搖瓶發(fā)酵優(yōu)化-正交實驗實驗方案

搖瓶發(fā)酵優(yōu)化——正交實驗實驗方案實驗內容：運用實驗室搖瓶發(fā)酵技術，研究不同的鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽及碳源用量對銅綠假單胞菌搖瓶發(fā)酵的影響。實驗材料：銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginosa超凈工作臺；高壓蒸汽滅菌鍋；旋轉式搖床；磁力攪拌器；純水機；三角搖和5mL燒杯；玻璃棒等。試劑耗材：蛋白胨；牛肉膏；NaCl；NaNO3；K2HPO4;KH2PO4；MgSO4;CaCl2;KCl；NaCl；酵母粉；大豆油。實驗因素和水平：本實驗研究鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽及碳源用量四個因素及不同用量三個水平。水平因素MgSO4(g/L)KCl(g/L)NaCl(g/L)大豆油（mL）10.111020.2250.330.33100.9L9（34）正交表實驗數因素MgSO4KClNaCl大豆油實驗結果10.111020.1250.330.13100.940.2150.950.2210060.2310.370.31100.380.3210.990.3350均值123極差具體實驗方法：1、種子培養(yǎng)基及母液的配制種子培養(yǎng)基（g/L）:蛋白胨10,牛肉膏10,NaCl5,pH7.0按種子培養(yǎng)基配方配制100mL培養(yǎng)基裝入250mL三角燒瓶，塞上瓶塞。（50mL/瓶，2瓶）1000mLK2HPO440g/LKH2PO440g/LMgSO4CaCl21g//LKCl10g/L共921830m540m，600mL含共有成分的培養(yǎng)基。2、器具及種子培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌20min.培養(yǎng)皿、接種針和移液管用報紙包好，和配好的種子培養(yǎng)基一起高壓蒸汽滅菌，121℃，20min.3、菌種的活化將種子培養(yǎng)基分裝于塑料培養(yǎng)瓶中，將銅綠假單胞菌從冰箱中取出，在超凈工作臺上，用接種針接種于種子培養(yǎng)基中，使其活化。4、按預定方案配制培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）:NaNO32.5,K2HPO44,KH2PO44,MgSO40.2,CaCl20.1,KCl1,NaCl1,酵母粉1，炸貨油5%，pH6.5200m150mL三角瓶中，每瓶30mL。5、發(fā)酵培養(yǎng)基的滅菌將三角搖瓶用三角瓶封口膜封好，于121℃滅菌20min。6、接種于超凈工作臺上用移液槍各接種2mL活化的銅綠假單胞菌于各三角瓶中。7、培養(yǎng)將接種好的三角瓶放在旋轉式搖床上培養(yǎng)，設定好溫度與轉速。℃冰箱保8、測定℃冰箱保發(fā)酵3天后，進行排油圈和表面張力的測試。測定剩下的發(fā)酵液收集起來置4存?zhèn)溆谩４鎮(zhèn)溆谩?、數據整理和分析用正交設計助手整理數據和作圖