）酶水解2．人工合成3．微生物發(fā)酵（六）氨基酸的制備1．蛋白質(zhì)水解（1）酸水解（2）堿水三、肽（peptide）

（一）肽的結(jié)構(gòu)和命名

肽是由兩個(gè)或兩個(gè)以上的氨基酸通過肽鍵連接而形成的化合物。Peptidebond三、肽（peptide）（一）肽的結(jié)構(gòu)和命名肽是由兩個(gè)或二肽三肽四肽二肽→

+肽稱寡肽（oligopeptide）多肽（Polypeptide）二肽二肽→+肽稱寡肽（oligopeptide）多肽（氨基酸之間通過肽鍵連接形成的鏈稱肽鏈。N端氨基酸殘基氨基酸殘基C端肽鏈書寫方式：N端→C端

肽鏈有鏈狀、環(huán)狀和分支狀。氨基酸之間通過肽鍵連接形成的鏈稱肽鏈。N端氨基酸殘基氨基酸命名：根據(jù)氨基酸組成，由N端→C端命名丙氨酰甘氨酰亮氨酸

Ala－Gly－Leu(orAla?Gly?Leu)命名：根據(jù)氨基酸組成，由N端→C端命名丙氨酰甘氨酰亮氨酸（二）肽的理化性質(zhì)

1．兩性解離與等電點(diǎn)

肽與氨基酸一樣具有酸、堿性質(zhì)，它的解離主要取決于肽鏈的末端氨基、末端羧基和側(cè)鏈R基。

由于肽中N端自由氨基和C端自由羧基之間的距離比氨基酸中的大，因此它們之間的靜電引力較弱。肽中C端-COOH的pK略大于氨基酸中的pK值，pK1↑。N端-NH+3的pK略小于氨基酸中的pK值，pK2↓。R基的pK變化不大。（二）肽的理化性質(zhì)1．兩性解離與等電點(diǎn)肽與氨基酸肽的等電點(diǎn)：肽所帶凈電荷為“零”時(shí)，溶液的pH值。

例：已知末端α-COOH，pK3.6，末端α-NH3+pK8.0ε-NH+3pK10.6。計(jì)算Ala-Ala-Lys-Ala的等電點(diǎn)。pI=(8.0＋10.6)/2=9.3肽的等電點(diǎn)：肽所帶凈電荷為“零”時(shí)，溶液的pH值。例：已知2．肽的化學(xué)性質(zhì)

肽的化學(xué)性質(zhì)與氨基酸相似，如兩性解離、等電點(diǎn)等，但肽有與氨基酸不同的特殊反應(yīng)

（1）雙縮脲反應(yīng)

（2）肽鍵的紫外吸收

210～230nm雙縮脲＋堿性CuSO4溶液紫色2．肽的化學(xué)性質(zhì)肽的化學(xué)性質(zhì)與氨基酸相似，如兩性解（三）天然存在的某些活性肽

1．肌肽和鵝肌肽肌肽（carnosine）:β-Ala-His鵝肌肽（anserine）：β-Ala-1-Me-His（三）天然存在的某些活性肽1．肌肽和鵝肌肽肌肽（carn2．谷胱甘肽(glutathione,GSH)2．谷胱甘肽(glutathione,GSH)3．多肽抗菌素3．多肽抗菌素4．多肽激素4．多肽激素5．神經(jīng)肽 甲硫氨酸腦啡肽 Tyr–Gly–Gly–phe-Met亮氨酸腦啡肽 Tyr-Gly-Gly-phe-Leu功能：鎮(zhèn)痛如腦啡肽(enkephalin)5．神經(jīng)肽 甲硫氨酸腦啡肽 Tyr–Gly–Gly–phe-（四）肽的人工合成1．概況20世紀(jì)初E.Fischer：以氨基酸為原料合成了一個(gè)十八肽。1932年M.Bergman:Cbz1953年 美國Du.Vigneaud：生物活性的催產(chǎn)素1965年 中國：生物活性的牛胰島素1962年 美國Merrifield：固相合成法（四）肽的人工合成1．概況20世紀(jì)初E.Fisc2．合成方法（1）液相合成法①用縮合劑的方法2．合成方法（1）液相合成法①用縮合劑的方法氨基保護(hù)基Y：Cbz、Boc、Tos

羧基保護(hù)基Z：甲酯（OMe）CH3O-

乙酯（OEt）C2H5O-

芐酯（OBzl）

叔丁酯（OBut）氨基保護(hù)基Y：Cbz、Boc、Tos羧基保護(hù)基Z：甲酯（O縮合劑：N，N′一二環(huán)己基碳二亞胺（N，N′-dicyclohexylcarbodiimide，縮寫DCCI或DCC）縮合劑：N，N′一二環(huán)己基碳二亞胺（N，N′-dicyclo脫去氨基保護(hù)基的方法：Boc用酸，如50%三氟醋酸脫去Tos用鈉氨還原法

脫去羧基保護(hù)基的方法：芐酯（OBzl）用催化加氫法

叔丁酯（OBut）用酸，如50%三氟醋酸脫去Cbz用催化加氫法

甲酯或乙酯用皂化法

脫去氨基保護(hù)基的方法：Boc用酸，如50%三氟醋酸脫去Tos②將參與肽鍵合成的羧基和氨基活化

羧基的活化:

氨基的活化：

接肽時(shí)加入有機(jī)堿如三乙胺或KHCO3等，保證氨基處于自由狀態(tài)，氨基即活化。

早期用酰氯，但反應(yīng)太激烈，后來采用疊氮法，而現(xiàn)在用了最多的是活化酯法和混合酸酐法。液相合成的優(yōu)缺點(diǎn)②將參與肽鍵合成的羧基和氨基活化羧基的活化:氨基（2）固相合成法（2）固相合成法蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件（3）酶促合成法固相合成的優(yōu)缺點(diǎn)

（3）酶促合成法固相合成的優(yōu)缺點(diǎn)四、蛋白質(zhì)的分類

（一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子的形狀1．球狀蛋白質(zhì)（globularprotein）2．纖維狀蛋白質(zhì)（fibrousprotein）四、蛋白質(zhì)的分類（一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子的形狀1．球狀蛋白質(zhì)（（二）根據(jù)組成和溶解度1．單純蛋白質(zhì)（simpleprotein）:也稱簡單蛋白質(zhì)，完全由氨基酸組成的蛋白質(zhì)。單純蛋白質(zhì)的分類（根據(jù)溶解度的不同）(1)清蛋白（albumin）：溶于水及稀鹽、稀酸或稀堿溶液。如血清清蛋白。(2)球蛋白（globulin）：不溶于水而溶于稀鹽溶液，如血清球蛋白。(3)谷蛋白（glutelin）：不溶于水、醇及中性鹽溶液，但溶于稀酸、稀堿，如米谷蛋白。(4)谷醇溶蛋白（prolamine）：不溶于水，但溶于70%～80%乙醇，如玉米醇溶蛋白。（二）根據(jù)組成和溶解度1．單純蛋白質(zhì)（simpleprot(5)組蛋白（histone）：溶于水及稀酸溶液，分子中含Arg、Lys

較多，呈（弱）堿性，如小牛胸腺組蛋白。(6)魚精蛋白（protamine）：溶于水及稀酸溶液，分子中含堿性氨基酸特別多，呈（強(qiáng)）堿性，如鮭精蛋白。(7)硬蛋白（scleroprotein）：不溶于水、鹽、稀酸、稀堿溶液。如膠原蛋白、角蛋白、絲心蛋白、彈性蛋白等。(5)組蛋白（histone）：溶于水及稀酸溶液，分子中含2．綴合蛋白質(zhì)（conjugatedprotein）：也稱結(jié)合蛋白質(zhì)，由蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩部分組成。

綴合蛋白質(zhì)的分類（根據(jù)非蛋白質(zhì)即輔基的不同）(1)糖蛋白（glycoprotein）：含糖類，如膠原蛋白。(2)脂蛋白（lipoprotein）：含脂類，如血漿脂蛋白。(3)核蛋白（nucleoprotein）：含核酸，如核糖體。(4)磷蛋白（phosphoprotein）：含磷酸，如酪蛋白。(5)金屬蛋白（metalloprotein）：含金屬，如鐵蛋白含F(xiàn)e。(6)血紅素蛋白（hemoprotein）：輔基為血紅素，如血紅蛋白。(7)黃素蛋白（flavoprotein）：輔基為黃素（FAD或FMN），如琥珀酸脫氫酶（含F(xiàn)AD）。2．綴合蛋白質(zhì)（conjugatedprotein）：也稱（三）根據(jù)功能

1.活性蛋白質(zhì)（activeprotein）

包括生命活動(dòng)過程中一切有活性的蛋白質(zhì)以及它們的前體分子，絕大多數(shù)蛋白質(zhì)屬于活性蛋白質(zhì)，包括酶、激素蛋白、運(yùn)輸?shù)鞍祝ㄞD(zhuǎn)運(yùn)蛋白）、貯存蛋白、運(yùn)動(dòng)蛋白、保護(hù)或防御蛋白、受體蛋白、控制生長和分化蛋白、毒蛋白、膜蛋白等。2.非活性蛋白質(zhì)（passiveprotein）

對生物體起支持和保護(hù)作用，主要指硬蛋白包括膠原蛋白、角蛋白、絲蛋白、彈性蛋白等。（三）根據(jù)功能1.活性蛋白質(zhì)（activeprotein五、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)

當(dāng)多肽的分子量大到足夠具有一定的空間結(jié)構(gòu)時(shí)就稱為蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)與多肽的主要差別：分子量，空間結(jié)構(gòu)

五、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)當(dāng)多肽的分子量大到足夠具有一定的空

為了對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)敘述的方便，人為地將蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)分為一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)。

蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)又稱初級結(jié)構(gòu)，二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)、四級結(jié)構(gòu)的三度空間排列稱蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)、三維結(jié)構(gòu)或構(gòu)象。為了對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)敘述的方便，人為地將蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)分為

隨著蛋白質(zhì)化學(xué)研究的進(jìn)展，越來越多的人認(rèn)為在二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)之間應(yīng)加入超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域這兩個(gè)層次，所以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次為：一級結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)超二級結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)隨著蛋白質(zhì)化學(xué)研究的進(jìn)展，越來越多的人認(rèn)為在二級結(jié)構(gòu)（一）蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)（primarystructure）

1．定義：

蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的排列順序（sequence），一級結(jié)構(gòu)的主要連接鍵是肽鍵。（一）蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)（primarystructure）2．蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定

概況:序列測定前的準(zhǔn)備工作：樣品的純度相對分子質(zhì)量肽鏈的數(shù)目氨基酸組成一級結(jié)構(gòu)的測定主要用小片段重疊的原理2．蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定概況:序列測定前的準(zhǔn)備工作：樣品序列測定方法（1）末端分析：包括N端分析，C端分析N端分析方法①二硝基氟苯法（DNP法、DNFB法或FDNB法）序列測定方法（1）末端分析：包括N端分析，C端分析N端分②丹磺酰氯法（DNS法）②丹磺酰氯法（DNS法）③苯異硫氰酸(酯)法（PITC法、PTC法、PTH法、Edman降解法）③苯異硫氰酸(酯)法（PITC法、PTC法、PTH法、Ed④氨肽酶（aminopeptidase,Apase）法AlaValGly④氨肽酶（aminopeptidase,Apase）法亮氨酸氨肽酶（Leucineaminopeptidase,LAP）專一性:A=非極性氨基酸時(shí)快A=其它氨基酸時(shí)慢ABN端A=Leu時(shí)最快亮氨酸氨肽酶（LeucineaminopeptidaseN端氨基封閉的幾種情況N端氨基封閉的幾種情況C端分析①硼氫化鋰還原法C端分析①硼氫化鋰還原法②肼解法：也稱聯(lián)氨法②肼解法：也稱聯(lián)氨法③羧肽酶（carboxypeptidase,Cpase）法③羧肽酶（carboxypeptidase,Cpase）4種羧肽酶的來源和專一性羧肽酶來源專一性CpA胰臟能釋放除pro、Arg和Lys以外的所有C端氨基酸CpB胰臟主要水解C端為Arg或Lys的肽鍵CpC植物或微生物相當(dāng)廣泛，幾乎能釋放C端的所有氨基酸CpY面包酵母可釋放C端所有氨基酸4種羧肽酶的來源和專一性羧肽酶來源專一性CpA胰臟能釋放除（2）肽鏈的拆開和分離共價(jià)鍵非共價(jià)鍵（2）肽鏈的拆開和分離共價(jià)鍵非共價(jià)鍵（3）肽鏈的部分水解化學(xué)方法：

溴化氰（CNBr）裂解法:（3）肽鏈的部分水解化學(xué)方法：溴化氰（CNBr）裂解法酶解方法酶解方法（4）肽段的分離和氨基酸序列測定（4）肽段的分離和氨基酸序列測定（5）找重疊肽從而推斷整個(gè)肽鏈的氨基酸序列（5）找重疊肽從而推斷整個(gè)肽鏈的氨基酸序列（6）二硫鍵位置的確定對角線電泳（7）酰胺基位置的確定（6）二硫鍵位置的確定對角線電泳（7）酰胺基位置的確定3．蛋白質(zhì)測序舉例

insulin3．蛋白質(zhì)測序舉例insulin4．指紋圖譜（fingerprint）法

4．指紋圖譜（fingerprint）法蛋白質(zhì)與氨基酸課件

近年來由于DNA序列的測定發(fā)展很快，可將相應(yīng)于蛋白質(zhì)的DNA序列測定出來后，推出蛋白質(zhì)的序列，為蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定帶來了新的曙光。一級結(jié)構(gòu)測定展望近年來由于DNA序列的測定發(fā)展很快，可將相應(yīng)于蛋白質(zhì)5．蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫

(1)PIR（ProteinInformationResource）數(shù)據(jù)庫(2)SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫5．蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(1)PIR（ProteinIn11醉翁亭記

1．反復(fù)朗讀并背誦課文，培養(yǎng)文言語感。

2．結(jié)合注釋疏通文義，了解文本內(nèi)容，掌握文本寫作思路。

3．把握文章的藝術(shù)特色，理解虛詞在文中的作用。

4．體會(huì)作者的思想感情，理解作者的政治理想。一、導(dǎo)入新課范仲淹因參與改革被貶，于慶歷六年寫下《岳陽樓記》，寄托自己“先天下之憂而憂，后天下之樂而樂”的政治理想。實(shí)際上，這次改革，受到貶謫的除了范仲淹和滕子京之外，還有范仲淹改革的另一位支持者——北宋大文學(xué)家、史學(xué)家歐陽修。他于慶歷五年被貶謫到滁州，也就是今天的安徽省滁州市。也是在此期間，歐陽修在滁州留下了不遜于《岳陽樓記》的千古名篇——《醉翁亭記》。接下來就讓我們一起來學(xué)習(xí)這篇課文吧！【教學(xué)提示】結(jié)合前文教學(xué)，有利于學(xué)生把握本文寫作背景，進(jìn)而加深學(xué)生對作品含義的理解。二、教學(xué)新課目標(biāo)導(dǎo)學(xué)一：認(rèn)識(shí)作者，了解作品背景作者簡介：歐陽修(1007—1072)，字永叔，自號醉翁，晚年又號“六一居士”。吉州永豐(今屬江西)人，因吉州原屬廬陵郡，因此他又以“廬陵歐陽修”自居。謚號文忠，世稱歐陽文忠公。北宋政治家、文學(xué)家、史學(xué)家，與韓愈、柳宗元、王安石、蘇洵、蘇軾、蘇轍、曾鞏合稱“唐宋八大家”。后人又將其與韓愈、柳宗元和蘇軾合稱“千古文章四大家”。

關(guān)于“醉翁”與“六一居士”：初謫滁山，自號醉翁。既老而衰且病，將退休于潁水之上，則又更號六一居士?？陀袉栐唬骸傲缓沃^也？”居士曰：“吾家藏書一萬卷，集錄三代以來金石遺文一千卷，有琴一張，有棋一局，而常置酒一壺。”客曰：“是為五一爾，奈何？”居士曰：“以吾一翁，老于此五物之間，豈不為六一乎？”寫作背景：宋仁宗慶歷五年(1045年)，參知政事范仲淹等人遭讒離職，歐陽修上書替他們分辯，被貶到滁州做了兩年知州。到任以后，他內(nèi)心抑郁，但還能發(fā)揮“寬簡而不擾”的作風(fēng)，取得了某些政績。《醉翁亭記》就是在這個(gè)時(shí)期寫就的。目標(biāo)導(dǎo)學(xué)二：朗讀文章，通文順字1．初讀文章，結(jié)合工具書梳理文章字詞。2．朗讀文章，劃分文章節(jié)奏，標(biāo)出節(jié)奏劃分有疑難的語句。節(jié)奏劃分示例

環(huán)滁/皆山也。其/西南諸峰，林壑/尤美，望之/蔚然而深秀者，瑯琊也。山行/六七里，漸聞/水聲潺潺，而瀉出于/兩峰之間者，釀泉也。峰回/路轉(zhuǎn)，有亭/翼然臨于泉上者，醉翁亭也。作亭者/誰？山之僧/曰/智仙也。名之者/誰？太守/自謂也。太守與客來飲/于此，飲少/輒醉，而/年又最高，故/自號曰/醉翁也。醉翁之意/不在酒，在乎/山水之間也。山水之樂，得之心/而寓之酒也。節(jié)奏劃分思考“山行/六七里”為什么不能劃分為“山/行六七里”？

明確：“山行”意指“沿著山路走”，“山行”是個(gè)狀中短語，不能將其割裂?！巴?蔚然而深秀者”為什么不能劃分為“望之蔚然/而深秀者”？明確：“蔚然而深秀”是兩個(gè)并列的詞，不宜割裂，“望之”是總起詞語，故應(yīng)從其后斷句?！窘虒W(xué)提示】引導(dǎo)學(xué)生在反復(fù)朗讀的過程中劃分朗讀節(jié)奏，在劃分節(jié)奏的過程中感知文意。對于部分結(jié)構(gòu)復(fù)雜的句子，教師可做適當(dāng)?shù)闹v解引導(dǎo)。目標(biāo)導(dǎo)學(xué)三：結(jié)合注釋，翻譯訓(xùn)練1．學(xué)生結(jié)合課下注釋和工具書自行疏通文義，并畫出不解之處。【教學(xué)提示】節(jié)奏劃分與明確文意相輔相成，若能以節(jié)奏劃分引導(dǎo)學(xué)生明確文意最好；若學(xué)生理解有限，亦可在解讀文意后把握節(jié)奏劃分。2．以四人小組為單位，組內(nèi)互助解疑，并嘗試用“直譯”與“意譯”兩種方法譯讀文章。3．教師選擇疑難句或值得翻譯的句子，請學(xué)生用兩種翻譯方法進(jìn)行翻譯。翻譯示例：若夫日出而林霏開，云歸而巖穴暝，晦明變化者，山間之朝暮也。野芳發(fā)而幽香，佳木秀而繁陰，風(fēng)霜高潔，水落而石出者，山間之四時(shí)也。直譯法：那太陽一出來，樹林里的霧氣散開，云霧聚攏，山谷就顯得昏暗了，朝則自暗而明，暮則自明而暗，或暗或明，變化不一，這是山間早晚的景色。野花開放，有一股清幽的香味，好的樹木枝葉繁茂，形成濃郁的綠蔭。天高氣爽，霜色潔白，泉水淺了，石底露出水面，這是山中四季的景色。意譯法：太陽升起，山林里霧氣開始消散，煙云聚攏，山谷又開始顯得昏暗，清晨自暗而明，薄暮又自明而暗，如此暗明變化的，就是山中的朝暮。春天野花綻開并散發(fā)出陣陣幽香，夏日佳樹繁茂并形成一片濃蔭，秋天風(fēng)高氣爽，霜色潔白，冬日水枯而石底上露，如此，就是山中的四季。【教學(xué)提示】翻譯有直譯與意譯兩種方式，直譯鍛煉學(xué)生用語的準(zhǔn)確性，但可能會(huì)降低譯文的美感；意譯可加強(qiáng)譯文的美感，培養(yǎng)學(xué)生的翻譯興趣，但可能會(huì)降低譯文的準(zhǔn)確性。因此，需兩種翻譯方式都做必要引導(dǎo)。全文直譯內(nèi)容見《我的積累本》。目標(biāo)導(dǎo)學(xué)四：解讀文段，把握文本內(nèi)容1．賞析第一段，說說本文是如何引出“醉翁亭”的位置的，作者在此運(yùn)用了怎樣的藝術(shù)手法。

明確：首先以“環(huán)滁皆山也”五字領(lǐng)起，將滁州的地理環(huán)境一筆勾出，點(diǎn)出醉翁亭坐落在群山之中，并縱觀滁州全貌，鳥瞰群山環(huán)抱之景。接著作者將“鏡頭”全景移向局部，先寫“西南諸峰，林壑尤美”，醉翁亭坐落在有最美的林壑的西南諸峰之中，視野集中到最佳處。再寫瑯琊山“蔚然而深秀”，點(diǎn)山“秀”，照應(yīng)上文的“美”。又寫釀泉，其名字透出了泉與酒的關(guān)系，好泉釀好酒，好酒叫人醉?！白砦掏ぁ钡拿直惆抵型赋?，然后引出“醉翁亭”來。作者利用空間變幻的手法，移步換景，由遠(yuǎn)及近，為我們描繪了一幅幅山水特寫。2．第二段主要寫了什么？它和第一段有什么聯(lián)系？明確：第二段利用時(shí)間推移，抓住朝暮及四季特點(diǎn)，描繪了對比鮮明的晦明變化圖及四季風(fēng)光圖，寫出了其中的“樂亦無窮”。第二段是第一段“山水之樂”的具體化。3．第三段同樣是寫“樂”，但卻是寫的游人之樂，作者是如何寫游人之樂的？明確：“滁人游”，前呼后應(yīng)，扶老攜幼，自由自在，熱鬧非凡；“太守宴”，溪深魚肥，泉香酒洌，美味佳肴，應(yīng)有盡有；“眾賓歡”，投壺下棋，觥籌交錯(cuò)，說說笑笑，無拘無束。如此勾畫了游人之樂。4．作者為什么要在第三段寫游人之樂？明確：寫滁人之游，描繪出一幅太平祥和的百姓游樂圖。游樂場景映在太守的眼里，便多了一層政治清明的意味。太守在游人之樂中酒酣而醉，此醉是為山水之樂而醉，更是為能與百姓同樂而醉。體現(xiàn)太守與百姓關(guān)系融洽，“政通人和”才能有這樣的樂。5．第四段主要寫了什么？明確：寫宴會(huì)散、眾人歸的情景。目標(biāo)導(dǎo)學(xué)五：深入解讀，把握作者思想感情思考探究：作者以一個(gè)“樂”字貫穿全篇，卻有兩個(gè)句子別出深意，不單單是在寫樂，而是另有所指，表達(dá)出另外一種情緒，請你找出這兩個(gè)句子，說說這種情緒是什么。明確：醉翁之意不在酒，在乎山水之間也。醉能同其樂，醒能述以文者，太守也。這種情緒是作者遭貶謫后的抑郁，作者并未在文中袒露胸懷，只含蓄地說：“醉能同其樂，醒能述以文者，太守也?！贝司渑c醉翁亭的名稱、“醉翁之意不在酒，在乎山水之間也”前后呼應(yīng)，并與“滁人游”“太守宴”“眾賓歡”“太守醉”連成一條抒情的線索，曲折地表達(dá)了作者內(nèi)心復(fù)雜的思想感情。目標(biāo)導(dǎo)學(xué)六：賞析文本，感受文本藝術(shù)特色1．在把握作者復(fù)雜感情的基礎(chǔ)上朗讀文本。2．反復(fù)朗讀，請同學(xué)說說本文讀來有哪些特點(diǎn)，為什么會(huì)有這些特點(diǎn)。(1)句法上大量運(yùn)用駢偶句，并夾有散句，既整齊又富有變化，使文章越發(fā)顯得音調(diào)鏗鏘，形成一種駢散結(jié)合的獨(dú)特風(fēng)格。如“野芳發(fā)而幽香，佳木秀而繁陰”“朝而往，暮而歸，四時(shí)之景不同，而樂亦無窮也”。(2)文章多用判斷句，層次極其分明，抒情淋漓盡致，“也”“而”的反復(fù)運(yùn)用，形成回環(huán)往復(fù)的韻律，使讀者在誦讀中獲得美的享受。(3)文章寫景優(yōu)美，又多韻律，使人讀來不僅能感受到繪畫美，也能感受到韻律美。目標(biāo)導(dǎo)學(xué)七：探索文本虛詞，把握文言現(xiàn)象虛詞“而”的用法用法

文本舉例表并列 1.蔚然而深秀者；2.溪深而魚肥；3.泉香而酒洌；4.起坐而喧嘩者表遞進(jìn) 1.而年又最高；2.得之心而寓之酒也表承接 1.漸聞水聲潺潺，而瀉出于兩峰之間者；2.若夫日出而林霏開，云歸而巖穴暝；3.野芳發(fā)而幽香，佳木秀而繁陰；4.水落而石出者；5.臨溪而漁；6.太守歸而賓客從也；7.人知從太守游而樂表修飾 1.朝而往，暮而歸；2.雜然而前陳者表轉(zhuǎn)折 1.而不知人之樂；2.而不知太守之樂其樂也虛詞“之”的用法用法

文本舉例表助詞“的” 1.瀉出于兩峰之間者；2.醉翁之意不在酒；3.山水之樂；4.山間之朝暮也；5.宴酣之樂位于主謂之間，取消句子獨(dú)立性

而不知太守之樂其樂也表代詞 1.望之蔚然而深秀者；2.名之者誰(指醉翁亭)；3.得之心而寓之酒也(指山水之樂)【教學(xué)提示】

更多文言現(xiàn)象請參見《我的積累本》。三、板書設(shè)計(jì)路線：環(huán)滁——瑯琊山——釀泉——醉翁亭風(fēng)景：朝暮之景——四時(shí)之景山水之樂(醉景)風(fēng)俗：滁人游——太守宴——眾賓歡——太守醉宴游之樂(醉人)

心情：禽鳥樂——人之樂——樂其樂與民同樂(醉情)

可取之處

重視朗讀，有利于培養(yǎng)學(xué)生的文言語感，并通過節(jié)奏劃分引導(dǎo)學(xué)生理解文意，突破了僅按注釋疏通文義的桎梏，有利于引導(dǎo)學(xué)生自主思考；不單純關(guān)注“直譯”原則，同時(shí)培養(yǎng)學(xué)生的“意譯”能力，引導(dǎo)學(xué)生關(guān)注文言文的美感，在一定程度上有助于培養(yǎng)學(xué)生的核心素養(yǎng)。

不足之處

文章難度相對較高，基礎(chǔ)能力低的學(xué)生難以適應(yīng)該教學(xué)。

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1．反復(fù)朗讀并背誦課文，培養(yǎng)文言語感。

蛋白質(zhì)與氨基酸主要介紹氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能以及蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。還介紹了一些基本技術(shù)如氨基酸的分離、純化，多肽的人工合成，蛋白質(zhì)的分離、純化、鑒定等。蛋白質(zhì)與氨基酸主要介紹氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能以一、蛋白質(zhì)的重要性和一般組成

（一）重要性

有些蛋白質(zhì)是生物體的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，

有些蛋白質(zhì)是生物體的功能物質(zhì)。

近年來的研究還指出蛋白質(zhì)在遺傳信息的控制，細(xì)胞膜的通透性以及高等動(dòng)物的記憶等方面起了重要作用。

總而言之，一切重要的生理活動(dòng)都離不開蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)是生命現(xiàn)象的最基本的物質(zhì)基礎(chǔ)。

幾年前，在歐洲乃至全世界引起恐慌的瘋牛病，其致病元兇就是蛋白粒子（prion），這種只有蛋白質(zhì)而沒有核酸的病原體，可引起人或動(dòng)物的瘋牛病，這一發(fā)現(xiàn)又一次說明了蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。一、蛋白質(zhì)的重要性和一般組成（一）重要性有些蛋白質(zhì)是生物（二）一般組成

元素組成：所有蛋白質(zhì)都含有C、H、O、N

四種元素，大多數(shù)蛋白質(zhì)還含有少量的S，有些蛋白質(zhì)還含有一些其它元素，如P、Fe、Cu、Mo、I等。

各種蛋白質(zhì)的含氮量都很接近，都在16%左右，因此可通過測定生物樣品中的含氮量計(jì)算出樣品中蛋白質(zhì)的含量，1克氮就相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì)。

（二）一般組成元素組成：所有蛋白質(zhì)都含有C、H、

蛋白質(zhì)水解：用H+，OH-或酶將蛋白質(zhì)徹底水解，可以得到許多種氨基酸的混合物，說明氨基酸是蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位。蛋白質(zhì)水解：用H+，OH-或酶將蛋白質(zhì)徹底水解，可以二、蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位——氨基酸（aminoacid,aa或AA）

（一）氨基酸的通式、分類、結(jié)構(gòu)和代號1、氨基酸的通式或二、蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位——氨基酸（amino（一）氨基酸2、氨基酸的分類、結(jié)構(gòu)、代號氨基酸有兩種分類方法(1)按側(cè)鏈R基的結(jié)構(gòu)2、氨基酸的分類、結(jié)構(gòu)、代號氨基酸有兩種分類方法(1)按側(cè)(2)按側(cè)鏈R基的極性(2)按側(cè)鏈R基的極性中性氨基酸氨基酸的結(jié)構(gòu)、代號:中性氨基酸氨基酸的結(jié)構(gòu)、代號:蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件（二）氨基酸的構(gòu)型、旋光性和光吸收

構(gòu)型：組成蛋白質(zhì)的氨基酸除Gly以外都有手性碳原子，在三維空間上就有兩種不同的排列方式，它們互為鏡影，這兩種不同的構(gòu)型分別稱為D-型和L-型。（二）氨基酸的構(gòu)型、旋光性和光吸收構(gòu)型：組成蛋白質(zhì)以丙氨酸為例：以丙氨酸為例：

如含兩個(gè)手性碳原子，則有４種立體異構(gòu)體，分別稱為Ｄ-,Ｌ-，Ｄ別-和Ｌ別-氨基酸。L-蘇氨酸(L-threonine)D-蘇氨酸(D-threonine)L-別-蘇氨酸(L-allo-threonine)D-別-蘇氨酸(D-allo-threonine)如含兩個(gè)手性碳原子，則有４種立體異構(gòu)體，分別稱為Ｄ-蛋白質(zhì)中的氨基酸都是L-型。

(Gly除外)蛋白質(zhì)中的氨基酸都是L-型。(Gly除外)旋光性：

組成蛋白質(zhì)的氨基酸除Gly以外，都有手性碳原子，

所以都有旋光性，能使偏振光的偏振面的向左或向右旋轉(zhuǎn)，向左旋轉(zhuǎn)的稱左旋，用“一”號表示，向右旋轉(zhuǎn)的稱右旋，用“＋”號表示。旋光度，比旋光度消旋外消旋內(nèi)消旋旋光性：組成蛋白質(zhì)的氨基酸除Gly以外，都有手性碳原蛋白質(zhì)與氨基酸課件光吸收：

組成蛋白質(zhì)的氨基酸中，Trp、Tyr和Phe對紫外光有一定的吸收，這是因?yàn)樗鼈兎肿又泻斜江h(huán)，是苯環(huán)的共軛雙鍵造成的，這三個(gè)氨基酸的光吸收都在280nm附近。光吸收：組成蛋白質(zhì)的氨基酸中，Trp、Tyr和Ph蛋白質(zhì)與氨基酸課件（三）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點(diǎn)

1、氨基酸的兩性離子形式兩性離子(dipolarion)（三）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點(diǎn)1、氨基酸的兩性離子形式兩2、氨基酸的兩性解離和等電點(diǎn)Br?nsted的酸堿理論，即廣義酸堿理論。HAA-+H+酸堿質(zhì)子2、氨基酸的兩性解離和等電點(diǎn)Br?nsted的酸堿理論，即

氨基酸在水中的兩性離子既能像酸一樣放出質(zhì)子，也能像堿一樣接受質(zhì)子，氨基酸具有酸堿性質(zhì)，是一類兩性電解質(zhì)。Asanacid（protondonor）：Asabase（protonacceptor）：氨基酸在水中的兩性離子既能像酸一樣放出質(zhì)子，也能像堿不同pH時(shí)氨基酸以不同的離子化形式存在：

正離子兩性離子負(fù)離子

氨基酸所帶靜電荷為“零”時(shí)，溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點(diǎn)（isoelectricpoint），以pI表示。不同pH時(shí)氨基酸以不同的離子化形式存在：正離子兩性離子負(fù)離

實(shí)驗(yàn)證明在等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸主要以兩性離子形式存在，但也有少量的而且數(shù)量相等的正、負(fù)離子形式，還有極少量的中性分子。當(dāng)溶液的pH=pI時(shí)，氨基酸主要從兩性離子形式存在。

pH<pI時(shí)，氨基酸主要以正離子形式存在。

pH>pI時(shí)，氨基酸主要以負(fù)離子形式存在。

實(shí)驗(yàn)證明在等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸主要以兩性離子形式存在，但3．氨基酸的酸堿滴定曲線Henderson-Hasselbalch方程pH=pKa+lg[質(zhì)子受體][質(zhì)子供體]酸堿滴定曲線3．氨基酸的酸堿滴定曲線Henderson-Hasselb蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件4．等電點(diǎn)的計(jì)算中性氨基酸：以Gly為例K1=[Gly±][H+][Gly+]K2=[Gly-][H+][Gly±]pI時(shí)，[Gly+]=[Gly-][Gly±][H+]K1=[Gly±]K2[H+][H+]2=K1K2pH=（pK1+pK2）/2pI=（pK1+pK2）/2pI=（2.34+9.60）/2=5.97Gly4．等電點(diǎn)的計(jì)算中性氨基酸：以Gly為例K1=[Gly±酸性氨基酸，以Asp為例：酸性氨基酸，以Asp為例：堿性氨基酸，以Lys為例：堿性氨基酸，以Lys為例：（四）氨基酸的化學(xué)性質(zhì)

（四）氨基酸的化學(xué)性質(zhì)1．α-氨基參加的反應(yīng)

（1）成鹽作用1．α-氨基參加的反應(yīng)（1）成鹽作用（2）與HNO2的反應(yīng)（2）與HNO2的反應(yīng)（3）與甲醛的反應(yīng)（3）與甲醛的反應(yīng)蛋白質(zhì)與氨基酸課件甲醛滴定要注意幾點(diǎn)甲醛滴定的優(yōu)缺點(diǎn)甲醛滴定要注意幾點(diǎn)甲醛滴定的優(yōu)缺點(diǎn)（4）?；磻?yīng)酰氯：芐氧酰氯（Cbz-Cl）:對甲苯磺酰氯(Tos-Cl):叔丁氧酰氯(Boc-Cl):酸酐：鄰苯二甲酸酐：（R’＝?；?）?；磻?yīng)酰氯：芐氧酰氯（Cbz-Cl）:對甲苯磺酰Cbz-ClCbz-氨基酸Cbz-ClCbz-氨基酸氨基酸與5一二甲氨基萘-1-磺酰氯（dansylchloride,DNS）的反應(yīng)氨基酸與5一二甲氨基萘-1-磺酰氯（dansylchlo（5）烴基化反應(yīng)①與2、4一二硝基氟苯的反應(yīng)2，4一二硝基氟苯（R’＝烴基）（5）烴基化反應(yīng)①與2、4一二硝基氟苯的反應(yīng)2，4一二DNFBDNP-氨基酸（黃色）DNFBDNP-氨基酸（黃色）②與苯異硫氰酸（酯）的反應(yīng)PITCPTC-氨基酸PTH-氨基酸②與苯異硫氰酸（酯）的反應(yīng)PITCPTC-氨基酸PTH-2．α-羧基參加的反應(yīng)

（1）成鹽和成酯反應(yīng)2．α-羧基參加的反應(yīng)（1）成鹽和成酯反應(yīng)?；被釋ο趸椒吁；被釋?硝基苯酯（活化酯）（式中Y＝?；；被釋ο趸椒吁；被釋?硝基苯酯（活化酯）（式中Y（2）成酰氯反應(yīng)（2）成酰氯反應(yīng)（3）成酰胺反應(yīng)體外：體內(nèi)：Asp+NH4ATP酶Asn+（3）成酰胺反應(yīng)體外：體內(nèi)：Asp+NH4ATP酶As（4）脫羧基反應(yīng)（4）脫羧基反應(yīng)（5）疊氮反應(yīng)（5）疊氮反應(yīng)3.α-氨基和α-羧基共同參加的反應(yīng)

（1）茚三酮反應(yīng)注意幾點(diǎn)：3.α-氨基和α-羧基共同參加的反應(yīng)（1）茚三酮反應(yīng)注意（2）成肽鍵（2）成肽鍵4．側(cè)鏈R基參加的反應(yīng)

（1）-S-S-和-SH的氧化還原反應(yīng)R-SH：HS-CH2CH2OH巰基乙醇（mercaptoethanol）HS-CH2COOH巰基乙酸（mercaptoaceticacid）HS-CH2(CHOH)2-CH2SH二硫蘇糖醇（dithiothreitol,DTT）4．側(cè)鏈R基參加的反應(yīng)（1）-S-S-和-SH的氧化還原反

半胱氨酸的-SH很活潑，很容易在空氣中重新氧化形成二硫鍵，一般可用鹵代化物對-SH進(jìn)行保護(hù)。

半胱氨酸的-SH很活潑，很容易在空氣中重新氧化形成二（2）苯環(huán)的黃色反應(yīng)phe+少量濃H2SO4+濃HNO3

黃色TyrorTrp+濃HNO3

黃色（2）苯環(huán)的黃色反應(yīng)phe+少量濃H2SO4+濃HNO3（3）酚基的Millon反應(yīng)（米倫氏反應(yīng)）HgNO3

Tyr+ Hg(NO3)2

紅色HNO3

（3）酚基的Millon反應(yīng)（米倫氏反應(yīng)）HgNO3Ty（4）pauly反應(yīng)His+重氮苯磺酸紅色（棕紅色）Tyr+重氮苯磺酸橘黃色（4）pauly反應(yīng)His+重氮苯磺酸（5）Folin一酚反應(yīng)+磷鉬酸Tyr磷鎢酸orTrp藍(lán)色（鉬藍(lán)與鎢藍(lán)混合物）（5）Folin一酚反應(yīng)+磷鉬酸Tyr磷鎢酸orTrp（6）紫外吸收：Trp、Tyr、（phe）（7）熒光： Trp、Tyr、（phe）（6）紫外吸收：Trp、Tyr、（phe）（7）熒光： T氨基酸化學(xué)性質(zhì)總結(jié)氨基酸化學(xué)性質(zhì)總結(jié)（五）氨基酸分析

1．分配層析法：分配系數(shù)Kd=CACBCA：一種物質(zhì)在A相（流動(dòng)相）中的濃度CB：一種物質(zhì)在B相（固定相）中的濃度

原理：主要根據(jù)被分析的樣品（如aa混合物）在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的目的，（五）氨基酸分析1．分配層析法：分配系數(shù)Kd=CACB（1）逆流分溶（逆流分配）（1）逆流分溶（逆流分配）蛋白質(zhì)與氨基酸課件（2）紙層析

單向紙層析圖Rf值

（2）紙層析單向紙層析圖Rf值雙向紙層析圖雙向紙層析圖（3）聚酰胺薄膜層析（3）聚酰胺薄膜層析（4）薄層層析（4）薄層層析2．離子交換層析法

原理：分離氨基酸時(shí)，用離子交換樹脂作為支持物，利用離子交換樹脂上的活性基團(tuán)與溶液中的離子進(jìn)行交換反應(yīng)，由于各種離子交換能力不同，與樹脂結(jié)合的牢固程度就不同，在洗脫過程中，各種離子以不同的速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的目的。

這種分離主要與各種離子所帶電荷有關(guān)，在電荷相同時(shí)，與極性，非極性有關(guān)。2．離子交換層析法原理：分離氨基酸時(shí)，用離子交換樹離子交換樹脂：

化學(xué)本質(zhì)：是一種人工合成的聚苯乙烯一苯二乙烯組成的具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子聚合物。外觀：離子交換樹脂：化學(xué)本質(zhì)：是一種人工合成的聚苯乙烯一陽離子交換樹脂：活性基團(tuán)是酸性的，如磺酸基-SO3H

（強(qiáng)酸型），羧基-COOH（弱酸型）陰離子交換樹脂：活性基團(tuán)是堿性的，如季胺基-N+(CH3)3OH-

陽離子交換樹脂：活性基團(tuán)是酸性的，如磺酸基-SO3H陰離子蛋白質(zhì)與氨基酸課件茚三酮顯色：儀器靈敏度10-9molOPA（鄰苯二甲醛），熒光胺：靈敏度10-12mol。茚三酮顯色：儀器靈敏度10-9molOPA（鄰苯二甲醛），3．高效液相層析（highperformanceliguidchromatography,HPLC）HPLC的特點(diǎn):3．高效液相層析（highperformanceligu（1）反相層析（reversephasechromatography）（2）離子交換層析（3）凝膠過濾HPLC可使氨基酸分析的靈敏度達(dá)到10-12mol水平。HPLC：（1）反相層析（reversephasechromato（六）氨基酸的制備

1．蛋白質(zhì)水解（1）酸水解（2）堿水解（3）酶水解2．人工合成3．微生物發(fā)酵（六）氨基酸的制備1．蛋白質(zhì)水解（1）酸水解（2）堿水三、肽（peptide）

（一）肽的結(jié)構(gòu)和命名

肽是由兩個(gè)或兩個(gè)以上的氨基酸通過肽鍵連接而形成的化合物。Peptidebond三、肽（peptide）（一）肽的結(jié)構(gòu)和命名肽是由兩個(gè)或二肽三肽四肽二肽→

+肽稱寡肽（oligopeptide）多肽（Polypeptide）二肽二肽→+肽稱寡肽（oligopeptide）多肽（氨基酸之間通過肽鍵連接形成的鏈稱肽鏈。N端氨基酸殘基氨基酸殘基C端肽鏈書寫方式：N端→C端

肽鏈有鏈狀、環(huán)狀和分支狀。氨基酸之間通過肽鍵連接形成的鏈稱肽鏈。N端氨基酸殘基氨基酸命名：根據(jù)氨基酸組成，由N端→C端命名丙氨酰甘氨酰亮氨酸

Ala－Gly－Leu(orAla?Gly?Leu)命名：根據(jù)氨基酸組成，由N端→C端命名丙氨酰甘氨酰亮氨酸（二）肽的理化性質(zhì)

1．兩性解離與等電點(diǎn)

肽與氨基酸一樣具有酸、堿性質(zhì)，它的解離主要取決于肽鏈的末端氨基、末端羧基和側(cè)鏈R基。

由于肽中N端自由氨基和C端自由羧基之間的距離比氨基酸中的大，因此它們之間的靜電引力較弱。肽中C端-COOH的pK略大于氨基酸中的pK值，pK1↑。N端-NH+3的pK略小于氨基酸中的pK值，pK2↓。R基的pK變化不大。（二）肽的理化性質(zhì)1．兩性解離與等電點(diǎn)肽與氨基酸肽的等電點(diǎn)：肽所帶凈電荷為“零”時(shí)，溶液的pH值。

例：已知末端α-COOH，pK3.6，末端α-NH3+pK8.0ε-NH+3pK10.6。計(jì)算Ala-Ala-Lys-Ala的等電點(diǎn)。pI=(8.0＋10.6)/2=9.3肽的等電點(diǎn)：肽所帶凈電荷為“零”時(shí)，溶液的pH值。例：已知2．肽的化學(xué)性質(zhì)

肽的化學(xué)性質(zhì)與氨基酸相似，如兩性解離、等電點(diǎn)等，但肽有與氨基酸不同的特殊反應(yīng)

（1）雙縮脲反應(yīng)

（2）肽鍵的紫外吸收

210～230nm雙縮脲＋堿性CuSO4溶液紫色2．肽的化學(xué)性質(zhì)肽的化學(xué)性質(zhì)與氨基酸相似，如兩性解（三）天然存在的某些活性肽

1．肌肽和鵝肌肽肌肽（carnosine）:β-Ala-His鵝肌肽（anserine）：β-Ala-1-Me-His（三）天然存在的某些活性肽1．肌肽和鵝肌肽肌肽（carn2．谷胱甘肽(glutathione,GSH)2．谷胱甘肽(glutathione,GSH)3．多肽抗菌素3．多肽抗菌素4．多肽激素4．多肽激素5．神經(jīng)肽 甲硫氨酸腦啡肽 Tyr–Gly–Gly–phe-Met亮氨酸腦啡肽 Tyr-Gly-Gly-phe-Leu功能：鎮(zhèn)痛如腦啡肽(enkephalin)5．神經(jīng)肽 甲硫氨酸腦啡肽 Tyr–Gly–Gly–phe-（四）肽的人工合成1．概況20世紀(jì)初E.Fischer：以氨基酸為原料合成了一個(gè)十八肽。1932年M.Bergman:Cbz1953年 美國Du.Vigneaud：生物活性的催產(chǎn)素1965年 中國：生物活性的牛胰島素1962年 美國Merrifield：固相合成法（四）肽的人工合成1．概況20世紀(jì)初E.Fisc2．合成方法（1）液相合成法①用縮合劑的方法2．合成方法（1）液相合成法①用縮合劑的方法氨基保護(hù)基Y：Cbz、Boc、Tos

羧基保護(hù)基Z：甲酯（OMe）CH3O-

乙酯（OEt）C2H5O-

芐酯（OBzl）

叔丁酯（OBut）氨基保護(hù)基Y：Cbz、Boc、Tos羧基保護(hù)基Z：甲酯（O縮合劑：N，N′一二環(huán)己基碳二亞胺（N，N′-dicyclohexylcarbodiimide，縮寫DCCI或DCC）縮合劑：N，N′一二環(huán)己基碳二亞胺（N，N′-dicyclo脫去氨基保護(hù)基的方法：Boc用酸，如50%三氟醋酸脫去Tos用鈉氨還原法

脫去羧基保護(hù)基的方法：芐酯（OBzl）用催化加氫法

叔丁酯（OBut）用酸，如50%三氟醋酸脫去Cbz用催化加氫法

甲酯或乙酯用皂化法

脫去氨基保護(hù)基的方法：Boc用酸，如50%三氟醋酸脫去Tos②將參與肽鍵合成的羧基和氨基活化

羧基的活化:

氨基的活化：

接肽時(shí)加入有機(jī)堿如三乙胺或KHCO3等，保證氨基處于自由狀態(tài)，氨基即活化。

早期用酰氯，但反應(yīng)太激烈，后來采用疊氮法，而現(xiàn)在用了最多的是活化酯法和混合酸酐法。液相合成的優(yōu)缺點(diǎn)②將參與肽鍵合成的羧基和氨基活化羧基的活化:氨基（2）固相合成法（2）固相合成法蛋白質(zhì)與氨基酸課件蛋白質(zhì)與氨基酸課件（3）酶促合成法固相合成的優(yōu)缺點(diǎn)

（3）酶促合成法固相合成的優(yōu)缺點(diǎn)四、蛋白質(zhì)的分類

（一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子的形狀1．球狀蛋白質(zhì)（globularprotein）2．纖維狀蛋白質(zhì)（fibrousprotein）四、蛋白質(zhì)的分類（一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子的形狀1．球狀蛋白質(zhì)（（二）根據(jù)組成和溶解度1．單純蛋白質(zhì)（simpleprotein）:也稱簡單蛋白質(zhì)，完全由氨基酸組成的蛋白質(zhì)。單純蛋白質(zhì)的分類（根據(jù)溶解度的不同）(1)清蛋白（albumin）：溶于水及稀鹽、稀酸或稀堿溶液。如血清清蛋白。(2)球蛋白（globulin）：不溶于水而溶于稀鹽溶液，如血清球蛋白。(3)谷蛋白（glutelin）：不溶于水、醇及中性鹽溶液，但溶于稀酸、稀堿，如米谷蛋白。(4)谷醇溶蛋白（prolamine）：不溶于水，但溶于70%～80%乙醇，如玉米醇溶蛋白。（二）根據(jù)組成和溶解度1．單純蛋白質(zhì)（simpleprot(5)組蛋白（histone）：溶于水及稀酸溶液，分子中含Arg、Lys

較多，呈（弱）堿性，如小牛胸腺組蛋白。(6)魚精蛋白（protamine）：溶于水及稀酸溶液，分子中含堿性氨基酸特別多，呈（強(qiáng)）堿性，如鮭精蛋白。(7)硬蛋白（scleroprotein）：不溶于水、鹽、稀酸、稀堿溶液。如膠原蛋白、角蛋白、絲心蛋白、彈性蛋白等。(5)組蛋白（histone）：溶于水及稀酸溶液，分子中含2．綴合蛋白質(zhì)（conjugatedprotein）：也稱結(jié)合蛋白質(zhì)，由蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩部分組成。

綴合蛋白質(zhì)的分類（根據(jù)非蛋白質(zhì)即輔基的不同）(1)糖蛋白（glycoprotein）：含糖類，如膠原蛋白。(2)脂蛋白（lipoprotein）：含脂類，如血漿脂蛋白。(3)核蛋白（nucleoprotein）：含核酸，如核糖體。(4)磷蛋白（phosphoprotein）：含磷酸，如酪蛋白。(5)金屬蛋白（metalloprotein）：含金屬，如鐵蛋白含F(xiàn)e。(6)血紅素蛋白（hemoprotein）：輔基為血紅素，如血紅蛋白。(7)黃素蛋白（flavoprotein）：輔基為黃素（FAD或FMN），如琥珀酸脫氫酶（含F(xiàn)AD）。2．綴合蛋白質(zhì)（conjugatedprotein）：也稱（三）根據(jù)功能

1.活性蛋白質(zhì)（activeprotein）

包括生命活動(dòng)過程中一切有活性的蛋白質(zhì)以及它們的前體分子，絕大多數(shù)蛋白質(zhì)屬于活性蛋白質(zhì)，包括酶、激素蛋白、運(yùn)輸?shù)鞍祝ㄞD(zhuǎn)運(yùn)蛋白）、貯存蛋白、運(yùn)動(dòng)蛋白、保護(hù)或防御蛋白、受體蛋白、控制生長和分化蛋白、毒蛋白、膜蛋白等。2.非活性蛋白質(zhì)（passiveprotein）

對生物體起支持和保護(hù)作用，主要指硬蛋白包括膠原蛋白、角蛋白、絲蛋白、彈性蛋白等。（三）根據(jù)功能1.活性蛋白質(zhì)（activeprotein五、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)

當(dāng)多肽的分子量大到足夠具有一定的空間結(jié)構(gòu)時(shí)就稱為蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)與多肽的主要差別：分子量，空間結(jié)構(gòu)

五、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)當(dāng)多肽的分子量大到足夠具有一定的空

為了對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)敘述的方便，人為地將蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)分為一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)。

蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)又稱初級結(jié)構(gòu)，二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)、四級結(jié)構(gòu)的三度空間排列稱蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)、三維結(jié)構(gòu)或構(gòu)象。為了對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)敘述的方便，人為地將蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)分為

隨著蛋白質(zhì)化學(xué)研究的進(jìn)展，越來越多的人認(rèn)為在二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)之間應(yīng)加入超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域這兩個(gè)層次，所以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次為：一級結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)超二級結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)隨著蛋白質(zhì)化學(xué)研究的進(jìn)展，越來越多的人認(rèn)為在二級結(jié)構(gòu)（一）蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)（primarystructure）

1．定義：

蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的排列順序（sequence），一級結(jié)構(gòu)的主要連接鍵是肽鍵。（一）蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)（primarystructure）2．蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定

概況:序列測定前的準(zhǔn)備工作：樣品的純度相對分子質(zhì)量肽鏈的數(shù)目氨基酸組成一級結(jié)構(gòu)的測定主要用小片段重疊的原理2．蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定概況:序列測定前的準(zhǔn)備工作：樣品序列測定方法（1）末端分析：包括N端分析，C端分析N端分析方法①二硝基氟苯法（DNP法、DNFB法或FDNB法）序列測定方法（1）末端分析：包括N端分析，C端分析N端分②丹磺酰氯法（DNS法）②丹磺酰氯法（DNS法）③苯異硫氰酸(酯)法（PITC法、PTC法、PTH法、Edman降解法）③苯異硫氰酸(酯)法（PITC法、PTC法、PTH法、Ed④氨肽酶（aminopeptidase,Apase）法AlaValGly④氨肽酶（aminopeptidase,Apase）法亮氨酸氨肽酶（Leucineaminopeptidase,LAP）專一性:A=非極性氨基酸時(shí)快A=其它氨基酸時(shí)慢ABN端A=Leu時(shí)最快亮氨酸氨肽酶（LeucineaminopeptidaseN端氨基封閉的幾種情況N端氨基封閉的幾種情況C端分析①硼氫化鋰還原法C端分析①硼氫化鋰還原法②肼解法：也稱聯(lián)氨法②肼解法：也稱聯(lián)氨法③羧肽酶（carboxypeptidase,Cpase）法③羧肽酶（carboxypeptidase,Cpase）4種羧肽酶的來源和專一性羧肽酶來源專一性CpA胰臟能釋放除pro、Arg和Lys以外的所有C端氨基酸CpB胰臟主要水解C端為Arg或Lys的肽鍵CpC植物或微生物相當(dāng)廣泛，幾乎能釋放C端的所有氨基酸CpY面包酵母可釋放C端所有氨基酸4種羧肽酶的來源和專一性羧肽酶來源專一性CpA胰臟能釋放除（2）肽鏈的拆開和分離共價(jià)鍵非共價(jià)鍵（2）肽鏈的拆開和分離共價(jià)鍵非共價(jià)鍵（3）肽鏈的部分水解化學(xué)方法：

溴化氰（CNBr）裂解法:（3）肽鏈的部分水解化學(xué)方法：溴化氰（CNBr）裂解法酶解方法酶解方法（4）肽段的分離和氨基酸序列測定（4）肽段的分離和氨基酸序列測定（5）找重疊肽從而推斷整個(gè)肽鏈的氨基酸序列（5）找重疊肽從而推斷整個(gè)肽鏈的氨基酸序列（6）二硫鍵位置的確定對角線電泳（