免疫增殖病的檢測(cè)方法

免疫增殖病的檢驗(yàn)何印蕾第一節(jié)免疫增殖病的分類一、定義免疫增殖?。╥mmunoproliferativedisease）是指免疫器官、免疫組織或免疫細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞和單核—巨噬細(xì)胞）異常增生（包括良性或惡性）所致的一組疾病。

這類疾病的表現(xiàn)有免疫功能異常及免疫球蛋白質(zhì)和量的變化。二、免疫增殖病的分類增殖細(xì)胞疾病T細(xì)胞ALL、淋巴母細(xì)胞瘤、部分非霍奇金淋巴瘤等。B細(xì)胞CLL、MM、傳單、原發(fā)性巨球蛋白血癥、淋巴瘤等組織-單核細(xì)胞急單、急性組織細(xì)胞增多癥等其它毛細(xì)胞白血病、其他霍奇金病等第二節(jié)免疫增殖病的免疫損傷機(jī)制一、漿細(xì)胞異常增生漿細(xì)胞異常增生是指單克隆漿細(xì)胞異常增生并伴有單克隆免疫球蛋白或其多肽鏈亞單位合成異常。

對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的起源觀察表明，骨髓瘤細(xì)胞起源于骨髓中的前B細(xì)胞進(jìn)入淋巴細(xì)胞階段，當(dāng)受到抗原刺激后，其增殖產(chǎn)生記憶的B細(xì)胞，B細(xì)胞在淋巴結(jié)中完成免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換，可變成為漿細(xì)胞的瘤細(xì)胞并移至骨髓定居并增殖。在通常情況下IL-6是支持漿細(xì)胞增殖分化的關(guān)鍵因子，所以漿細(xì)胞的瘤細(xì)胞的持續(xù)增殖當(dāng)有IL-6的持續(xù)高水平存在。而臨床檢測(cè)表明骨髓瘤患者血清IL-6確有異常升高。因此，高水平的IL-6是漿細(xì)胞瘤的原因之一。二、正常體液免疫抑制正常的體液免疫是B細(xì)胞的增殖分化產(chǎn)生效應(yīng)的過(guò)程，一系列細(xì)胞因子將有序地啟動(dòng)上述過(guò)程，IL-4可啟動(dòng)休止期的B細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期；IL-5促進(jìn)B細(xì)胞繼續(xù)增殖；IL-6促使B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，正常條件下IL-6可以反饋抑制IL-4控制B細(xì)胞的增殖分化過(guò)程，上述過(guò)程構(gòu)成了一個(gè)生物信息調(diào)節(jié)回路，恰到好處地控制體液免疫應(yīng)答過(guò)程的有序進(jìn)行。

漿細(xì)胞瘤患者體內(nèi)IL-6水平異常增高，其直接的效應(yīng)是抑制IL-4的產(chǎn)生，從而抑制了整個(gè)體液免疫反應(yīng)的過(guò)程。另外，漿細(xì)胞瘤可以分泌大量無(wú)抗體活性的免疫球蛋白，其Fc段與正常B細(xì)胞和原漿細(xì)胞以及其它有Fc受體的細(xì)胞結(jié)合，這些細(xì)胞表面將被無(wú)活性的免疫球蛋白封閉，影響對(duì)其他生物信息的接收，并可阻斷B細(xì)胞的增殖、發(fā)育和影響抗原提呈。三、異常免疫球蛋白增生所造成的病理?yè)p傷漿細(xì)胞異常增生的后果是產(chǎn)生大量的單克隆型免疫球蛋白或其片段，這類免疫球蛋白或片段無(wú)正常的免疫功能。多為一種類型或?yàn)橹劓溁蜉p鏈，其含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常的免疫球蛋白。這些惡性增殖的免疫球蛋白可以沉積于組織，造成組織變性和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，導(dǎo)致相應(yīng)器官的功能障礙，因其血漿濃度過(guò)高而導(dǎo)致血液粘稠度增加，產(chǎn)生一系列直接或間接的病理?yè)p害。第三節(jié)常常見見免疫球球蛋白增增殖病單克隆免疫球球蛋白增殖病病是指患者體體內(nèi)存在異常常增多的單克克隆免疫球蛋蛋白的一類疾疾病。免疫球蛋白電電泳位置在丙丙種球蛋白區(qū)區(qū)域，故又稱稱丙種球蛋白白增殖病，由由于單克隆細(xì)細(xì)胞增生，所所以其產(chǎn)生的的免疫球蛋白白理化性質(zhì)高高度均一，但但無(wú)抗體及其其它免疫活性性，所以這類類免疫球蛋白白亦叫副蛋白白或M蛋白。。M蛋白可通通過(guò)腎小球從從尿中排出，，即本-周蛋蛋白。一、多發(fā)性骨骨髓瘤(一)定義多多發(fā)性骨髓髓瘤（multiplemyelomaMM)是是漿細(xì)胞增生生的惡性腫瘤瘤，其免疫學(xué)學(xué)特征:血清清中和尿中出出現(xiàn)M蛋白、、血清中正常常Ig水平明明顯降低、骨骨髓中不成熟熟的漿細(xì)胞比比例顯著升高高。(二)、臨床床表現(xiàn)和病理理變化1、早期：無(wú)特殊殊癥狀，僅表表現(xiàn)為ESR增快，血中中檢出M蛋白白、蛋白尿、、漿細(xì)胞增多多。2、典型病人人癥狀及病理理變化：(1)骨髓瘤瘤細(xì)胞增生，，浸潤(rùn)和破壞壞骨組織，造造成骨質(zhì)疏松松和溶骨性病病變，導(dǎo)致骨骨痛和不同部部位的骨折；；(2)、惡性性增殖的骨髓髓瘤細(xì)胞代替替了骨髓中的的正常成分，，引起貧血、、粒細(xì)胞、血血小板減少，，由于M蛋白白增高，引起起血粘增加，，或沉積于腎腎小管中，造造成腎小管上上皮細(xì)胞淀粉粉樣變性，發(fā)發(fā)生腎病綜合合征，嚴(yán)重時(shí)時(shí)可導(dǎo)致腎衰衰。血粘增高高可引起神經(jīng)經(jīng)功能障礙。。(3)、骨髓髓瘤細(xì)胞浸潤(rùn)潤(rùn)其它組織時(shí)時(shí)，可引起其其相關(guān)組織或或器官的病變變。(三)、分類類根據(jù)M蛋白的的類別不同可可分為：IgG型：約約占50~60%IgA型：約約占20~25%IgD型約：：占1~2%IgE型約：：罕見根據(jù)漿細(xì)胞合合成功能不全全分類可分為為：輕鏈病和重鏈鏈病二、原發(fā)性巨巨球蛋白血癥癥是一種伴有血血清IgM增增加的B細(xì)胞胞增殖病。病病因不明。臨臨床癥狀：主主要表現(xiàn)為IgM過(guò)多所所致的血液高高粘性綜合征征，另外貧血血、肝脾、淋淋巴結(jié)腫大、、反復(fù)感染也也常見。三、重鏈病由于漿細(xì)胞發(fā)發(fā)生突變并異異常增殖，合合成功能障礙礙，只產(chǎn)生免免疫球蛋白的的重鏈或有缺缺陷的重鏈，，不能與輕鏈鏈組成完整的的免疫球蛋蛋白分子，致致使血清中和和尿中出現(xiàn)大大量游離的無(wú)無(wú)免疫功能的的重鏈，稱為為重鏈病。四、良性單克克隆丙種球蛋蛋白病是指血清中出出現(xiàn)M蛋白，，而不伴有漿漿細(xì)胞惡性性增殖的疾病病。本病一般般無(wú)癥狀，往往往因其它疾疾病就診時(shí)發(fā)發(fā)現(xiàn)血中有M蛋白。如果果尿中出現(xiàn)本本-周氏蛋白白則是危險(xiǎn)信信號(hào)。第四節(jié)免免疫檢測(cè)測(cè)方法免疫球蛋白異異常增生病的的實(shí)驗(yàn)室診斷斷主要依靠血血液學(xué)和免疫疫學(xué)手段，其其中免疫學(xué)檢檢測(cè)尤為重要要。常用以下下方法進(jìn)行檢檢測(cè)：一、血清蛋白白區(qū)帶電泳蛋白質(zhì)區(qū)帶電電泳是血清蛋蛋白的經(jīng)典分分析方法，血血清(或尿液液)標(biāo)本中不不同性質(zhì)的蛋蛋白質(zhì)可明顯顯分開形成不不同的區(qū)帶，，通過(guò)正常的的電泳圖譜進(jìn)進(jìn)行比較分析析，可發(fā)現(xiàn)患患者電泳圖圖譜有一狹窄窄而濃縮的集集中帶，即M區(qū)帶。如下下圖二、免疫球蛋蛋白定量測(cè)定定常用單向擴(kuò)散散法和免疫濁濁度法。惡性性單克隆丙丙種球蛋白病病呈現(xiàn)某一類類丙種球蛋白白的顯著增高高(>30mg/ml)。良性單克克隆丙種球蛋蛋白病增高不不顯著，一般般在20mg/ml以下下。三、免疫球蛋蛋白的分類鑒鑒定(一)、免疫疫電泳免疫電泳是將將區(qū)帶電泳和和免疫擴(kuò)散結(jié)結(jié)合起來(lái)的一一種免疫學(xué)分分析法。血清清標(biāo)本先經(jīng)區(qū)區(qū)帶電泳將各各種蛋白成分分分開，繼而而用各種特異異性抗血清進(jìn)進(jìn)行免疫擴(kuò)散散，根據(jù)M蛋蛋白在免疫電電泳中所形成成的特殊沉淀淀弧，觀察其其電泳遷移位位置與抗原特特異性，可將將M蛋白的的免疫球蛋白白類型和其輕輕鏈型加以鑒鑒定。圖26-31、如果待測(cè)標(biāo)本本與某型球蛋蛋白重鏈及輕輕鏈抗血清產(chǎn)產(chǎn)生相同遷移移度的特殊沉沉淀弧，提示示存在單克隆隆丙種球蛋白白(M蛋白)，此現(xiàn)象多多見于IgG、IgA、IgM型多發(fā)性骨骨髓瘤或原發(fā)發(fā)性巨蛋白血血癥。2、在同一抗輕輕鏈血清的反反應(yīng)中，同時(shí)時(shí)出現(xiàn)兩條相相鄰的特殊沉沉淀弧，則可可能是除M蛋蛋白外還存在在游離輕，偶偶爾也可見兩兩種M蛋白，，此時(shí)應(yīng)進(jìn)一一歩測(cè)定尿中中的本-周蛋蛋白。3、患者血血清僅與其中中一種抗輕鏈鏈抗血清產(chǎn)生生一種特殊的的沉淀弧，而而其它五種抗抗血清均不產(chǎn)產(chǎn)生沉淀弧，，這種情況可可能是：(1)伴有腎腎功能不全的的輕鏈病，游游離輕鏈較少少?gòu)哪蛑信懦龀龆鴾粲谘褐校?2)存在輕輕鏈的四分子子多聚體，分分子量大，不不易從尿中排排出而存于血血液中；(3)尚未發(fā)發(fā)現(xiàn)的新重鏈鏈的免疫球蛋蛋白。4、若患者血血清只與IgG、IgA或IgM中的一種種抗重血清產(chǎn)產(chǎn)生特殊沉淀淀弧，但在兩兩抗輕鏈抗血血清中無(wú)沉淀淀弧，提示可可能存在重鏈鏈病。5、非分泌型型骨髓瘤血清清標(biāo)本在免疫疫電泳中均不不出現(xiàn)特殊沉沉淀弧。(二)免疫選選擇電泳將含抗k或r血清的瓊瓊脂制成薄層層瓊脂板，打打孔后加入待待測(cè)血清進(jìn)行行火箭電泳，，與標(biāo)本相應(yīng)應(yīng)的免疫球蛋蛋白形成火箭箭樣沉淀峰。。然后于孔的的兩側(cè)各挖一一槽，加入某某型免疫球蛋蛋白的抗血清清或另一型輕輕抗血，溫育育擴(kuò)散后，按按沉淀弧形成成的情況，進(jìn)進(jìn)行鑒定。。(三)免疫固固定電泳將待測(cè)血清或或其它標(biāo)本在在瓊脂平板上上作區(qū)帶電泳泳，分離后于于其上覆蓋含含抗k或r輕輕鏈或各類重重鏈的抗血清清濾紙，當(dāng)抗抗體與某區(qū)帶帶中的單克隆隆免疫球蛋白白結(jié)合后，便便形成復(fù)合物物而沉淀下來(lái)來(lái)，再通過(guò)漂漂洗與染色，，呈現(xiàn)濃而狹狹窄的著色區(qū)區(qū)帶，即可判判斷單克隆丙丙種球蛋白的的輕鏈或重鏈鏈型別。（四）其它檢檢測(cè)方法本周蛋白檢測(cè)測(cè)：多發(fā)性骨骨髓病陽(yáng)性率率極高本周蛋白在PH5.0的的條件下，加加熱至50~60oC時(shí)出現(xiàn)沉淀，，繼續(xù)加熱至至90oC后又重重新溶溶解。。根據(jù)據(jù)這種種理化化性質(zhì)質(zhì)，又又將其其稱為為凝溶溶蛋白白。小結(jié)：：1、掌掌握免免疫增增殖病病的定定義2、熟熟悉免免疫增增殖病病的免免疫損損傷機(jī)機(jī)制3、熟熟悉常常見的的免