需氧革蘭陽性桿菌及檢驗課件

需氧革蘭陽性桿菌及檢驗華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協和醫(yī)院熊艷需氧革蘭陽性桿菌及檢驗華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協和醫(yī)院1革蘭陽性桿菌菌屬間的鑒別

棒狀桿菌屬芽胞桿菌屬李斯特菌屬丹毒絲菌屬加特納菌屬形態(tài)棒狀桿菌有芽胞短桿、鏈或絲狀細桿或絲狀桿菌、多形性觸酶+++--動力-V+--對氧需氧，兼性厭氧需氧，兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧

V：炭疽芽胞桿菌陰性，其它芽胞桿菌陽性。革蘭陽性桿菌菌屬間的鑒別

棒狀桿菌屬芽胞桿菌屬李斯特菌屬丹毒2第一節(jié)棒狀桿菌屬

第一節(jié)棒狀桿菌屬3棒狀桿菌屬的共同特征

革蘭陽性多形態(tài)桿菌無莢膜、無鞭毛、無芽胞細菌呈不規(guī)則柵欄狀排列需氧或兼性厭氧觸酶試驗陽性細胞壁結構和血清學分析，證實與分枝桿菌屬、奴卡氏菌屬有共同的成分。

棒狀桿菌屬的共同特征革蘭陽性多形態(tài)桿菌4一．白喉棒狀桿菌

一．白喉棒狀桿菌5（一）生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性菌落特征生化反應抗原構造抵抗力（一）生物學特性形態(tài)與染色6形態(tài)與染色

細長彎曲、一端或兩端膨大的革蘭陽性桿菌。無莢膜、無芽胞、無鞭毛、無菌毛。細菌排列呈散在L、V、Y字形及不規(guī)則柵欄狀。

用美藍、Neisser法、Albert法等染色時，在細菌的一端或兩端有濃染的顆粒，此顆粒與菌體著色不同，稱為異染顆粒，為本菌重要形態(tài)學特征，對鑒別細菌有重要意義。

2022/12/4形態(tài)與染色細長彎曲、一端或兩端膨大的革蘭陽性桿菌。無7培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧，生長溫度為15–40℃，最適生長溫度為35–37℃，pH7.2–7.8。

營養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上雖能生長，但生長不良，形態(tài)不典型，大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或雞蛋的培養(yǎng)基上生長迅速，形態(tài)典型，異染顆粒明顯。

2022/12/4培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，生長溫度為15–408菌落特征血平板：灰白、狹窄β溶血環(huán)。雞蛋斜面和血清斜面：生長迅速，灰白色有光澤菌落。亞碲酸鉀血平板：為選擇培養(yǎng)基，菌落呈黑色。菌落分為重型、輕型或中間型。

菌落特征血平板：灰白、狹窄β溶血環(huán)。9生化反應

觸酶（+），氧化酶（-）能分解葡萄糖、麥芽糖、果糖等，產酸不產氣。不分解乳糖、多數不分解蔗糖。靛基質試驗－、明膠液化－、尿素分解－2022/12/4生化反應觸酶（+），氧化酶（-）2022/12/210抗原構造菌體O抗原：與分枝桿菌、奴卡菌有共同抗原。K抗原：型特異性抗原，不耐熱。

抗原構造11抵抗力對濕熱和一般消毒劑敏感。對冷和干燥有一定抵抗力。

抵抗力12（二）致病性致病物質：白喉外毒素由攜帶β-棒狀桿菌噬菌體的白喉桿菌產生。作用機制：抑制細胞內蛋白質的合成。經呼吸道飛沫傳播，引起白喉。假膜脫落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。（二）致病性致病物質：白喉外毒素13（三）免疫性抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。成人絕大多數具有免疫性，主要由于隱性感染所獲得的免疫力。錫克試驗用于檢測機體有無白喉抗毒素抗體存在。（三）免疫性抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。14（四）微生物學檢驗

標本采集

檢驗程序

檢驗方法生化反應毒力試驗（四）微生物學檢驗標本采集15標本采集用無菌長棉拭子，從疑為假膜的邊緣采集分泌物。

未見假膜的疑似患者或帶菌者可采集鼻咽部或扁桃體粘膜上的分泌物。標本采集用無菌長棉拭子，從疑為假膜的邊緣采集分泌物。16檢驗程序咽拭標本亞碲酸鉀血平板觀察菌落特征

直接涂片革蘭染色異染顆粒染色血平板

呂氏血清斜面

直接涂片革蘭染色異染顆粒染色涂片染色鏡檢生化反應毒力試驗檢驗程序咽拭標本亞碲酸鉀觀察菌落特征直接涂片血平板17檢驗方法標本直接涂片革蘭染色：觀察形態(tài)、染色性異染顆粒染色：觀察異染顆粒初步報告：檢出形似白喉棒狀桿菌分離培養(yǎng)呂氏斜面：生長迅速，涂片鏡檢異染顆粒明顯亞碲酸鉀血平板：黑色菌落檢驗方法標本直接涂片18生化反應根據糖發(fā)酵是否產酸可鑒別棒狀桿菌中的不同種。白喉棒狀桿菌發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖產酸，不分解蔗糖；尿素酶（–）、硝酸鹽還原試驗（+）等可用于與其他棒狀桿菌的鑒別。

生化反應根據糖發(fā)酵是否產酸可鑒別棒狀桿菌19毒力試驗意義：是鑒定白喉桿菌為致病菌株的重要依據方法艾立克平板毒力試驗對流電泳法協同凝集試驗動物實驗毒力試驗意義：是鑒定白喉桿菌為致病菌株的重要依據20二．其他棒狀桿菌二．其他棒狀桿菌21第二節(jié)需氧芽胞桿菌屬第二節(jié)需氧芽胞桿菌屬22芽胞桿菌屬共同特點絕大多數菌種在有氧條件下形成不大于菌體橫徑的芽胞除炭疽芽胞桿菌外均有動力和溶血能力非抗酸性營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好芽胞桿菌屬共同特點絕大多數菌種在有氧條件下形成不大于菌體橫23一．炭疽芽胞桿菌一．炭疽芽胞桿菌24（一）生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性菌落特征生化反應抗原構造抵抗力（一）生物學特性形態(tài)與染色25形態(tài)與染色為致病菌中最大的革蘭陽性桿菌，兩端齊平或凹陷，呈竹節(jié)狀，單個或呈短鏈狀排列。無鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成莢膜。人工培養(yǎng)或在外界環(huán)境中易產生芽胞，在活體或完整未經解剖的尸體內不形成芽胞，所以炭疽病尸體嚴禁解剖。2022/12/4形態(tài)與染色為致病菌中最大的革蘭陽性桿26培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好。

2022/12/4培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧。2022/12/227菌落特征普通瓊脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，無光澤，邊緣不整齊，在低倍鏡下可見到菌落邊緣呈卷發(fā)狀。血液瓊脂平板：培養(yǎng)12～15h，菌落周圍無溶血環(huán)，18～24h后可有輕微溶血，而其他需氧芽胞桿菌大多數溶血明顯而快速。液體培養(yǎng)基中呈絮狀生長明膠培養(yǎng)基中呈倒置的杉樹有毒株在NaHCO3培養(yǎng)基中形成莢膜，菌落呈粘液狀，有拉絲。2022/12/4菌落特征普通瓊脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，無光澤，28

有毒株在NaHCO3血瓊脂平板上置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)18～24h，可產生莢膜，菌落由粗糙型變?yōu)檎骋盒?，而呈現半圓形，突起，有光澤的菌落。以接種針挑取時呈拉絲狀，此為鑒別菌落要點，而無毒株則形成粗糙型菌落。

有毒株在NaHCO3血瓊脂平板上置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)29生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不產氣。不分解乳糖。觸酶（+），VP（–），吲哚（–），尿素（–）。生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不30抗原結構炭疽毒素：由保護性抗原、致死因子、水腫因子組成的蛋白質復合物，后兩者單獨不能發(fā)揮生物活性作用，都必須與保護性抗原組合才能引起實驗動物的水腫致死。具有抗吞噬作用和免疫原性，故患炭疽后有免疫力。莢膜抗原：與細菌毒力有關，失去莢膜后毒力也就消失。該抗原具有高度特異性，在臨床診斷中有鑒別診斷價值?？乖Y構炭疽毒素：由保護性抗原、致死因子、水腫因子組成的蛋白31菌體抗原：耐熱、耐腐敗，無毒性，有種特異性。芽胞抗原：芽胞的外膜含有抗原決定簇，與皮質層一起組成炭疽芽胞桿菌芽胞的特異性抗原，此抗原具有免疫原性和血清學診斷價值。Ascoli熱沉淀反應：感染動物尸體組織浸出液煮沸半小時后，耐熱的菌體抗原不被破壞，能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應，稱Ascoli熱沉淀反應，對炭疽病具有一定的診斷價值。

2022/12/4Ascoli熱沉淀反應：感染動物尸體組織浸出液煮32抵抗力本菌繁殖體抵抗力與其它細菌相同，芽胞抵抗力很強。在干燥的土壤或者皮毛中可存活20余年。芽胞對碘和氧化劑敏感。耐藥性：本菌對磺胺類、青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星敏感。抵抗力本菌繁殖體抵抗力與其它細菌相同，芽胞抵抗力很強。33（二）致病性與免疫性致病物質：炭疽毒素、莢膜所致疾病經多途徑感染，引起炭疽病。臨床類型：肺炭疽、腸炭疽、皮膚炭疽、敗血癥。屬人畜共患傳染病，死亡率高。免疫性：病后可獲得持久性免疫力，再次感染者甚少。（二）致病性與免疫性致病物質：炭疽毒素、莢膜34（三）微生物學檢驗標本采集檢驗程序檢驗方法（三）微生物學檢驗標本采集35標本采集標本采集病人血液、痰、糞便、滲出液、腦脊液等。死亡病畜標本：死于敗血癥的動物，嚴禁宰殺、解剖，可在消毒皮膚后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。污染物品：皮革、獸毛、土壤等。標本處理：無雜菌污染標本直接接種，有雜菌污染標本先加熱殺死繁殖體和雜菌再接種。標本采集標本采集36已處理標本直接涂片增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)Ascoli試驗革蘭染色莢膜染色初步報告血平板戊烷脒瓊脂平板可疑菌落菌落涂片染色鏡檢鑒定試驗肉湯培養(yǎng)動物實驗動物死亡分離培養(yǎng)●噬菌體裂解●串珠試驗●青霉素抑制試驗已處理標本直接涂片增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)Ascoli試驗革蘭染色初37檢驗方法涂片染色鏡檢革蘭染色：涂片后升汞固定，革蘭染色發(fā)現革蘭陽性粗大桿菌、有莢膜，呈竹節(jié)樣排列可初步報告。分離培養(yǎng)：一般接種血平板，37℃培養(yǎng)24h后觀察菌落特點。污染的標本先加熱處理再接種。動物試驗：注射部位膠樣水腫，肝脾腫大，出血等。在芽胞桿菌屬中，除蠟樣芽胞桿菌毒素對動物有致病作用外，炭疽芽胞桿菌是唯一具有致病力者。

檢驗方法涂片染色鏡檢38鑒定試驗青霉素抑制試驗炭疽芽胞桿菌在含5IU/ml的青霉素培養(yǎng)基上能生長，而在含10、100IU/ml的青霉素培養(yǎng)基上受到抑制不生長。鑒定試驗青霉素抑制試驗39鑒定試驗串珠試驗與類炭疽芽胞桿菌鑒別炭疽芽胞桿菌受低濃度青霉素作用后，在形態(tài)上發(fā)生明顯的變化。如將本菌幼稚培養(yǎng)物接種于含0.05～0.5U/ml青霉素的培養(yǎng)基上，37℃6h，菌體腫大呈圓珠狀，稱串珠反應。此反應可能與青霉素抑制細菌胞壁的合成作用有關，為炭疽桿菌所特有，可用于與其他類炭疽芽胞桿菌的鑒別。鑒定試驗串珠試驗與類炭疽芽胞桿菌鑒別40鑒定試驗青霉素和串珠聯合試驗噬菌體裂解試驗與類炭疽芽胞桿菌鑒別NaHCO3毒力試驗有毒力的炭疽桿菌形成莢膜，菌落呈粘液型，無毒力的炭疽桿菌不形成莢膜，菌落呈粗糙型。鑒定試驗青霉素和串珠聯合試驗41鑒定試驗植物凝集素試驗根據炭疽芽胞桿菌菌體多糖是植物凝集素受體的原理。Ascoli熱沉淀試驗

用已知的抗炭疽桿菌抗體測定標本中未知的抗原。炭疽桿菌沉淀原具有耐高熱特征，在尸體組織和皮毛中數年仍能檢出，故可作追溯性診斷。2022/12/4鑒定試驗植物凝集素試驗2022/12/242炭疽芽胞桿菌與其它需氧芽胞桿菌的鑒別

鑒別項目炭疽芽胞桿菌枯草芽胞桿菌蠟樣芽胞桿菌及其它需氧芽胞桿菌形態(tài)菌體兩端平整或凹陷兩端鈍圓兩端鈍圓莢膜+--動力-++菌落有小突起，邊緣呈卷發(fā)狀，粘稠菌落鋸齒狀粗糙菌落蠟樣或粗糙不粘稠菌落肉湯絮狀沉淀，上層清晰均勻混濁有菌膜均勻混濁有菌膜Ascoli+--溶血不溶血或微溶血++串珠試驗+--炭疽芽胞桿菌與其它需氧芽胞桿菌的鑒別鑒別項目炭疽芽胞桿菌枯43二．蠟樣芽胞桿菌二．蠟樣芽胞桿菌44（一）生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性菌落特征生化反應抵抗力（一）生物學特性形態(tài)與染色45形態(tài)與染色革蘭陽性大桿菌，兩端較鈍、鏈桿狀，長短不一，有鞭毛，無莢膜，可形成芽胞。形態(tài)與染色革蘭陽性大桿菌，兩端較鈍、鏈桿狀，長短不一46培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。普通瓊脂平板：可形成圓形、隆起、灰白色、不透明、R型蠟滴樣大菌落。血瓊脂平板：菌落呈淺灰色，似毛玻璃狀，菌落周圍有α或β溶血。2022/12/4培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。47

乳光反應或卵黃反應：在卵黃瓊脂平板上生長迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán)，即為乳光反應或卵黃反應。乳光反應或卵黃反應：48生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不產氣，不分解乳糖。VP（+），液化明膠。生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不產氣，不分解乳49抵抗力耐熱，抵抗力強,能耐受100℃30min。抵抗力耐熱，抵抗力強,能耐受100℃30min。50（二）致病性條件致病菌，主要引起食物中毒。臨床上分為兩種類型：腹瀉型：由不耐熱的腸毒素引起。嘔吐型：由耐熱的腸毒素引起。（二）致病性條件致病菌，主要引起食物中毒。51（三）微生物學檢驗

1．標本采集

除進行本菌的分離培養(yǎng)外，必須作活菌計數。因暴露于空氣中的食物，在一定程度上都受本菌污染，故不能因分離出蠟樣芽胞桿菌則認為是引起食物中毒的病原菌。

2．檢驗程序

（三）微生物學檢驗1．標本采集523．檢驗方法

直接鏡檢：

活菌計數：一般認為蠟樣芽胞桿菌的活菌數大于105/mL時，即有發(fā)生食物中毒的可能。分離培養(yǎng)：鑒定

3．檢驗方法直接鏡檢：53第三節(jié)產單核李斯特菌第三節(jié)產單核李斯特菌54一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應抗原結構抵抗力一．生物學特性形態(tài)與染色55（一）形態(tài)與染色革蘭陽性小桿菌，直或稍彎，常呈V字形成對排列，有時呈絲狀，偶爾可見雙球狀。

多數菌體一端較大，似棒狀，易誤認為是污染的類白喉棒狀桿菌；又因菌體短小，三、五成鏈，并有β溶血性，易與鏈球菌混淆，用觸酶試驗加以區(qū)別。2022/12/4（一）形態(tài)與染色2022/12/256在22～25℃環(huán)境中形成4根鞭毛，故在25℃肉湯培養(yǎng)液中運動活潑；而在37℃時僅形成1根鞭毛，動力緩慢。在22～25℃環(huán)境中形成4根鞭毛，故在25℃肉湯培養(yǎng)57（二）培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。4～45℃均能生長，最適溫度30～37℃。因在4℃能生長，故可進行冷增菌。

初時菌落極小似露珠狀、光滑透明，通過側光微顯藍綠色，37℃培養(yǎng)數日，菌落增大變成灰暗，血平板上的菌落有狹窄的β溶血環(huán)。

2022/12/4（二）培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。4～45℃58（三）生化反應1～2d內發(fā)酵葡萄糖、果糖、麥芽糖，產酸不產氣，在3～10d內可發(fā)酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖。觸酶陽性，VP（+），MR（+）。（三）生化反應1～2d內發(fā)酵葡萄糖、果糖、麥芽糖，產酸不59（四）抗原結構

分為4個血清型，1型主要感染嚙齒動物，各型對人類均可致病，但以1a和lb最為多見。本菌與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌及大腸埃希菌等具有共同抗原。2022/12/4（四）抗原結構分為4個血清型，1型主要感染嚙齒動物，各型60（五）抵抗力在土壤、糞便、飼料中能長期存活。耐鹽、耐堿、不耐酸。對熱敏感，對—般消毒劑敏感，70％的乙醇5min即可殺死本菌。（五）抵抗力在土壤、糞便、飼料中能長期存活。61二．致病性本菌常伴隨EB病毒引起傳染性單核細胞增多癥。二．致病性本菌常伴隨EB病毒引起傳染性單核細胞增62三．微生物學檢驗（一）標本采集（二）檢驗程序三．微生物學檢驗（一）標本采集63（三）檢驗方法

1．分離培養(yǎng)2．鑒定要點形態(tài)染色：革蘭陽性小桿菌。β溶血：本菌的β溶血環(huán)很窄，往往把菌落刮去，方可見菌落下面的β溶血環(huán)。動力試驗：25℃動力陽性。4℃能生長2022/12/4（三）檢驗方法1．分離培養(yǎng)2022/12/264第四節(jié)紅斑丹毒絲菌第四節(jié)紅斑丹毒絲菌65一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應一．生物學特性形態(tài)與染色66（一）形態(tài)與染色

革蘭陽性桿菌，單個或形成短鏈狀，粗糙型菌落形成長絲狀。無鞭毛，無莢膜，無芽胞。2022/12/4（一）形態(tài)與染色革蘭陽性桿菌，單個或形成短鏈狀，67（二）培養(yǎng)特性厭氧或微需氧菌。初次分離需在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)，傳代后在有氧條件下也能生長。（二）培養(yǎng)特性厭氧或微需氧菌。初次分離需在厭氧環(huán)境中68（三）生化反應

氧化酶（–），觸酶（–），發(fā)酵葡萄糖、乳糖，產酸不產氣。

2022/12/4（三）生化反應氧化酶（–），觸酶（–），發(fā)酵葡萄糖、69二．致病性紅斑丹毒牡菌為紅斑丹毒絲菌病的病原體。主要發(fā)生在魚類、家畜、家禽和兔類，人類也感染發(fā)病。人接觸動物或其產品經皮膚損傷而引起類丹毒。以局部感染為主，繼而發(fā)展成淋巴管炎，可轉變成關節(jié)炎。也可引起急性敗血癥或心內膜炎。二．致病性紅斑丹毒牡菌為紅斑丹毒絲菌病的病原體。70三．微生物學檢驗

（一）標本采集（二）檢驗程序

（三）檢驗方法1．直接鏡檢2．分離培養(yǎng)3．生化反應4．動物試驗2022/12/4三．微生物學檢驗（一）標本采集（三）檢驗方法2022/1271第五節(jié)陰道加特納菌第五節(jié)陰道加特納菌72一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應抵抗力一．生物學特性形態(tài)與染色73（一）形態(tài)與染色本菌革蘭染色視菌株和菌齡不同而異。本菌具有多形性，兩端鈍圓，無鞭毛，無莢膜，無芽胞。（一）形態(tài)與染色本菌革蘭染色視菌株和菌齡不同而異。本菌74（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，在一般營養(yǎng)瓊脂平板上不生長。在含5%人血瓊脂平板上置5%CO2，35～37℃培養(yǎng)24h后，形成針尖大小菌落；經48h后形成β溶血、圓形、光滑不透明的菌落。2022/12/4（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，在一般營養(yǎng)瓊75（三）生化反應

氧化酶（–），觸酶（–），尿素酶（–）。發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等，產酸不產氣。

2022/12/4（三）生化反應氧化酶（–），觸酶（–），尿素酶（–）76（四）抵抗力所有菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑青霉素、青霉素、萬古霉素和甲硝唑敏感；對萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐藥。（四）抵抗力所有菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑青霉77二．致病性陰道加特納菌和厭氧菌在陰道內過度生長，造成陰道正常菌群微生態(tài)平衡失調，而引起非特異細菌性陰道?。˙V）?？蓪е聥D產科多種嚴重并發(fā)癥。如子宮全切術后感染、絨毛膜炎等。本菌還能引起新生兒敗血癥和軟組織感染。二．致病性陰道加特納菌和厭氧菌在陰道內過度生長，造成陰道78并非GV陽性者都是BV，因為20～40%的正常婦女陰道也可檢出此菌。BV診斷標準：陰道分泌物增多，稀薄均質灰白色，有惡臭味。分泌物pH＞4.5～4.7。分泌物胺試驗陽性。鏡檢有線索細胞。

2022/12/4并非GV陽性者都是BV，因為20～40%的正常婦女陰道也79三．微生物學檢驗（一）標本采集（二）檢驗程序三．微生物學檢驗（一）標本采集80（三）檢驗方法

1．陰道分泌物直接檢查

直接濕片鏡檢：線索細胞涂片染色鏡檢：pH測定：陰道pH＞4.7，提示細菌性陰道炎。胺試驗：2．分離培養(yǎng)2022/12/4（三）檢驗方法1．陰道分泌物直接檢查2．分離培養(yǎng)20281分枝桿菌屬及檢驗分枝桿菌屬及檢驗82分枝桿菌屬主要特點是一類直或微彎曲、有分枝生長趨勢的桿菌。細胞壁脂質含量高，主要為分枝菌酸。具有抗酸性，革蘭染色不易著色，常用抗酸染色。專性需氧，營養(yǎng)要求特殊，大多數生長緩慢。不產內、外毒素和侵襲性酶等致病物質，其致病性與菌體成分有密切關系，所致疾病呈慢性。分枝桿菌屬主要特點是一類直或微彎曲、有分枝生長趨勢的桿菌。83分枝桿菌屬種類結核分枝桿菌復合群結核分枝桿菌牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌田鼠分枝桿菌非典型分枝桿菌麻風分枝桿菌光產色分枝桿菌暗產色分枝桿菌不產色分枝桿菌迅速生長分枝桿菌分枝桿菌屬分枝桿菌屬種類結核分枝桿菌復合群結核分枝桿菌非典型分枝桿菌麻84第一節(jié)結核分枝桿菌第一節(jié)結核分枝桿菌85一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應抵抗力變異性一．生物學特性形態(tài)與染色86形態(tài)與染色細長略彎，分枝生長趨勢。無芽孢，無鞭毛，部分菌株有莢膜。革蘭染色陽性，不易著色?？顾崛旧栃?，多數菌體含有一至數個異染顆粒。形態(tài)與染色細長略彎，分枝生長趨勢。87結核分枝桿菌（抗酸染色）結核分枝桿菌（抗酸染色）88培養(yǎng)特性生長條件：細胞內寄生菌，專性需氧，8%～12%CO2可刺激其生長。最適pH6.5～6.8。營養(yǎng)要求較高，必須在含有血清、卵黃、甘油、馬鈴薯以及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能生長。

生長現象：※生長緩慢，在一般的培養(yǎng)基中每分裂一代的速度為18～24h?！牧剂_氏培養(yǎng)基菌落特征：干燥、淡黃色、質地較硬的R型菌落※液體培養(yǎng)基：形成菌膜，有毒株呈索狀生長。培養(yǎng)特性生長條件：89結核分枝桿菌菌落結核分枝桿菌菌落90生化反應生化反應不活潑，不發(fā)酵糖類。觸酶陽性。與非結核分枝桿菌鑒別：耐熱觸酶試驗－；（非結核分枝桿菌＋）與牛分枝桿菌鑒別煙酸試驗＋；（牛分枝桿菌－）生化反應生化反應不活潑，不發(fā)酵糖類。觸酶陽性。91抵抗力抵抗力特點：“三耐四敏”※耐干燥、耐酸堿、耐孔雀綠（1:13000）※對濕熱、70％乙醇、紫外線、常用抗結核藥物（但長期使用易產生耐藥性）敏感。

結核分枝桿菌細胞壁含有大量脂質，酒精較易滲入細胞壁將其殺死，故對70%～75%的酒精敏感。但脂質可防止菌體內水分丟失，故對干燥的抵抗力特別強。抵抗力抵抗力特點：“三耐四敏”92變異性※典型形態(tài)－→多形性※R型菌落－→S型菌落※有毒－→無毒（用于制備疫苗）※抗結核藥敏感－→耐藥變異性※典型形態(tài)－→多形性93二．致病性與免疫性致病物質所致疾病免疫性與變態(tài)反應二．致病性與免疫性致病物質94致病物質脂質索狀因子：與該菌毒力有密切關系磷脂：分枝菌酸：與抗酸性有關蠟質D：具有佐劑作用硫酸腦苷脂：蛋白質糖類結核桿菌不產生內、外毒素，不產生侵襲性酶。致病物質脂質95所致疾病經多途徑感染，引起結核病，以肺結核多見類型：原發(fā)感染和繼發(fā)感染所致疾病經多途徑感染，引起結核病，以肺結核多見96免疫性與變態(tài)反應※抗結核免疫以細胞免疫為主※抗結核免疫屬帶菌免疫※抗結核免疫與Ⅳ型超敏反應同時出現免疫性與變態(tài)反應※抗結核免疫以細胞免疫為主97結核菌素試驗原理：用結核菌素進行皮膚試驗，以檢測受試者對結核桿菌是否有細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應的試驗。結果：根據注射部位是否出現紅腫判斷結果＜5mm為陰性

≥5mm為陽性

≥15mm為強陽性應用：選擇卡介苗接種對象；判斷卡介苗接種效果；輔助診斷嬰幼兒結核??；測定腫瘤患者細胞免疫狀態(tài)。結核菌素試驗原理：用結核菌素進行皮膚試驗，以檢測受試者對結核98結核分枝桿菌－－檢驗程序標本核酸檢測接種固體培養(yǎng)基可疑菌落涂片抗酸染色鏡檢抗體檢測慢性生長菌快速生長菌菌種鑒定標本前處理接種液體培養(yǎng)基接種小白鼠豚鼠臟器涂片鏡檢抗酸染色鑒定試驗結核分枝桿菌－－檢驗程序標本核酸接種固體培養(yǎng)基可疑菌落涂片抗99結核分枝桿菌－－涂片檢查直接涂片薄涂片厚涂片集菌涂片沉淀集菌法漂浮集菌法熒光顯微鏡檢查法：金剛胺O染色→熒光顯微鏡下檢查結核分枝桿菌－－涂片檢查直接涂片100抗酸染色－－報告方式報告方式鏡檢結果-仔細檢查300個視野未發(fā)現抗酸桿菌±300個視野內發(fā)現1～2條抗酸菌＋100個視野內發(fā)現1～9條抗酸菌2＋10個視野內發(fā)現1～9條抗酸菌3＋每個視野內發(fā)現1～9條抗酸菌4＋每個視野內發(fā)現9條以上抗酸菌抗酸染色－－報告方式報告方式鏡檢結果-仔細檢查300個視野未101結核分枝桿菌－－分離培養(yǎng)標本前處理：※目的：殺死雜菌；液化標本※方法：4％NaOH法；4％H2SO4法；胰酶-新潔爾滅法等培養(yǎng)基選擇：羅氏培養(yǎng)基、米氏培養(yǎng)基、小川培養(yǎng)基等接種培養(yǎng)結核分枝桿菌－－分離培養(yǎng)標本前處理：102培養(yǎng)結果記錄與報告方法報告方式培養(yǎng)結果＋斜面20個菌落以上，占斜面1/4以下2＋斜面上菌落生長面積占1/4以上，1/2以下3＋斜面上菌落面積占斜面1/2以上，3/4以下4＋斜面上菌落生長密集，成菌苔培養(yǎng)結果記錄與報告方法報告方式培養(yǎng)結果＋斜面20個菌落以上，103非典型分枝桿菌是指結核分枝桿菌與麻風分枝桿菌以外的分枝桿菌。大多為環(huán)境中的腐生菌。對酸堿比較敏感。對常用抗結核藥耐受。為條件致病菌，艾滋病患者易感染鳥復合分枝桿菌。非典型分枝桿菌是指結核分枝桿菌與麻風分枝桿菌以外的分枝桿菌。104麻風分枝桿菌－－生物學性狀為抗酸桿菌。細胞內寄生。有麻風桿菌寄生的細胞呈泡沫狀，稱為麻風細胞。體外人工培養(yǎng)尚未成功。犰狳是動物感染模型。麻風分枝桿菌－－生物學性狀為抗酸桿菌。105犰狳犰狳106麻風分枝桿菌－－臨床意義與微檢經呼吸道、接觸感染引起麻風病瘤型麻風（開放型）：傳染性強結核樣型（閉鎖性）：傳染性弱微檢：標本涂片抗酸染色是診斷麻風的主要依據麻風分枝桿菌－－臨床意義與微檢經呼吸道、接觸感染107麻風桿菌麻風桿菌108麻風病人麻風病人109第二節(jié)非典型分枝桿菌第三節(jié)分枝桿菌鑒定第四節(jié)麻風分枝桿菌第二節(jié)非典型分枝桿菌110需氧革蘭陽性桿菌及檢驗華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協和醫(yī)院熊艷需氧革蘭陽性桿菌及檢驗華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協和醫(yī)院111革蘭陽性桿菌菌屬間的鑒別

棒狀桿菌屬芽胞桿菌屬李斯特菌屬丹毒絲菌屬加特納菌屬形態(tài)棒狀桿菌有芽胞短桿、鏈或絲狀細桿或絲狀桿菌、多形性觸酶+++--動力-V+--對氧需氧，兼性厭氧需氧，兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧

V：炭疽芽胞桿菌陰性，其它芽胞桿菌陽性。革蘭陽性桿菌菌屬間的鑒別

棒狀桿菌屬芽胞桿菌屬李斯特菌屬丹毒112第一節(jié)棒狀桿菌屬

第一節(jié)棒狀桿菌屬113棒狀桿菌屬的共同特征

革蘭陽性多形態(tài)桿菌無莢膜、無鞭毛、無芽胞細菌呈不規(guī)則柵欄狀排列需氧或兼性厭氧觸酶試驗陽性細胞壁結構和血清學分析，證實與分枝桿菌屬、奴卡氏菌屬有共同的成分。

棒狀桿菌屬的共同特征革蘭陽性多形態(tài)桿菌114一．白喉棒狀桿菌

一．白喉棒狀桿菌115（一）生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性菌落特征生化反應抗原構造抵抗力（一）生物學特性形態(tài)與染色116形態(tài)與染色

細長彎曲、一端或兩端膨大的革蘭陽性桿菌。無莢膜、無芽胞、無鞭毛、無菌毛。細菌排列呈散在L、V、Y字形及不規(guī)則柵欄狀。

用美藍、Neisser法、Albert法等染色時，在細菌的一端或兩端有濃染的顆粒，此顆粒與菌體著色不同，稱為異染顆粒，為本菌重要形態(tài)學特征，對鑒別細菌有重要意義。

2022/12/4形態(tài)與染色細長彎曲、一端或兩端膨大的革蘭陽性桿菌。無117培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧，生長溫度為15–40℃，最適生長溫度為35–37℃，pH7.2–7.8。

營養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上雖能生長，但生長不良，形態(tài)不典型，大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或雞蛋的培養(yǎng)基上生長迅速，形態(tài)典型，異染顆粒明顯。

2022/12/4培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，生長溫度為15–40118菌落特征血平板：灰白、狹窄β溶血環(huán)。雞蛋斜面和血清斜面：生長迅速，灰白色有光澤菌落。亞碲酸鉀血平板：為選擇培養(yǎng)基，菌落呈黑色。菌落分為重型、輕型或中間型。

菌落特征血平板：灰白、狹窄β溶血環(huán)。119生化反應

觸酶（+），氧化酶（-）能分解葡萄糖、麥芽糖、果糖等，產酸不產氣。不分解乳糖、多數不分解蔗糖。靛基質試驗－、明膠液化－、尿素分解－2022/12/4生化反應觸酶（+），氧化酶（-）2022/12/2120抗原構造菌體O抗原：與分枝桿菌、奴卡菌有共同抗原。K抗原：型特異性抗原，不耐熱。

抗原構造121抵抗力對濕熱和一般消毒劑敏感。對冷和干燥有一定抵抗力。

抵抗力122（二）致病性致病物質：白喉外毒素由攜帶β-棒狀桿菌噬菌體的白喉桿菌產生。作用機制：抑制細胞內蛋白質的合成。經呼吸道飛沫傳播，引起白喉。假膜脫落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。（二）致病性致病物質：白喉外毒素123（三）免疫性抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。成人絕大多數具有免疫性，主要由于隱性感染所獲得的免疫力。錫克試驗用于檢測機體有無白喉抗毒素抗體存在。（三）免疫性抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。124（四）微生物學檢驗

標本采集

檢驗程序

檢驗方法生化反應毒力試驗（四）微生物學檢驗標本采集125標本采集用無菌長棉拭子，從疑為假膜的邊緣采集分泌物。

未見假膜的疑似患者或帶菌者可采集鼻咽部或扁桃體粘膜上的分泌物。標本采集用無菌長棉拭子，從疑為假膜的邊緣采集分泌物。126檢驗程序咽拭標本亞碲酸鉀血平板觀察菌落特征

直接涂片革蘭染色異染顆粒染色血平板

呂氏血清斜面

直接涂片革蘭染色異染顆粒染色涂片染色鏡檢生化反應毒力試驗檢驗程序咽拭標本亞碲酸鉀觀察菌落特征直接涂片血平板127檢驗方法標本直接涂片革蘭染色：觀察形態(tài)、染色性異染顆粒染色：觀察異染顆粒初步報告：檢出形似白喉棒狀桿菌分離培養(yǎng)呂氏斜面：生長迅速，涂片鏡檢異染顆粒明顯亞碲酸鉀血平板：黑色菌落檢驗方法標本直接涂片128生化反應根據糖發(fā)酵是否產酸可鑒別棒狀桿菌中的不同種。白喉棒狀桿菌發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖產酸，不分解蔗糖；尿素酶（–）、硝酸鹽還原試驗（+）等可用于與其他棒狀桿菌的鑒別。

生化反應根據糖發(fā)酵是否產酸可鑒別棒狀桿菌129毒力試驗意義：是鑒定白喉桿菌為致病菌株的重要依據方法艾立克平板毒力試驗對流電泳法協同凝集試驗動物實驗毒力試驗意義：是鑒定白喉桿菌為致病菌株的重要依據130二．其他棒狀桿菌二．其他棒狀桿菌131第二節(jié)需氧芽胞桿菌屬第二節(jié)需氧芽胞桿菌屬132芽胞桿菌屬共同特點絕大多數菌種在有氧條件下形成不大于菌體橫徑的芽胞除炭疽芽胞桿菌外均有動力和溶血能力非抗酸性營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好芽胞桿菌屬共同特點絕大多數菌種在有氧條件下形成不大于菌體橫133一．炭疽芽胞桿菌一．炭疽芽胞桿菌134（一）生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性菌落特征生化反應抗原構造抵抗力（一）生物學特性形態(tài)與染色135形態(tài)與染色為致病菌中最大的革蘭陽性桿菌，兩端齊平或凹陷，呈竹節(jié)狀，單個或呈短鏈狀排列。無鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成莢膜。人工培養(yǎng)或在外界環(huán)境中易產生芽胞，在活體或完整未經解剖的尸體內不形成芽胞，所以炭疽病尸體嚴禁解剖。2022/12/4形態(tài)與染色為致病菌中最大的革蘭陽性桿136培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好。

2022/12/4培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧。2022/12/2137菌落特征普通瓊脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，無光澤，邊緣不整齊，在低倍鏡下可見到菌落邊緣呈卷發(fā)狀。血液瓊脂平板：培養(yǎng)12～15h，菌落周圍無溶血環(huán)，18～24h后可有輕微溶血，而其他需氧芽胞桿菌大多數溶血明顯而快速。液體培養(yǎng)基中呈絮狀生長明膠培養(yǎng)基中呈倒置的杉樹有毒株在NaHCO3培養(yǎng)基中形成莢膜，菌落呈粘液狀，有拉絲。2022/12/4菌落特征普通瓊脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，無光澤，138

有毒株在NaHCO3血瓊脂平板上置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)18～24h，可產生莢膜，菌落由粗糙型變?yōu)檎骋盒?，而呈現半圓形，突起，有光澤的菌落。以接種針挑取時呈拉絲狀，此為鑒別菌落要點，而無毒株則形成粗糙型菌落。

有毒株在NaHCO3血瓊脂平板上置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)139生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不產氣。不分解乳糖。觸酶（+），VP（–），吲哚（–），尿素（–）。生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不140抗原結構炭疽毒素：由保護性抗原、致死因子、水腫因子組成的蛋白質復合物，后兩者單獨不能發(fā)揮生物活性作用，都必須與保護性抗原組合才能引起實驗動物的水腫致死。具有抗吞噬作用和免疫原性，故患炭疽后有免疫力。莢膜抗原：與細菌毒力有關，失去莢膜后毒力也就消失。該抗原具有高度特異性，在臨床診斷中有鑒別診斷價值?？乖Y構炭疽毒素：由保護性抗原、致死因子、水腫因子組成的蛋白141菌體抗原：耐熱、耐腐敗，無毒性，有種特異性。芽胞抗原：芽胞的外膜含有抗原決定簇，與皮質層一起組成炭疽芽胞桿菌芽胞的特異性抗原，此抗原具有免疫原性和血清學診斷價值。Ascoli熱沉淀反應：感染動物尸體組織浸出液煮沸半小時后，耐熱的菌體抗原不被破壞，能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應，稱Ascoli熱沉淀反應，對炭疽病具有一定的診斷價值。

2022/12/4Ascoli熱沉淀反應：感染動物尸體組織浸出液煮142抵抗力本菌繁殖體抵抗力與其它細菌相同，芽胞抵抗力很強。在干燥的土壤或者皮毛中可存活20余年。芽胞對碘和氧化劑敏感。耐藥性：本菌對磺胺類、青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星敏感。抵抗力本菌繁殖體抵抗力與其它細菌相同，芽胞抵抗力很強。143（二）致病性與免疫性致病物質：炭疽毒素、莢膜所致疾病經多途徑感染，引起炭疽病。臨床類型：肺炭疽、腸炭疽、皮膚炭疽、敗血癥。屬人畜共患傳染病，死亡率高。免疫性：病后可獲得持久性免疫力，再次感染者甚少。（二）致病性與免疫性致病物質：炭疽毒素、莢膜144（三）微生物學檢驗標本采集檢驗程序檢驗方法（三）微生物學檢驗標本采集145標本采集標本采集病人血液、痰、糞便、滲出液、腦脊液等。死亡病畜標本：死于敗血癥的動物，嚴禁宰殺、解剖，可在消毒皮膚后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。污染物品：皮革、獸毛、土壤等。標本處理：無雜菌污染標本直接接種，有雜菌污染標本先加熱殺死繁殖體和雜菌再接種。標本采集標本采集146已處理標本直接涂片增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)Ascoli試驗革蘭染色莢膜染色初步報告血平板戊烷脒瓊脂平板可疑菌落菌落涂片染色鏡檢鑒定試驗肉湯培養(yǎng)動物實驗動物死亡分離培養(yǎng)●噬菌體裂解●串珠試驗●青霉素抑制試驗已處理標本直接涂片增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)Ascoli試驗革蘭染色初147檢驗方法涂片染色鏡檢革蘭染色：涂片后升汞固定，革蘭染色發(fā)現革蘭陽性粗大桿菌、有莢膜，呈竹節(jié)樣排列可初步報告。分離培養(yǎng)：一般接種血平板，37℃培養(yǎng)24h后觀察菌落特點。污染的標本先加熱處理再接種。動物試驗：注射部位膠樣水腫，肝脾腫大，出血等。在芽胞桿菌屬中，除蠟樣芽胞桿菌毒素對動物有致病作用外，炭疽芽胞桿菌是唯一具有致病力者。

檢驗方法涂片染色鏡檢148鑒定試驗青霉素抑制試驗炭疽芽胞桿菌在含5IU/ml的青霉素培養(yǎng)基上能生長，而在含10、100IU/ml的青霉素培養(yǎng)基上受到抑制不生長。鑒定試驗青霉素抑制試驗149鑒定試驗串珠試驗與類炭疽芽胞桿菌鑒別炭疽芽胞桿菌受低濃度青霉素作用后，在形態(tài)上發(fā)生明顯的變化。如將本菌幼稚培養(yǎng)物接種于含0.05～0.5U/ml青霉素的培養(yǎng)基上，37℃6h，菌體腫大呈圓珠狀，稱串珠反應。此反應可能與青霉素抑制細菌胞壁的合成作用有關，為炭疽桿菌所特有，可用于與其他類炭疽芽胞桿菌的鑒別。鑒定試驗串珠試驗與類炭疽芽胞桿菌鑒別150鑒定試驗青霉素和串珠聯合試驗噬菌體裂解試驗與類炭疽芽胞桿菌鑒別NaHCO3毒力試驗有毒力的炭疽桿菌形成莢膜，菌落呈粘液型，無毒力的炭疽桿菌不形成莢膜，菌落呈粗糙型。鑒定試驗青霉素和串珠聯合試驗151鑒定試驗植物凝集素試驗根據炭疽芽胞桿菌菌體多糖是植物凝集素受體的原理。Ascoli熱沉淀試驗

用已知的抗炭疽桿菌抗體測定標本中未知的抗原。炭疽桿菌沉淀原具有耐高熱特征，在尸體組織和皮毛中數年仍能檢出，故可作追溯性診斷。2022/12/4鑒定試驗植物凝集素試驗2022/12/2152炭疽芽胞桿菌與其它需氧芽胞桿菌的鑒別

鑒別項目炭疽芽胞桿菌枯草芽胞桿菌蠟樣芽胞桿菌及其它需氧芽胞桿菌形態(tài)菌體兩端平整或凹陷兩端鈍圓兩端鈍圓莢膜+--動力-++菌落有小突起，邊緣呈卷發(fā)狀，粘稠菌落鋸齒狀粗糙菌落蠟樣或粗糙不粘稠菌落肉湯絮狀沉淀，上層清晰均勻混濁有菌膜均勻混濁有菌膜Ascoli+--溶血不溶血或微溶血++串珠試驗+--炭疽芽胞桿菌與其它需氧芽胞桿菌的鑒別鑒別項目炭疽芽胞桿菌枯153二．蠟樣芽胞桿菌二．蠟樣芽胞桿菌154（一）生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性菌落特征生化反應抵抗力（一）生物學特性形態(tài)與染色155形態(tài)與染色革蘭陽性大桿菌，兩端較鈍、鏈桿狀，長短不一，有鞭毛，無莢膜，可形成芽胞。形態(tài)與染色革蘭陽性大桿菌，兩端較鈍、鏈桿狀，長短不一156培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。普通瓊脂平板：可形成圓形、隆起、灰白色、不透明、R型蠟滴樣大菌落。血瓊脂平板：菌落呈淺灰色，似毛玻璃狀，菌落周圍有α或β溶血。2022/12/4培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。157

乳光反應或卵黃反應：在卵黃瓊脂平板上生長迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán)，即為乳光反應或卵黃反應。乳光反應或卵黃反應：158生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不產氣，不分解乳糖。VP（+），液化明膠。生化反應分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不產氣，不分解乳159抵抗力耐熱，抵抗力強,能耐受100℃30min。抵抗力耐熱，抵抗力強,能耐受100℃30min。160（二）致病性條件致病菌，主要引起食物中毒。臨床上分為兩種類型：腹瀉型：由不耐熱的腸毒素引起。嘔吐型：由耐熱的腸毒素引起。（二）致病性條件致病菌，主要引起食物中毒。161（三）微生物學檢驗

1．標本采集

除進行本菌的分離培養(yǎng)外，必須作活菌計數。因暴露于空氣中的食物，在一定程度上都受本菌污染，故不能因分離出蠟樣芽胞桿菌則認為是引起食物中毒的病原菌。

2．檢驗程序

（三）微生物學檢驗1．標本采集1623．檢驗方法

直接鏡檢：

活菌計數：一般認為蠟樣芽胞桿菌的活菌數大于105/mL時，即有發(fā)生食物中毒的可能。分離培養(yǎng)：鑒定

3．檢驗方法直接鏡檢：163第三節(jié)產單核李斯特菌第三節(jié)產單核李斯特菌164一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應抗原結構抵抗力一．生物學特性形態(tài)與染色165（一）形態(tài)與染色革蘭陽性小桿菌，直或稍彎，常呈V字形成對排列，有時呈絲狀，偶爾可見雙球狀。

多數菌體一端較大，似棒狀，易誤認為是污染的類白喉棒狀桿菌；又因菌體短小，三、五成鏈，并有β溶血性，易與鏈球菌混淆，用觸酶試驗加以區(qū)別。2022/12/4（一）形態(tài)與染色2022/12/2166在22～25℃環(huán)境中形成4根鞭毛，故在25℃肉湯培養(yǎng)液中運動活潑；而在37℃時僅形成1根鞭毛，動力緩慢。在22～25℃環(huán)境中形成4根鞭毛，故在25℃肉湯培養(yǎng)167（二）培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。4～45℃均能生長，最適溫度30～37℃。因在4℃能生長，故可進行冷增菌。

初時菌落極小似露珠狀、光滑透明，通過側光微顯藍綠色，37℃培養(yǎng)數日，菌落增大變成灰暗，血平板上的菌落有狹窄的β溶血環(huán)。

2022/12/4（二）培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。4～45℃168（三）生化反應1～2d內發(fā)酵葡萄糖、果糖、麥芽糖，產酸不產氣，在3～10d內可發(fā)酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖。觸酶陽性，VP（+），MR（+）。（三）生化反應1～2d內發(fā)酵葡萄糖、果糖、麥芽糖，產酸不169（四）抗原結構

分為4個血清型，1型主要感染嚙齒動物，各型對人類均可致病，但以1a和lb最為多見。本菌與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌及大腸埃希菌等具有共同抗原。2022/12/4（四）抗原結構分為4個血清型，1型主要感染嚙齒動物，各型170（五）抵抗力在土壤、糞便、飼料中能長期存活。耐鹽、耐堿、不耐酸。對熱敏感，對—般消毒劑敏感，70％的乙醇5min即可殺死本菌。（五）抵抗力在土壤、糞便、飼料中能長期存活。171二．致病性本菌常伴隨EB病毒引起傳染性單核細胞增多癥。二．致病性本菌常伴隨EB病毒引起傳染性單核細胞增172三．微生物學檢驗（一）標本采集（二）檢驗程序三．微生物學檢驗（一）標本采集173（三）檢驗方法

1．分離培養(yǎng)2．鑒定要點形態(tài)染色：革蘭陽性小桿菌。β溶血：本菌的β溶血環(huán)很窄，往往把菌落刮去，方可見菌落下面的β溶血環(huán)。動力試驗：25℃動力陽性。4℃能生長2022/12/4（三）檢驗方法1．分離培養(yǎng)2022/12/2174第四節(jié)紅斑丹毒絲菌第四節(jié)紅斑丹毒絲菌175一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應一．生物學特性形態(tài)與染色176（一）形態(tài)與染色

革蘭陽性桿菌，單個或形成短鏈狀，粗糙型菌落形成長絲狀。無鞭毛，無莢膜，無芽胞。2022/12/4（一）形態(tài)與染色革蘭陽性桿菌，單個或形成短鏈狀，177（二）培養(yǎng)特性厭氧或微需氧菌。初次分離需在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)，傳代后在有氧條件下也能生長。（二）培養(yǎng)特性厭氧或微需氧菌。初次分離需在厭氧環(huán)境中178（三）生化反應

氧化酶（–），觸酶（–），發(fā)酵葡萄糖、乳糖，產酸不產氣。

2022/12/4（三）生化反應氧化酶（–），觸酶（–），發(fā)酵葡萄糖、179二．致病性紅斑丹毒牡菌為紅斑丹毒絲菌病的病原體。主要發(fā)生在魚類、家畜、家禽和兔類，人類也感染發(fā)病。人接觸動物或其產品經皮膚損傷而引起類丹毒。以局部感染為主，繼而發(fā)展成淋巴管炎，可轉變成關節(jié)炎。也可引起急性敗血癥或心內膜炎。二．致病性紅斑丹毒牡菌為紅斑丹毒絲菌病的病原體。180三．微生物學檢驗

（一）標本采集（二）檢驗程序

（三）檢驗方法1．直接鏡檢2．分離培養(yǎng)3．生化反應4．動物試驗2022/12/4三．微生物學檢驗（一）標本采集（三）檢驗方法2022/12181第五節(jié)陰道加特納菌第五節(jié)陰道加特納菌182一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應抵抗力一．生物學特性形態(tài)與染色183（一）形態(tài)與染色本菌革蘭染色視菌株和菌齡不同而異。本菌具有多形性，兩端鈍圓，無鞭毛，無莢膜，無芽胞。（一）形態(tài)與染色本菌革蘭染色視菌株和菌齡不同而異。本菌184（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，在一般營養(yǎng)瓊脂平板上不生長。在含5%人血瓊脂平板上置5%CO2，35～37℃培養(yǎng)24h后，形成針尖大小菌落；經48h后形成β溶血、圓形、光滑不透明的菌落。2022/12/4（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，在一般營養(yǎng)瓊185（三）生化反應

氧化酶（–），觸酶（–），尿素酶（–）。發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等，產酸不產氣。

2022/12/4（三）生化反應氧化酶（–），觸酶（–），尿素酶（–）186（四）抵抗力所有菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑青霉素、青霉素、萬古霉素和甲硝唑敏感；對萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐藥。（四）抵抗力所有菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑青霉187二．致病性陰道加特納菌和厭氧菌在陰道內過度生長，造成陰道正常菌群微生態(tài)平衡失調，而引起非特異細菌性陰道?。˙V）?？蓪е聥D產科多種嚴重并發(fā)癥。如子宮全切術后感染、絨毛膜炎等。本菌還能引起新生兒敗血癥和軟組織感染。二．致病性陰道加特納菌和厭氧菌在陰道內過度生長，造成陰道188并非GV陽性者都是BV，因為20～40%的正常婦女陰道也可檢出此菌。BV診斷標準：陰道分泌物增多，稀薄均質灰白色，有惡臭味。分泌物pH＞4.5～4.7。分泌物胺試驗陽性。鏡檢有線索細胞。

2022/12/4并非GV陽性者都是BV，因為20～40%的正常婦女陰道也189三．微生物學檢驗（一）標本采集（二）檢驗程序三．微生物學檢驗（一）標本采集190（三）檢驗方法

1．陰道分泌物直接檢查

直接濕片鏡檢：線索細胞涂片染色鏡檢：pH測定：陰道pH＞4.7，提示細菌性陰道炎。胺試驗：2．分離培養(yǎng)2022/12/4（三）檢驗方法1．陰道分泌物直接檢查2．分離培養(yǎng)202191分枝桿菌屬及檢驗分枝桿菌屬及檢驗192分枝桿菌屬主要特點是一類直或微彎曲、有分枝生長趨勢的桿菌。細胞壁脂質含量高，主要為分枝菌酸。具有抗酸性，革蘭染色不易著色，常用抗酸染色。專性需氧，營養(yǎng)要求特殊，大多數生長緩慢。不產內、外毒素和侵襲性酶等致病物質，其致病性與菌體成分有密切關系，所致疾病呈慢性。分枝桿菌屬主要特點是一類直或微彎曲、有分枝生長趨勢的桿菌。193分枝桿菌屬種類結核分枝桿菌復合群結核分枝桿菌牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌田鼠分枝桿菌非典型分枝桿菌麻風分枝桿菌光產色分枝桿菌暗產色分枝桿菌不產色分枝桿菌迅速生長分枝桿菌分枝桿菌屬分枝桿菌屬種類結核分枝桿菌復合群結核分枝桿菌非典型分枝桿菌麻194第一節(jié)結核分枝桿菌第一節(jié)結核分枝桿菌195一．生物學特性形態(tài)與染色培養(yǎng)特性生化反應抵抗力變異性一．生物學特性形態(tài)與染色196形態(tài)與染色細長略彎，分枝生長趨勢。無芽孢，無鞭毛，部分菌株有莢膜。革蘭染色陽性，不易著色?？顾崛旧栃?，多數菌體含有一至數個異染顆粒。形態(tài)與染色細長略彎，分枝生長趨勢。197結核分枝桿菌（抗酸染色）結核分枝桿菌（抗酸染色）198培養(yǎng)特性生長條件：細胞內寄生菌，專性需氧，8%～12%CO2可刺激其生長。最適pH6.5～6.8。營養(yǎng)要求較高，必須在含有血清、卵黃、甘油、馬鈴薯